LUCRRI PRACTICEStudiul celulei1. Demonstrarea prezenei membranei plasmatice i a permeabilitii sale selective

Materiale necesare: un bulb de ceap plante acvatice lame lamele un vas cu ap soluie concentrat de zaharoz sau de NaCl alcool etilic bisturiu pens hrtie de filtru microscop

Mod de lucru: se secioneaz un bulb de ceap de mai multe ori, pn se obin buci foliare de cca 1 cm2. se desprinde cu pensa epiderma superioar (de pe partea concav) se monteaz fragmentul pe o lam de sticl ntr-o pictur de ap (pt. a evita deshidratarea) se analizeaz la microscop preparatul cu obiectivele 10x, apoi 20x se observ componentele principale ale unei celule: membrana, citoplasma i nucleul pe una din laturile lamelei ce acoper preparatul se pune o picatur din soluia concentrat de zaharoz sau NaCl pe cealalt latura a lamelei se absoarbe apa cu o bucaic de hrtie de filtru se observ cum, treptat, soluia de zaharoz/NaCl ia locul apei absorbite observat la microscop, se constat plasmoliza desprinderea treptat a protoplastului/membranei celulare de peretele celular, mai nti la coluri, dup care i de pereii laterali; fenomenul se datoreaz scderii volumului vacuolar prin pierderea unei anumite cantiti de ap, datorita fenomenului de osmoz se procedeaza n sens invers, adic, se depune pe o latura a lamelei o pictur de ap i se absoarbe cu hartia de filtru soluia de zaharoz/NaCl pe latura opus sa observ la microscop c protoplastul revine la starea iniial; vacuola i mrete volumul, iaar membrana plasmatic se ataeaz strns de peretele celular; fenomenul poart numele de deplasmoliz i se datoreaz tot fenomenului de osmoz

2. Evidenierea micrii de rotaie a plasmei i a cloroplastelor la ciuma apelor (Elodea canadensis)

Materiale necesare: frunze tinere de ciuma apelor (plant acvatic) lam lamele pens microscop fotonic (optic)

Mod de lucru: se detaeaz cu ajutorul unei pense o frunz tnr de pe tulpina de ciuma apelor se pune fragmentul pe o lam ntr-o pictur de ap se acoper cu lamela se analizeaz la microscop mai nti cu obiectivul 10x i apoi cu 40x se observ o micare de rotaie a plasmei i a cloroplastelor lenticulare n jurul vacuolelor

3. Evidenierea cromoplastelor la morcov (Daucus carota) i la ptlgeaua roie (Lycopersicum esculentum)

Materiale necesare: rdcini tuberizate de morcov (rdcina este comestibil; are i rol de depozit) fructe roii de ptlgea lame i lamele de sticl brici anatomic ac spatulat vas Petri cu ap microscop fotonic (optic)

Mod de lucru: se fac seciuni transversale (extrem de fine!) prin rdcina tuberizat de morcov imediat dup secionare se pun n vasul Petri cu ap se alge seciunea cea mai fin i se pune pe lam ntr-o pictur de ap se acoper cu lamela cu obiectivul 10x se fixeaz o poriune din esut, care apoi se analizeaz cu obiectivul 40x se observ celule poligonale uninucleate i numeroase cromoplaste portocalii de form acicular se ia fructul de ptlgea se ndeprteaz peretele extern (coaja) cu bisturiul se face o seciune foarte fin prin partea crnoas a fructului se pune seciunea pe o lam de sticl ntr-o pictur de ap se acoper cu o lamel analiznd preparatul cu obiectivul 40x, se observ un numr mare de celule sferice sau ovoidale izolate care conin cte un nucleu central i numeroase cromoplaste roii-portocalii

4. Evidenierea granulelor de amidon/leucoplastelor la cartof (Solanum tuberosum)

Materiale necesare: tuberculi de cartof lame i lamele de sticl bisturiu ac spatulat iod n iodur de K

Mod de lucru: cu ajutorul bisturiului se secioneaz tuberculul de cartof cu acul spatulat se rade din esutul de depozitare al tuberculului masa obinut se pune pe lam ntr-o pictur de ap la unul din capetele lamei se pune o pictur se iod in KI se acoper preparatul cu o lamel excesul de colorant se ndeprteaz cu o bucic de hrtie de filtru colorantul determin colorarea n albastru a granulelor de amidon se analizeaz preparatul astfel obinut la microscop cu obiectivul 40x i se observ granulele de form oval ce prezint un punct numit hil, n jurul cruia se depune n straturi amidonul hilul este sferic, foarte mic i excentric

5. Evidenierea grsimilor la seminele de dovleac (Cucurbita pepo)

Materiale necesare: semine de dovleac lame i lamele de sticl bisturiu ac spatulat colorantul SudanIII (se folosete pt. lipide)

Mod de lucru: cu ajutorul bisturiului se secioneaz longitudinal smna de dovleac se detaeaz un fragment din esutul endospermatic (endos=intern; spermas=smn) pe o lam se pune o pictur de colorant SudanIII n colorant se pune fragmentul de esut preparatul se acoper cu lamela la microscop (20x-40x) se observ numeroase formaiuni sferice de culoare galben, care reprezint grsimile

6. Evidenierea cristalelor de oxalat de Ca n catafilele de pe bulbul de ceap (Allium cepa)

Materiale necesare: catafile (foitele externe colorate galben-brun) de pe bulbul de ceap ap glicerinat (deoarece preparatul este rigid, deci, pt. a nu ramne goluri de aer) pens lame i lamele de sticl microscop fotonic

Mod de lucru: se detaeaz cu o penset un fragment de catafil fragmentul se pune pe lam ntr-o pictur de ap glicerinat se acoper cu lamela preparatul se analizeaz la microscop cu obiectivul 40x se observ celule prozenchimatice (cu diametre inegale) care conin n citoplasma lor numeroase cristale prismatice, lungi, incolore, strlucitoare

7. Evidenierea diviziunii mitotice la ceap (Allium cepa)

Materiale necesare: bulbi de ceap borcane de sticl (cu un diametru ce permite suspendarea bulbilor de ceap) soluie apoas de colchicin 0,1% (alcaloid extras din brndua de toamn Colchicum autumnale; se folosete pt. stoparea activitii fusului de diviziune) alcool etilic absolut i acid acetic glacial n raport de 3:1 (soluie Carnoy folosit pt. fixarea probelor) HCl 1N carmin acetic (colorant) reactiv Schiff (fuxin bazic decolorat colorant) lame i lamele etuv termostat (pt. deshidratare) microscop fotonic

Mod de lucru: bulbii de ceap se suspend pe gura unor borcane pline cu ap dup 3-5 zile bulbii formeaz primele radicele (radacini tinere) cnd acestea au atins lungimea de 0,5-1 cm se recolteaz se introduc n soluia de colchicin 0,1% se in 2 ore la frigider se ndeprteaz soluia de colchicin i se toarn peste radicele soluie Carnoy pt. fixarea probelor se las 12-24 h la frigider se ndeprteaz fixatorul peste radicele se toarn HCl 1N la 60oC (se distruge ce a mai rmas din materialul genetic) probele se in n etuv timp de 5 min se ndeprteaz HCl se adaug colorant (reactivul Schiff) dupa cca 30 min colorarea probelor biologice este optima (ciclam-fucsia) pe o lamel de sticl se pune o pictur de carmin acetic n carmin se introduce vrful colorat al radicelei se acoper cu o lamel se pune peste lamel o bucat de hrtie de filtru se apas puternic cu degetul peste hrtie pt. a extrage excesul de colorant dintre lam i lamel i pt. a realiza o prim etalare a materialului biologic se continu etalarea prin presare sacadat a lamelei cu un beior pn cnd materialul biologic este uniform distribuit preparatele ntocmite se analizeaz la microscopul fotonic cu obiectivul 40x se observ celule n diverse faze ale mitozei care pot fi desenate sau fotografiate

8. Evidenierea diviziunii meiotice la secar (Secale cereale)

Materiale necesare: spice de secar aflate n stadiul de burduf (stadiu specific n timpul formrii gameilor brbteti sau femeieti n inflorescena care va deveni purttoare de semine; un spic = o inflorescen) aceste spice conservate n soluia Carnoy (alc. et. abs. i ac. acetic glacial 3/1) carmin acetic lame i lamele spirtier microscop

Mod de lucru: se depun pe o lam de sticl 2 picturi de carmin acetic se desprinde din spic un spicule se depune spiculeul pe colul lamelei cu ajutorul unui ac spatulat se scot din fiecare floare fertil a spiculeului 3 antere (poriuni mai dilatate ale staminei n care are loc meioza) cele 3 antere se introduc n picturile de carmin se secioneaz cu acul spatulat de 2-3 ori transversal, a.. sunt golii sacii polenici, deci devin libere celulele aflate n diviziune se nclzete lama la flacra unei spirtiere pn la emisia de vapori materialul de pe lama se acoper cu o lamel peste lamel se pune o bucat de hrtie de filtru se apas uor cu degetul pt. extragerea excesului de carmin preparatul astfel obinut se analizeaz la microscop cu obiectivele 10x i 20x se observ diferite faze ale meiozei I i II