7/24/2019 LP1_Cultivarea Celulelor HEK293T

1/2

Cultivarea celulelor HEK293T

Materiale si aparatura necesare:

- Mediu de cultura DMEM suplimentat cu 10% ser fetal bovin, L-

glutamina si Penicilina/Streptomicina 100!/ml / 100"g/ml#- Solutie tampon fosfat salin P$S#- Pipete serologice sterile ml/&ml/10ml#, recipienti de plastic, tuburi

de 1&ml/&0ml- Pipetor automat- 'entrifuga cu rotor pentru tuburi de 1&ml/&0ml- (ota cu )u* laminar- +ncubator .' si &% '0- $aie de apa .'- ripsina/ED 00&%

Important!!!

+nainte de utili2are mediul de cultura trebuie preincal2it la .'3

Dezghetarea stocului e celule HEK293T e la azot lichi

1# Dupa ce au fost scoase din tancul de a2ot lic4id, celulele se de2g4eata

rapid pe baia de apa la .' pentru min

# 'elule se transfera intr-un tub conic de 1&ml ce contine 10ml mediu de

cultura

# Se centrifug4ea2a min la 1&00g pentru a depune celulele si se

indepartea2a supernatantul

5# Peletul celular se resuspenda in ml de mediu si se transfera intr-un

recipient de plastic )as6# de &cmce contin 7 ml de mediu de cultura

preincal2it la .'

'elulele se tin in incubator la .' si &% '0

8# doua 2i se sc4imba mediul de cultura cu 10ml de mediu proaspat

Mentinerea in cultura a celulelor HEK293T

Mediu de cultura al celulelor trebuie sc4imbat la 9ecare 2ile sau mai des,

in functie de rata de crestere a acestora +n mod normal, celulele (E:;trebuie pasate cand gradul de con)uenta depaseste 70%

7/24/2019 LP1_Cultivarea Celulelor HEK293T

2/2

Important!!!

Manipularea celulelor (E:; se face cu mare gri