CUPRINS

CUPRINS

INTRODUCERE

2

1.IMPORTANA CULTIVRII PLANTELOR MEDICINALE 1.1 Menta- istoric, rspndire, taxonomie, descriere, compoziie chimic i importana

4

5

2.SPECIILE MICROBIENE LUATE N STUDIU 2.1 Staphylococcus aureus 2.2 Escherichia coli 2.3 Salmonella 2.4 Klebsiella pneumoniae 1212

14

16

19

2.5 Enterococcus faecalis 2.5 Candida albicans 2122

3.STADIUL ACTUAL AL CUNOASTERII N DOMENIU 24

4.

5.

MATERIAL I METODE REZULTATE I DISCUII CONCLUZII ANEXE BIBLIOGRAFIE

26 33

38

39

42

INTRODUCERE

Plantele medicinale sunt specii vegetale care acumuleaz n unele pri ale plantei diverse principii active utile n tratarea diferitelor afeciuni ale corpului uman sau animal.

Omul a folosit resursele naturale de la nceputul existenei sale. El a gsit n lumea vegetal i animal mijloace de existen, hran, mbrcminte, iar pentru remedierea suferinelor i-a sporit mereu tezaurul de plante tmduitoare de leac(3). Pn n urm cu ctva timp, aproape toate leacurile folosite de om erau de origine vegetal (5). Odat cu dezvoltarea chimiei au aprut i cele de sintez. De cele mai multe ori efectul folosirii plantelor medicinale este mai lent, necesit un tratament de lung durat, dar este mai puin riscant i mai ieftin.

Numeroase studii tiinifice au demonstrat c medicamentele de sintez, cu structuri necunoscute organismului uman, pot declana reacii de respingere, cu toxicitate i uneori, urmri destul de ntrziate. Agresiunea produselor de sintez asupra organismului uman, precum i reaciile de respingere a organismului, determin n primul rnd reacii de tip alergic, da i multe alte efecte (5). Tot mai muli sunt cei care cunosc efectele dezastruase ale medicamentelor de sintez asupra sntii i renun la tratamentele aleopate i la medicina convenional, apelnd la tratamente naturiste i plante medicinale, regimuri alimentare de purificare, programe de dezintoxicare a organismului de substane chimice.

Ovidiu Bojor susine c cel puin 50% din medicamente pot fi nlocuite cu produse din plante (6). Plantele medicinale i aromatice reprezint surse inepuizabile de materii prime pentru industria alimentar i industria farmaceutic.

Flora spontan nu poate asigura necesarul de materie prim vegetal n continu cretere i de aceea s-a trecut treptat la cultivarea unui numr nsemnat de specii de plante (3).Prin cultura plantelor medicinale se pot valorifica unele terenuri mai puin productive, asigur cultivatorilor nsemnate venituri, pot fi valoroase plante ornamentale sau melifere, iar recolta de plante medicinale constituie un important material de export.

Cultura plantelor medicinale este important i prin faptul c acestea sunt, de regul, culturi ecologice sau chiar biologice. Nu le este permis aplicarea la aceste culturi de pesticide care s polueze produsul finit care servete la vindecarea oamenilor.

n ultimul timp, n industria farmaceutic i cosmetic, se utilizeaz tot mai mult materie prim vegetal provenit din zone rustice, nepoluate, cum sunt numeroase n ara noastr. Se tie c marile companii farmaceutice sau cosmetice occidentale cumpr diverse produse vegetale, mai ales plante medicinale recoltate din flora spontan, din rile n care nc nu s-a aplicat o chimizare intens a agriculturii. (6)n scopul stabilirii efectelor antimicrobiene a extractelor din cele doua specii de ment au fost preparate 5 extracte din diferite organe vegetale, n cadrul Laboratorului de Chimie anorganic din cadrul USAMVB Timioara. Aceste extracte au fost testate microbiologic, utilizand 6 culturi microbiene: Staphylococcus aureus , Escherichia coli, Salmonella, Klebsiella pneumoniae , Enterococcus faecalis , Candida albicans. Activitatea antimicrobian a fost stabilit n cadrul laboratorului de Microbiologie, Facultatea de Horticultur i Silvicultur. 1. IMPORTANA CULTIVRII PLANTELOR MEDICINALE

Plantele medicinale sub diferite forme slujesc sanatatea nc de la nceputurile lumii. Pe msur ce industria chimic se dezvolt, o parte din remediile populare au primit o alt form, au fost modernizate. De cele mai multe ori efectul folosirii plantelor medicinale este mai lent, necesitnd un tratament mai ndelungat, dar este mai putin riscant i mai ieftin. n trecut preparatele farmautice se numeau droguri ( Drug =doctorie, medicament). n zilele noastre acest termen se folosete mai mult pentru stupefiante. Plantele medicinale se pot folosi ca atare, cu uoare preparri, sau pot constitui materie prim n industria farmaceutic sau alimentar. Sub form de preparate simple i poate face efectul n cteva zile i nu mai necesit medicaie n paralel pentru afeciuni uoare, ns, trebuie tiut, c n cazul unor afeciuni severe, plantele medicinale nu trebuie s suprime total medicamentele, ci s le completeze n ameliorarea simptomelor bolii.

ndelungata folosire a plantelor medicinale n medicin este un indiciu sigur al valorii i utilitii acestora i n viitor. Se apreciz c pe plan mondial se folosec n prezent n fitoterapie aprox. 20.000 de specii de plante aromatice i medicinale, dintre care mai utilizate sunt aprox. 300 de specii.

Efectul plantelor medicinale este mai complex, acionnd asupra mai multor organe sau sisteme concomitent.Plantele medicinale produc mai puine i mult mai reduse efecte secundare (13).Plantele din punct de vedere biochimic fiind organisme vii, conin substane analoage sau compatibile ale corpului uman sau animal. n contrast, cele mai multe dintre medicamentele de sintez actuale sunt substane inexistente n natur, cu efecte imprevizibile n organismele vii.Orientrile actuale n medicin sunt tot mai mult ndreptate spre utilizarea fitoterapiei, care reprezint o posibilitate n terapeutica modern, ca alternativ la chimioterapie sau alturi de fizioterapie, electroterapie, igiena alimentaiei etc. Medicina natural se bazeaz n primul rnd pe Fitoterapie i colaboreaz cu alte specialiti medicale nrudite cum ar fi: Homeopatia, Dietoterapia, Aromaterapia.

Plantele medicinale i preparatele fcute din acestea ocup un loc important n viaa sntoas a omului i animalelor. Un mare numr de preparate provin din plante. 77% din preparatele pentru boli cardiovasculare i 74% din preparatele pentru boli digestive sunt obinute din plante. Exist peste 1700 de specii de plante medicinale din care mai mult de 50 sunt cultivate.Datorit aplicrii principiilor de via ecologic a oamenilor, o pondere mare n alimentaie precum i n medicin o au, plantele cultivate ecologic sau biologic fr aplicarea unor pesticide. Pe de alt parte se urmrete ca exploatarea resursei vegetale spontane s nu se fac disproporionat, afectnd potenialul de refacere a acestora, care s duc n final la dispariia acestor specii. (6)1.1. Menta - istoric, rspndire, taxonomie, descriere, compoziie chimic i importan

Scurt istoric

Menta este una dintre cele mai vechi plante, cunoscut i utilizat cu milenii n urma n scopuri aromatizante i pentru vindecare. n credina popular a cretinilor, menta era considerat o iarb sfnt (27). n Papyrus Ebers (primul tratat medical antic) se menioneaz faptul c menta a fost folosit cu 1550 ani naintea erei noastre n Egipt. i japonezii cunoteau i cultivau menta nc din vremuri ndeprtate, ns ca produs medicinal aceasta este citat mult mai trziu, n anul 948, fiind recomandat folosirea esenei de ment n apa pentru splatul ochilor. Totodat, Japonia este menionat ca fiind prima ar din lume care a exportat mentol (n 1883). Ca plant cultivat n scopuri medicinale menta a fost cunoscut mult mai trziu, n anul 1760, n Anglia, cnd s-au obinut primele cantiti de ulei volatil, fiind trecut n farmacopeea englez. De aici cultura mentei s-a rspndit n toat lumea, n Olanda i Germania, n a doua jumtate a secolului trecut, extinzndu-se apoi n Frana, Italia, SUA, India, China i Japonia.

n ara noastr prima cultur experimental a fost nfiinat n 1908 la Cluj, pe o supraf de 88 metri ptrai. Mai trziu, n anul 1926, la Braov apare prima plantaie de 5 hectare cu stoloni adui din Anglia i Italia. (31)Rspndire

Genul Mentha cuprinde aproximativ 25-30 specii de plante, distribuite astfel pe plan mondial: apte n Australia, una n America de Nord i celelalte n Europa i Asia. n afara de specii exist i hibrizi. Din aceiai familie mai fac parte i alte plante aromatice precum cimbrul, cimbriorul, mghiranul, salvia i levnica (28). Cele mai favorabile bazine pentru cultura mentei la noi n ar sunt Banat, Braov, Prahova, i Buzu. Se mai poate cultiva i n sudul rii, n judeele Teleorman i Giurgiu.

Creste salbatic i n Romania, n special n zonele de deal i de munte. n natura, are aspectul unei tufe de 40-60 cm naltime (32).Taxonomie n secolul al XIX-lea, Lemery a emis ipoteza ca denumirea genului Mentha ar deriva de la cuvantul latin mens minte, innd seama ca planta are proprietatea de a fortifia creierul, de a nviora gandirea i memoria.

Carl Linn (1751) descria 10 specii i trei varietati de ment, iar Alphonse de Candolle a grupat formele de ment n patru subgenuri (Terminalis, Arvenses, Eriodontes, Pulegium) i a descris 29 de specii i 31 de varieti (27) Denumirile populare ale mentei sunt: borotin, camfor, dian, ferent, ghiazm, giazma broatei, giugium, gnint, iarb-neagr, iasm, izm bun, izm de grdin, izm piprat, mint broteasc, mint de camfor, mint de chicuuri, mint moldoveneasc, mint de picuuri, mint rece, nint. Genul Mentha aparine familiei Lamiaceae incluznd un mare numr de specii care difer prin caracteristici i nivelul de ploidie.n flora Romaniei sunt prezentate 8 specii i 7 hibrizi, dintre care cele mai rspandite sunt menta de ap (Mentha aquatica), menta salbatic (Mentha pulegium), menta dulce (Mentha viridis), menta crea (Mentha crispa) i, mai ales, menta alb sau izma bun (Mentha piperita). (27)Descriere

Menta este o plant anual, erbacee, dar considerat de muli autori peren.Rdcina este format dintr-un numr foarte mare de rdcini adventive fibroase,

tulpina este anual, patrunghiular, compus din noduri i internoduri, mai mult sau mai puin erect.

Din mugurii situai pe poriunea lignificat a tulpinii, de sub nivelul solului se formeaz stolonii. n funcie de locul unde cresc, stolonii sunt de 2 feluri: aerieni i subterani.

Dup cosire din mugurii situai pe nodurile stolonilor aerieni, pe o parte din stolonii subterani, precum i pe resturile de tulpini netiate se formeaz a doua recolt (otava).

Frunza este ovat lanceolat pn la lanceolat, cu marginea limbului serat. Lungimea frunzei variaz ntre 3 i 8 cm, iar limea de la 1-3 cm.

Pe partea superioar frunzele sunt netede, iar pe cea inferioar au nervuri proeminente, sunt colorate n verde nchis i sunt prevzute cu glande oleifere, prezente n numr mult mai mare pe partea inferioar.

Inflorescena este de forma unui spic alungit, de 4-10 cm lungime. Floarea este compus dintr-un caliciu cilindric, campanulat iar fructul este format din 4 nucule mici, acoperite cu caliciul persistent. nflorete n luna iulie.

Menta este o plant care rezist n perioada repausului relativ pn la -10C.

Necesit umiditate potrivit n toat perioada de vegetaie, umiditatea atmosferic ridicat favorizez atacul de boli. (9)Principalele specii de ment luate n studiu

Mentha piperita

Mentha piperita este o plant peren. Att forma cultivat ct i cea salbatic se gsete n diferite ri ale lumii (1). Mentha piperita L. este un hibrid ntre Mentha spicata L. i Mentha aquatica L.

n cultur sunt zonate soiurile: Columna, Cordial i Cristal de Mentha piperita; Mencris i Record de Mentha spicata.

Fig. 1.2.1. Mentha piperita (46)Menta spicata var. viridis Menta spicata este o specie de ment originar din Europa i Asia care crete n condiii bune n apropierea climatului temperat (29).Este una dintre cele mai importante plante aromatice cultivate n ntreaga lume ca o surs pentru uleiurile eseniale i pentru alte componenente bioactive, prezente n pri diferite ale plantei (18b).

Fig.1.2.3. Mentha spicata var. viridis (47)Importana

n prezent sunt cunoscute numeroase subgenuri, specii i varieti de ment, fiecare avand proprieti distincte din punct de vedere biologic i terapeutic.

De la Mentha piperita se folosesc frunzele Folium Menthae, sau herba de ment Herbe Menthae atunci cnd se utilizeaz la extragerea de ulei volatil.

Astzi sunt mult apreciate unele preparate alimentare din ment i anume salatele i sosurile din Anglia, cocktailurile din Statele Unite, ruladele din Vietman i salatele din China (27). n tradiia popular se foloseau n bolile de stomac se lua plmdit bnd rachiu. Cu decoctul se fceau splturi contra bubelor i durerilor de cap, iar plantele fierte se puneau n legturi. Ceaiul se da copiilor contra colicilor, iar dac aveau dureri mari, se punea pe pntece o cataplasm cald din frunze de izm, leutean (8).n ultimul timp s-au efectuat mai multe experimente i s-a dovedit c menta ar putea fi utiltizat n: acnee, accident vascular, adjuvant n cancerul de pancreas, mamar i hepatic, adjuvant n TBC, aerofagie, afeciuni cronice ale pancreasului, afeciuni renale, ameeli, angoas, aritmie cardiac, arsuri uoare, astm bronic, atonie stomacal, astenie fizic i nervoas, ascarizi, astm bronic, balonri, boli de ficat, bronit, calculi biliari, cancer de colon, cancer pulmonar. Aciune farmaceutic: antiseptic, bacteriostatic, astringent, sedativ, combaterea transpiraiei, calmeaz durerile, antidiareic, normalizeaz tranzitul intestinal, calmeaz nevrozele, carminativ, sudorific, antispasmodic, deodorant i cicatrizant extern, de asemenea ajut la mancrimile pielii pe care le nltur. (8) n literatura de specialitate se scrie c Mentha piperita este folosit intern ca un ceai, tinctur, ulei sau extracte, i aplicat extern ca un masaj sau alifie. Botanitii consider menta ca un astringent, antiseptic, proprieti antipiretice, antispastice, anticatarhal, antitimicrobial, rubefacient, stimulant, i cu proprieti anti-mbtrnire (1). Mai puin recunoscut e potenialul mentei n controlarea a numeroase probleme medicale, inclusiv n colonoscopie (21).

Menta spicata e cultivat pentru uleiul esenial aromatic i carminativ. Frunzele de ment pot fi utilizate ntregi, tiate, uscate i mcinate, ngheate sau conservate n sare, zahr, sirop de zahr, alcool sau ulei.

n medicina popular, menta a fost utilizat pentru bolile gastrointestinale, probleme respiratorii, stomacale, mpotriva cderii prului i pentru bronitele cronice.

Unii cercettori sugereaz c ceaiul de ment poate reduce creterea excesiv a prului (numit horsutism, la femeile cu sindromovarian polichistic).

Ultimele cercetri sugereaz c un produs pe baz de plante ce conine i menta spicata ar putea ajuta la tratarea sindromului intestinului subire.E neclar dac mestecarea gumei cu arom de ment mbuntete memoria.La acest moment studiile de nalt calitate privind corpul uman nu accept utilizarea mentei pentru orice indicaie . Studii clinice bine efectuate, sunt necesare naintea concluziilor ce pot fi fcute n ceea ce privete administrarea acestui agent pentru orice condiie.

Pacienii cu arsuri la stomac sau cu reflux gastrointestinal (GERD) sunt descurajai de la consumul produselor cu arom de ment. Menta ar putea cauza probleme rinichilor.

Extractul apos a M. piperita are o important activitate antimicrobian mpotriva Helicobacter pylori, principalul agent cauzator a gastritelor cronice i a ulcerului peptic.(11) Taninurile i flavonoidele au utilizri terapeutice datorit proprietilor lor antiinflamatorii, antifungice i antioxidante (24).

Antioxidanii naturali i agenii antimicrobieni sunt preferai n industria alimentar i n cosmetic pentru beneficiile lor poteniale n comparaie cu omologii lor chimici. Frunzele de ment ar putea fi o posibil alternativ la chimicale dac ar fi valorificate ca i agent antimicrobian, antioxidant i aromatizant (30).Compoziia chimica

Toate speciile de ment au, practic, proprieti terapeutice asemanatoare, avnd comun mentolul (n proporii diferite din componenta uleiului eteric), precum i alte componente biochimice.

Frunzele recoltate, mpreuna cu prile superioare ale tulpinii, conin, n principal, ulei eteric i materii tanante. Cantitatea de ulei eteric variaz ntre 0,2-0,6% n frunzele proaspete i 1-3,5% in frunzele uscate, asigurnd o producie mondial de circa 5.000 de tone anual.

Uleiul contine circa 40 de componente odorante, dintre care 26 compui se gasesc i n speciile cultivate n ara noastr. Principalul component al uleiului eteric este mentolul.

n menta cultivat n Romania, mentolul reprezint circa 40-60%, n timp ce n menta japonez (Mentha canadensis var. piperascens) exist peste 80% din cantitatea de ulei volatil.

Pe langa ulei eteric, exist i alte substane biochimice cu aciuni specifice n tratamentele medicale:

- taninuri (5-8%), substante amare, compui antibiotici;

- flavonoide (hesperidina), polifenoli, tocoferoli, carotenoizi;

- acizi organici (cafeic, fenolic, ursolic, clorogenic, nicotinic, piruvic);

- acizi grai (oleic, linoleic, oleanolic);

- glucide (galactoza, fructoza, rafinoza, zaharoza, glucoza);

- vitamine (A, C, D, PP);

- sruri minerale (8-12%) cu K, P, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn. (27) Constituenii principali activi din Mentha piperita sunt uleiurile eseniale, care cuprind cam 1% din plant. Uleiurile sunt dominate de monoterpene, n principal, mentol, menton i derivaii acestora (de exemplu, isomenton, neomentolul, mentol), (21).Kezemi i M. Rostami. i Shafiei (2012) au ajuns la concluzia c principalele componente n uleiul de Mentha piperita sunt mentolul, limonene, 1,8-cineol, metil acetat i mentona, n uleiul de Mentha spicata carvona, mentolul, limonene i mentona.

2. SPECIILE MICROBIENE STUDIATE

2.1 Staphylococcus aureus

ncadrare taxonomic Staphylococcus aureus a fost ncadrat sistematic de ctre numeroi cercettori tinifici n ncrengtura Eubacteria, ordinul Eubacteriales, familia Micrococcaceae, genul Staphyloccocus.

ncrengtura Eubacteria, cuprinde bacteriile propriu-zise i este structurat n numeroase clase i ordine.

Unul din cele mai importante ordine este Ordinul Eubacteriales care cuprinde bacteriile tipice cunoscute sub diferite forme: coci, bacili, vibrioni, specii imobile, dar i mobile, Gram-pozitive i Gram-negative, specii aerobe, facultativ anaerobe i specii anaerobe.

Bacteriile acestui ordin sunt att specii saprofite cat i patogene pentru om, animale, plante, producnd diferite boli i cuprinde mai multe familii dintre care cele mai importante sunt:

Familia Micrococcaceae din care fac parte bacteriile de form sferic (cocii), Gram-pozitive, dispuse n grmezi caracteristice regulate i neregulate.

Familia Micrococcaceae este mprit n 3 genuri:

-genul Micrococcus -genul Planococcus -genul Staphylococcus, gen din care face parte specia Staphylococcus aureus.

Genul Staphylococcus cuprinde bacterii patogene care produc infecii deosebit de periculoase pentru om.

Denumirea genului vine din limba greac (staphylo=strugure) i semnific dispunerea cocilor n grmezi a cror form este asemntoare unui ciorchine de strugure.

Din cele 27 de specii i 7 subspecii care fac parte din acest gen (Staphylococcus epidermus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus schleiferi, Staphylococcus haemolyticus), Staphylococcus aureus este agentul patogen cel mai virulent.

Habitat Colonizeaz nrile i colonul de unde poate contamina tegumentul. Exist i starea de purttori sntoi ai acestei specii, portajul nazal fiind ntalnit, n proporie de 10-40% n colectiviti i pn la 40-70% n spital. Rezervorul principal este reprezentat de mamifere i psri care contamineaz mediul. Suportul material al transmiterii este reprezentat de sol, nisip marin, apa de mare i apa dulce, plante, fructe, alimente, mbrcminte, mobilier, covoare, praful i aerul din ncperi.

Morfologie i caractere culturale

Stafilococii sunt coci Gram-pozitivi, nesporulai, necapsulai. Pe frotiu efectuat din cultur pe mediu solid stafilococii apar dispui n grmezi neregulate asemntoare cu ciorchinii de strugure. Pe frotiul efectuat din cultur n mediu lichid sau din produs patologic stafilococii sunt dispui extracelular, n lanuri scurte, perechi sau coci izolai.

Sunt germeni nepretenioi care pot fi cultivai pe medii nutritive simple, pe medii complexe ca i pe medii hiperclorurate (Chapman). Mediile se incubeaz timp de 18-24 ore, la temperatura de 35-37C, n aerobioz.

Crete sub form de colonii S pe medii solide; n medii lichide produce turbiditate uniform cu depozit moderat la fundul tubului.

Stafilococii produc pigment nedifuzibil, care coloreaz doar colonia bacterian nu i mediul de cultur. Culorile coloniilor pot fi: galben-auriu (S.aureus), alb (S.epidermidis) sau galben citrin (S. saprophyticus). Pigmentogeneza (caracter variabil) este mai intens la temperatura camerei i n prezena oxigenului.

Pe mediile cu snge apare hemoliza.

Caractere biochimice i de metabolism

Sunt germeni catalazo-pozitivi, oxidazo-negativi. Fermenteaz glucoza, manitolul, lactoza, zaharoza etc. cu producere de acid. Hidrolizeaz proteinele animale native: hemoglobina, fibrina, cazeina, gelatina etc. i descompun fosfolipoproteinele.

Rezistena fa de factorii fizici, chimici, biologici

Stafilococii sunt rezisteni fa de condiiile din mediul extern. Rezist n culturi, la frigider cteva luni; n puroi uscat2-3 luni. Sunt relativ rezisteni la antiseptice i dezinfectante (30 la alcool 70; 10 la fenol 2%), la radiaii gamma, la aciunea coloranilor (violet de genian, fuxina acid, verde malachit etc.). Pot fi distrui n 60 minute la temperatura de 60C, sunt sensibili la bacteriofagi si la radiaiile UV.

Urmtoarele produse: suc de lmie, mr, ananas, caise, piersici, ciocolat, cacao au efect bacteriostatic asupra tulpinilor stafilococice.

Stafilococii sunt deosebit de rezisteni la antibiotice. Peste 95% din stafilococi sunt rezisteni la penicilin.

Tulpinile de stafilococi rezistente la meticilin (oxacilin) sunt tulpini polirezistente exterioriznd rezisten concomitent fa de cefalosporine, eritromicin, clindamicin. Sunt nc sensibili la vancomicin dei n unele ri precum Frana au fost semnalate deja tulpini rezistente i fa de acest antibiotic de rezerv. (25)2.2. Escherichia coli

ncadrare taxonomicFamilia Enteriobacteriaceae cuprinde 5 genuri:

Genul Escherichia

Genul Shingella

Genul Salmonella

Genul Proteus

Genul Yersinia

Genul Escherichia este genul tip al familiei Enterobacteriaceae. Denumirea genului a fost dat dup numele cercettorului Th. Escherich, care a izolat specia tip a genului i singura de interes medical dintre cele cinci specii: E.coli.

Escherichia coli (nume abreviat: E. coli) este o bacterie care triete n intestinele organismelor cu snge cald. El face parte din grupa enterobacteriilor care triete ca epifit n tractusul digestiv. n unele cazuri de dezechilibrare a microflorei intestinale, aceste bacterii pot produce mbolnviri, printr-o nmulire masiv sau apariia unor tulpini toxicogene (26).Habitat

Colibacilii sunt rspndii n mediul nconjurtor, odat cu coninutul intestinal al omului i al animalelor. Numarul acestor germeni pe unitatea de volum n ap i alimente reprezint indicele coli, care este un criteriu de apreciere a gradului de poluare a apei, mediului i alimentelor, cu materii fecale (14). Sunt bacili gram-negativi, scuri cu capetele rotunjite, nesporulai, necapsulai (rareori unele tulpini pot avea o pseudocapsul), n general mobili (cu cili peritrichi).

Sunt germeni aerobi, facultatavi anaerobi, nepretenioi din punct de vedere nutritiv. Se dezvolt att pe mediile uzuale, ct i pe mediile selective lactozate, pe care formeaz colonii lactozo-pozitive. Coloniile sunt de tip S, iar tulpinile pseudocapsulate formeaz colonii cu aspect mucos.Morfologie i caractere de cultur

Bacteriile de Escherichia coli se prezint sub forma unor bastonae cu capetele rotunjite, de dimensiuni variabile, cuprinse ntre 2-6 micrometri lungime i 1-1,5 micrometri lime.Avnd un polimorfism accentuat, poate lua uneori form filamentoas de 6-10 micrometri n culturile vechi sau chiar forme scurte cocoide (fig. 2.2.1).

Bacili pot fii singulari sau se pot agrega n perechi (formele filamentoase).

Sunt specii mobile, mobilitatea fiind dat de 2-6 bacili peritrichi, dar exist i variante puin mobile sau chiar imobile.Sunt Gram-negative, capsulate, unele specii fiind pseudocapsulate sau necapsulate.

Bacteriile cresc pe medii de cultur obinuite, fiind puin pretenioase.Sunt specii aeorbe,facultativ anaerobe care se comport diferit fa de aceste medii.n bulion tulbur uniform mediul cu formarea unui depozit care se disperseaz uor.

n culturile vechi pot forma un inel aderent i foarte rar o pelicul.Pe geloz se dezvolt colonii rotunde, opace, convexe, cu margini regulate, de tip S.Formele R, sunt reprezentate de colonii uscate, turtite, cu margini dinate, aderente la mediu.Coloniile au un diametru de 2-3 mm i degaj un miros specific de amoniac.

Pe mediul de cartof se dezvolt culturi uor pigmentate.

Caracere biochimice i de metabolism

Escherichia coli fermenteaz gluoza, lactoza, maltoza, trehaloza, manitolul i alte zaharuri cu producere de gaz.Acidific i coaglueaz laptele, produce -galactozidaz i lizin decarbozilaz,nu degaj H2S i nu lichefiaz gelatina.

Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici

Escherichia coli poate supravieui luni de zile n mediul extern (sol, materii fecale de la om i roztoare etc.)

Suport variaii lungi de temperatur i reacie chimic, dar temperatura optim este de 37C i pH-ul optim cuprins ntre 7,2 i 7,6

Factori de virulen Secret diferite substane biologice active, de tipul:

- enterotoxine, hemolizine, enzime care asigur rezistena la antibiotice,

- lipopolizaharidul sau endotoxina, comun tuturor membrilor familiei, particip la distrugerile tisulare, fiind responsabil de creterea sintezei de TNF macrofagic, aflat la originea ocului septic

- capsula (antigenul K1) este de natur polizaharidic, are rol antifagocitar, realiznd un veritabil camuflaj imunologic al bacteriei, deoarece posed determinani antigenici care se regsesc la suprafaa celulelor eucariote.

Tratament

n cazul infeciilor tubului digestiv manifestate prin diaree, nu esre recomandat un tratament antibiotic datorit riscului dezvoltrii sindromului hemolitic, uremic, dupa administrarea de antibiotice : aminoglycoside, ciprofloxacin.

Pe lng antibiotice se administreaz acciunurile anticolibacilare, foarte eficiente n tratarea bolnavilor, mai ales cnd antibioticele nu dau rezultate. Aceste vaccinuri sunt preparate fie numai din culturi de Escherichia coli inactive (vaccinurile monomicrobiene), fie din asociaii de germeni Escherichia coli cu alte specii : Clostriduim perfrigens, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella etc. (vaccinurile polimicrobiene) (4).2.3 Salmonella

Familia Enterobacteriaceaelor cuprinde un numr foarte mare de bacterii implicate n patologia infecioas a omului dar i bacterii comensale cu habitat intestinal. Denumirea genului provine de la medicul veterinar american Daniel Salmon, care la sfritul secolului XIX a izolat din intestinul porcului prima tulpin aparinnd acesti grup taxonomic (14). Salmonella este un gen de bacterie patogen intestinal care cauzeaz unele boli infecioase (febr tifoid, paratifos, intoxicaii alimentare etc.). Salmonella este cauza celor mai rspndite toxiinfecii alimentare, contaminnd omul prin ingestia de mncare sau de ap infectat.

Exist mai multe tipuri ale acestei bacterii: Salmonella typhimurium i Salmonella typhi.ncadrare taxonomic Prin metode moderne de taxonomie molecular sunt recunoscute n prezent n cadrul acestui gen 2 specii:

- Salmonella enterica cu 6 subspecii: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae i indica.

- Salmonella bongori.

99% din tulpinile de Salmonella implicate n patologia uman aparin speciei S. enterica subspecia enterica.

Pe baza antigenului somatic O (antigen cu specificitate de grup), au fost descrise numeroase grupe serologice notate cu literele mari ale alfabetului, de la om fiind izolate tulpini aparinand n special grupelor A-E. Antigenul H (antigen cu specificitate de tip), n faz 1 i 2, permite individualizarea n cadrul aceluiai grup a serotipurilor- peste 2000- crora iniial li s-a acordat denumirea de specie. n prezent s-a acceptat pstrarea acestor denumiri ca de exemplu Slmonella typhi, Salmonella enteritidis.

Habitat

Toate serotipurile de Salmonella enterica subsp. Enterica sunt parazite pentru om i mamifere (germeni nalt patogeni), n timp ce celelalte subspecii i Salmonella bongori se ntlnesc preponderent la psri i animale cu snge rece.

Cele dou surse majore, omul i animalele, sunt responsabile de poluarea solului i a apelor, n care pot suparavieui mult timp.

Exist serotipuri de Salmonella cu specificitate de gazd, prezente numai la om (S. typhi, S. paratyphi), la animale (S. typhisuis la porci , S. abortus ovis-la oi) sau psri ( S. gallinarum, S. pullorum).

n general exist o distribuie geografic a salmonelelor, n zona noastr fiind izolate mai frecvent Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis i n unele perioade Salmonella agona.Morfologie, caractere culturale

Sunt bacili gram-negativi, cu dispoziie necaracteristic, mobili (excepie fac S. gallinarum, S. pullorum).

Pe medii uzuale, lichide sau solide, formeaz colonii de tip S sau R comune celorlalte enterobacteriacee. Pe geloz- snge de obicei nu determin hemoliz.Creterea bacteriilor de tip Salmonella pe medii specifice de cultur:

Pe mediile: Wilson-Blair coloniile sunt negre cu halou; McConey : colonile sunt transparente necolorate, Leifson ADCL: coloniile sunt roz glbui cu centrul negru metalic, Istrati-Meitert: coloniile sunt verzi albstrui transparente iar pe mediu AABTL coloniile sunt verzi.

Prezint caracterele biochimice comune enterobacteriilor. Testele biochimice permit stabilirea genului, precum i diferenierea speciilor i subspeciilor. (2)Caractere biochimice i de metabolism

Prezint caracterele biochimice comune enterobacteriilor (fermenteaz glucoza, reduc nitraii la nitrii, sunt catalazo-pozitivi i oxidazo-negativi).Fermenteaz lactoza, produc H2S ( cu unele excepii), folosesc citratul ca unic surs de carbon.ncadrarea serologic de grup i serotip se face pe baza structurii aitentigenice, prin reacii de aglutinare pe lam, conform schemei Kauffman-White (14).Patogenitate

Salmonelele sunt germeni nalt patogeni. Salmonelele mai frecvent ntlnite n patologia uman sunt: Salmonella paratyphi A, B i C dau febre paratifoide.

Salmonella typhi murium este la originea celor mai multe episoade de toxiinfecii alimentare manifestate prin: diaree, vom i febr. Salmonella enteritidis are o putere patogen analoag cu precedenta. Salmonelele mai pot da: febre enteritice, gastroenterite salmonellozice, septicemii salmonellozice, cu leziuni metastatice avnd ca punct de plecare intestinul, apar mai ales la deficieni imunitari; toxiinfecii alimentare date mai ales de : S. typhi murium, S. cholerae suis, S. enteritidis.Tratament n febrele enterice, n formele septicemice i n salmonelozele enterice la sugari i adulii tarai, se utilizeaz antibiotice ce penetreaz intracelular: ampicilin, cotrimazol, cloramfenicol, fluorochinolone, cefalosporine. Toxiinfeciile alimentare sunt tratate simptomatic. (2)2.4 Klebsiella pneumoniae

ncadrare taxonomicMembrii genului Klebsiella sunt bacili Gram-negativi,ncadrai n tribul Klebsiellae al familiei Enterobacteriaceae. Acest gen cuprinde 7 specii importante din punct de vedere medical: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Klebsiella ozaenae, Klebsiella rhinoscleromatis, Klebsiella terrigena, Klebsiella ornithinolytica si Klebsiella planticola.Din cele 7 specii ale genului, 4 sunt importante n patologia uman: K. pneumoniae, K. oxytoca, K. ozenae i K. rhinoscleromatis. Sugestia cercettorilor de a considera K. pneumoniae, K. ozaenae i K. rhinoscleromatisca subspecii ale K. pneumoniae nu este acceptat de microbiologi i clinicieni, acetia tratndu-le ca i cnd ar fi specii separate.

Habitat Speciile genului Klebsiella sunt foarte rspndite n natur (sol, ape de suprafa, plante). Sunt germeni condionat patogeni, componeni ai florei intestinale la om i animale, iar n numr redus se gsesc i la nivelul mucoasei tractului respirator. Se pot izola din ap, sol, plante. Morfologie.Caractere culturaleSunt bacili nesporulai, neciliai, Gram-negativi, scuri i groi, cu capete rotunjite, dispui n diplo. n produsele patologice apar sub form de cocobacili, nconjurai de capsul.Nu sunt germeni pretenioi, crescnd foarte bine pe mediile de cultur convenionale. Sunt germeni aerobi, facultativ anaerobi. Temperatura optim de cretere este de 37C,. Pe geloz simpl determin formarea de colonii foarte bombate, alb-cenuii, lucioase, cu aspect mucos (colonii tip M). Se observ deseori apariia de variante ale tipului de colonie: tipul S i tipul R (colonii plate i uscate). Pe mediile slab selective pstreaz aspectul mucoid al coloniilor, iar mediile moderat selective induc formarea de colonii cu caracter mucoid mai puin pregnant dect cel de pe celelalte medii.Caractere biochimice Prezint caracterele biochimice comune enterobacteriilor. Fermenteaz lactoza, zaharoza i glucoza cu eliberare de acid i gaz. Nu produc indol, cu excepia tulpinilor de K. oxytoca. Produc ureaz, acetil-metil carbinol, folosesc citratul ca unic surs de carbon, dar nu descompun proteinele cu eliberare de H2S.Rezistena la factorii chimici, fizici i biologici Tulpinile de Klebsiella sunt omorte de cldura umed (la 55C n 30 minute). La temperatura camerei i lantuneric pot supravieui sptmni i luni de zile. Unele tulpini pot prezenta o cretere a rezistenei la antiseptice i dezinfectante. Klebsiella spp. este sensibilla cefalosporinele degenera ia a III-a, floxacine, colimicin i gentamicin.

Caractere de patogenitateTulpinile genului Klebsiella sunt patogene prin virulen. Virulena lor este legat de prezena capsulei de natur polizaharidic, format din D-glucoz, fucoz i acid uronic i a fimbriilor.

Germenii din genul Klebsiella prezint patogenitate diferit la om, astfel:

-K. pneumoniae (tipurile capsulate 1,2 si 3) d pneumonie i alte infecii

-alte tipuri capsulate de K. pneumoniae i K. oxytoca pot intra n etiologia bolii diareice la copil i adult

-K. rhinoscleromatis ( tip 3) se izoleaz de la bolnavi cu rinosclerom

-K. ozaenae este agentul ozenei i a unor infecii cronice ale tractului respirator

-n mediu spitalicesc Klebsiella colonizeaz tractul genital, urinar i respirator la adult, ori intestinal la copil

Klebisella poate fi i la originea meningitelor, otitelor, sinuzitelor sau endocarditelor.

(14)

Tratament Aproape toi membrii acestui gen sunt rezisteni la antibiotice beta-lactamice: penicilin

ampicilin, amoxicilin. Sunt frecvent sensibile la aciunea cefalosporinelor, ceea ce le recomand ca tratament de prim intenie n infeciile date de Klebsiella spp.

Totui, n ultimii ani, s-au izolat tulpini de K. pneumoniae rezistente la cefalosporine, rezisten datorat prezenei unui grup de enzime numit -lactamaze cu spectru larg, prescurtarea cunoscut fiind SKBLs. Tulpinile de K. pneumoniae care produc SKBLs sunt notate SKBL-KP. Aceste enzime au capacitatea de a inactiva cefalosporinele prin clivarea inelului -lactamic al medicamentului. Genetic, producerea acestor enzime este codificat plasmidic. 2.5 Enterococcus faecalisFace parte din grupa D - este o bacterie gram-pozitiv, comensal care populeaz tractul gastro-intestinal la oameni i alte mamifere (22).Speciile de interes enterococice pentru domeniul medical sunt: Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus Durans, Enterococcus avium.

Patogenitate

Enterococii sunt frecvent implicai n infecii nosocomicale ( ntr-un context post-operator) i bacteriemii cu prognostic revervat la pacienii imunocompromii.

E. faecalis poate provoca endocardit i bacteriemie, infecii ale tractului urinar (ITU), meningita, si alte infecii la om. Mai muli factori de virulen sunt gandii s contribuie la infeciile cu E. Faecalis (16).n infeciile abdominale, biliare, peritonale, ale plgilor chirurgicale, se asociaz frecvent enterobacteriilor sau germenilor anaerobi, care pot spori puterea lor patogen.

Rezistena la factorii de mediu

Enterococii sunt rezisteni la temperaturi nalte (45 C), pH 9,6 la concentraii ridicate de NaCl (6.5%) precum i n medii biliate. Ultimele dou proprieti sunt utile n identificarea enterococilor.

Epidemiologie

Habitatul natural al enterococilor este reprezentat de intestin i vagin. Sursa de infecie este endogen (flora normal a organismului) sau exogen, transmiterea fiind de obicei interpersonal (cadru medical pacient sau ntre pacieni).Sensibilitatea la antibiotice

Entrococul este n mod natural rezistent la aminoglicozide i relativ rezistent la -lactamine. Este un campion al dobndirii rezistenei la antibiotice.

2.6 Candida albicans

Habitat Candida albicans este un microorganism care face parte din microbiota normal a tractului gastrointestinal, a cavitaii orale i a zonei genitale. n anumite condiii favorizante, aceasta specie poate deveni patogen ducnd la apariia candidozelor. Candidozele sunt cele mai intlnite infecii cauzate de fungi, reprezentnd aproximativ jumatate din totalul infeciilor micotice. Prezena speciei Candida albicans este cauza major a candidozelor invasive i este cel mai frecvent patogen izolat din sngele pacienilor care au suferit tratamente postoperatorii.Morfologie,caractere culturale Candida albicans este un fung dimorf care are capacitatea de a adopta un spectru de morfologii: blastospori, pseudohife, tubi de germinaie i hife. Ea se poate reproduce prin nmugurire, sub form de celule de drojdie (blastospori sau blastoconidia). Producerea de tubi germinativi rezult din conversia la faza filamentoas hifal, numit i forma de miceliu.

Caractere biochimice i de metabolism

Speciile din genul Candida cresc pe mediul Sabourand simplu, Sabourand cu adaus de gentamicin i cloramfenicol sau Sabourand cu actidion i rou fenol (mediul Mycoline). Incubarea se face la 30 C , 24-48 ore. Candida albicans dezvolt colonii albe, cremoase, mate cu margini regulate.Pentru Candida Albicans se recomand utilizarea galeriilor Api Candida (fermentri de zaharuri), care permit identificarea rapid a 14 de levuri.

Candida Albicans fermenteaz glucoza i maltoza, nu fermenteaz zaharoza, lactoza i rafinoza.

La coloraia Gram, candidele sunt gram pozitive. Celulele levurice sunt sferice sau ovalare, c muguri multipolari numii blatospori, pseudimicelii formate din celule alungite, aezate cap la cap.

Se mai pot observa chlamidospori intens colorai, care apar ca celule sferice cu diametrul mai mare dect cel al clulelor levurice.

Patogenitate

Patogenitatea tulpinilor de Candida albicans depinde de complexitatea unor factori de virulen. Acetia includ dimorfismul celular, variabilitatea antigenic, adeziunea la esuturile gazdei, caracterul hidrofob al suprafeei celulare precum i producerea de enzime extracelulare.

Datorit necesitii de combatere a infeciilor cauzate de fungi, studiul substanelor antifungice este n plin dezvoltare. Cele mai importante clase de compui antifungici sunt polienele (amfotericina B, nistatin), compuii azolici (imidazoli i triazoli), echinocandine (caspofungin, micafungin) i 5-fluorocitozina.

Candida albicans prezint dimorfism fungic i este agentul patogen care provoac o serie de infecii umane (22, 14).Sensibilitatea la antifungice

Speciile genului Candida sunt sensibile la amfotericin B, nystadin, miconazol, econazol, ketoconazol i rezistente la 5-fluorocitozin.

3. STADIUL ACTUAL AL CUNOASTERII IN DOMENIU

n condiiile medicinei contemporane exist unele bariere n ceea ce privete tratarea unor afeciuni. O astfel de piedic o reprezint fenomenul de antibiotico-rezisten, semnalat relativ frecvent n ultimii ani; numeroase studii retrospective evideniaz creterea semnificativ a numrului de specii bacteriene care sunt capabile s dezvolte mecanisme de rezisten fa de aciunea agenilor antimicrobieni clasici. Alarmant este faptul c majoritatea cercetrilor indic o tendin progresiv a nivelurilor de rezisten microbian.

n prezent, studiul extractelor vegetale n vederea izolrii unor compui este o preocupare larg ntlnit n lumea medical. Astfel, o multitudine de extracte sau constitueni bioactivi de natur vegetal sunt investigai n scopul valorificarii lor n dezvoltarea unor noi ageni chimioterapeutici cu aplicabilitate n managementul sau terapia strilor infecioase, n special n cazul celor determinate de bacterii multirezistente ca Staphylococcus aureus i Pseudomonas aeruginosa (7, 18a). Activitatea antimicrobian a extractelor naturale i a componentelor lor bioactive purificate poate fi determinat pe baza observrii i cuantificrii dezvoltrii bacteriene consecutiv aducerii n contact a bacteriilor cu agenii cu potenial antimicrobian.

n literatura de specialitate sunt descrise mai multe metode i tehnici de evaluare i certificare a acestui potenial, dar din pcate sensibilitatea lor nu este constant i comparabil. Nu exist un protocol standardizat de screening antimicrobian, exista doar numeroase variante (tehnici preluate i modificate n condiiile de lucru date). Din acest motiv, rezultatele sunt influenate n mod categoric de metoda aleas (18a). n anii trecui un numr mare de cercetri au fost realizate la nivel mondial pentru a dovedi activitile antimicrobiene ale plantelor medicinale (17). Pentru o perioad lung de timp, plantele au fost o surs valoroas de produse naturale pentru meninerea sntii umane, n special n ultimul deceniu cu mai multe studii pentru terapiile naturale. Multe plante au fost utilizate datorit proprietilor antimicrobiene, care sunt datorate compuilor sintetizai n metabolismul secundar al plantelor. Aceti produi sunt cunoscui pentru substanele lor active, cum sunt spre exemplu compuii fenolici, care reprezinta o parte din uleiurile eseniale (10) precum i taninurile. Este o necesitate descoperirea de noi substane antimicrobiene cu structur chimic diferit i noi mecanisme de aciune pentru noi boli infecioase reemergente (21). Bolile infecioase (majoritatea datorit contaminrii mncarii cu diveri microbi), au devenit o problem major n lume, n special n societile mai dezvoltate (5). Frecvena tot mai mare a microorganismelor n alimente duce nu numai la scderea volorii nutritive i organoleptice a produselor alimentare, ci i la generarea mai multor toxine care sunt duntoare pentru santatea oamenilor. Dixit i Sharma (2013), au observat c dintre cele cinci tipuri de extracte de Anisomeles indica i Mentha piperita n mediile: apos, metanolic, etanolic, cloroform i etil acetat, cel n mediu apos i n acetat de etil au artat cea mai nalt activitate antimicrobian fa de speciile: Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa i Klebsiella pneumoniae. Activitatea antimicrobian a extractelor de Mentha piperita este mai bun fa de Anisomeles indica.

Efectul extractului de menta n acetat de etil este cel mai pronunat faa de specia bacterian E. coli.

Pentru specia bacterian Klebsiella pneumoniae, extractele din frunzele de Mentha piperita sunt eficiente doar n prezena metanolului, cloroformului i etil acetat. Extractul de Mentha piperita n cloroform arat cea mai bun valoare mpotriva K. pneumoniae.Kazemi i M., Rostami H. i Shafiei S. (2012) au studiat activitatea antibacterian i antifungic a uleiurilor eseniale din 4 plante medicinale Mentha piperita, Mentha spicata, Anethum graveolens i Foeniculum vulgare i au determinat compoziia chimic a acestora.

Ei au demonstrat c Mentha piperita are activiti antifungice i antimicrobiene bune, dar comparativ cu Mentha spicata, acestea sunt mai reduse. Carvona deine cea mai nalt activitate antifungic i antimicrobian dintre componentele testate. Uleiurile eseniale ale speciilor de ment posed mare potential anfungic i antibacterian i ar putea fi folosite ca i conservani naturali i fungicide (12). S-a demonstrat c activitatea antibacterian i antifungic a extractului metanolic din frunzele de M. piperita este datorat prezenei taninurilor i flavonoidelor.

Viitoarele studii ar putea fi direcionate spre evaluarea potenialului antimicrobian al mentei mpotriva unor patogeni gastrointestinali (19).4. MATERIAL I METODE

Obinerea extractelor din Mentha piperita i Mentha spicata.

Extractele alcoolice (fig. 4.2, 4.3) de Metha piperita (fig. 1.a) i Mentha spicata (fig. 1.b) au fost obinute din diferite pari ale plantelor de ctre colectivul disciplinelor de Chimie anorganic i organic din cadrul Facultii de Tehnologia produselor agroalimentare.

Pentru M. piperita au fost preparate 3 extracte i anume: E2- extract provenit din rdacini; E3-extract provenit din frunze i E4- extract provenit din flori.Pentru M. spicata au fost preparate 2 extracte i anume: E5-extract provenit din frunze i E6-extract provenit din flori. Ca i martor a fost utilizat alcoolul etilic (E1).n paralel a fost aplicat i antibiograma utilizandu-se antibioticele: ampicilina (E7) i cefaloxim (E8) pentru speciile bacteriene i cefaloxim (E7), respectiv nystatin (E8) pentru C. albicans.

Fig. 4.2. Extractele alcoolice de M. piperita

(foto original)

Fig. 4.3. Extractele alcoolice de M. spicata

(foto original)Culturile microbiene i mediul de cultur utilizat pentru testarea activitii antimicrobiene a extractelor de Mentha piperita i Mentha spicata.

S-a urmrit comportamentul a 6 culturi microbiene (fig. 4.4-4.9) Gram pozitive i Gram negative n prezenta celor 5 extracte alcoolice de Mentha piperita i Mentha spicata.

Culturile microbiene testate sunt: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis, Salmonella i Candida albicans.

Fig.4.4. Staphylococcus aureus, aspecte macroscopice i microscopice (40, 49)

Fig. 4.5. Escherichia coli, aspecte macroscopice i microscopice (40, 48)

Fig. 4.6. Klebsiella pneumoniae, caractere macroscopice i microscopice (42, 43)

Fig. 4.7. Enterococcus faecalis, caractere microscopice i macroscopice (38, 39)

Fig. 4.8. Candida albicans, caractere macroscopice i microscopice (44, 45)

Fig. 4.9. Salmonella caractere macroscopice i microscopice (34, 37)Pentru culturile bacteriene a fost utilizat mediu nutritiv Mueller Hinton (fig. 4.10).

Compoziia mediului nutritiv Mueller Hinton:

Extract de vit 2,0g

Hidrolizat acid de cazein 17,5g

Amidon 1,5g

Agar 17,5g

Ap distilat 1000 ml

pH la temperatura de 25C 7,30,2

Fig. 4.10. Mediu nutritiv Mueller Hinton (foto original)

Fig. 4.11. Mediu nutritiv Sabouraud (foto original)

Mediul nutritiv Sabouraud (fig. 4.11) a fost utilizat pentru nsmnarea speciei Candida albicans.

Compoziia chimic a mediului Sabouraud (4) - Glucoz 40g;

- Pepton 10g;

- Agar 20g;

- Ap distilat 1000ml;

pH = 6.5-7Mediile nutritive au fost sterilizate prin autoclavare la temperatur de 121C, timp de 15 minute, dup care au fost repartizate n plci Petri sterile. n fiecare plac s-au repartizat cte 10 ml de mediu. Dup rcirea i solidificarea mediului s-a efectuat operaia de inoculare cu cele ase culturi microbiene.

Metoda de nsmnare a culturilor microbiene

Suspensile microbiene au fost nsmnate n cte dou repetiii pe mediile nutritive corespunzatoare aplicnd tehnica diseminrii inoculului (4).Etapele de lucru ale acestei tehnici sunt:

- suprafaa mediului nutritiv din plcile Petri se zvnt n termostat timp de 30 de minute la temperatura de 37C;

- 1 ml suspensie microbian, aspirat cu o pipet steril se depune pe suprafaa mediului solid;

Obinerea biodiscurilor si stabilirea concentraiei inhibante prin metoda difuziei n mediu nutritiv

Biodiscurile cu diametrul de 5 mm, au fost obinute din hrtie de filtru.

Metoda difuzimetric este o metod rapid i eficient de stabilire a rezistenei simple sau multiple a unui microorganism la aciunea unei substane. Avantajul acestei metode const n faptul c se poate stabili gradul de sensibilitate sau rezisten la un set larg de substane.

Pe suprafaa mediului inoculat din plcile Petri s-au depus cu ajutorul unei pense sterile biodiscurile impregnate cu extractele alcoolice. n paralel a fost studiat i efectul antimicrobian al solventului (varianta control: E1).

Plcile Petri au fost incubate n termostat timp de 24 ore, la temperatura de 37C.

5. REZULTATE I DISCUIIDatele experimentale obinute dup o perioad de incubare de 24 ore sunt cuprinse n graficele 5.1.-5.6.

Rezultatele experimentale obinute n urma interaciunii microorganism-extract alcoolic au fost raportate la varianta control (E1). Rezultatele antibiogramei au fost raportate la testele standard de sensibilitate/rezisten corespunzatoare fiecrei specii microbiene.

Din studiile efectuate pn n prezent se poate afirma faptul c extractele de Mentha piperita au o activitate antibacterian mai bun mpotriva unor microorganisme implicate n patologia uman, comparativ cu alte plante (20).

Fig. 5.1. Efectul extractelor de M. piperita i M. spicata asupra speciei bacteriene E. faecalisLa toate extractele testate E. faecalis prezint o sensibilitate mai mult sau mai puin pronunat comparativ cu E1. La E1 specia bacterian prezint rezistena (fig. 5.1), (anexa1, fig. 1).Conform antibiogramei, E. faecalis prezint sensibilitate la ambele antibiotice testate (fig. 5.1).

De asemenea, se poate observa faptul ca dintre extractele testate, E2 (M.piperita) i E5 (M.spicata), prezint cea mai ridicata activitate antimicrobian fa de E1.

Fig. 5.2. Efectul extractelor de M. piperita i M. spicata asupra speciei bacteriene Salmonella

Fig. 5.3. Efectul extractelor de M. piperita i M. spicata asupra speciei C. albicansntre varianta control (E1) i rezultatele obinute prin utilizarea extractului E2 de M. piperita nu exista diferene semnificative n privina rezistenei speciei Salmonella (fig. 5.2), (anexa 1, fig. 2). n schimb a fost evideniat o sensibilitate pronunat a acestei specii la celelalte extracte obinute din cele doua specii vegetale: M. piperita (E2, E3) i M. spicata (E4, E5).

Gradul de sensibilitate a speciei bacteriene n prezena celor dou antibiotice este diferit, fiind mai accentuat n cazul antibioticului E8.

Dintre toate extractele testate, E4 de M. piperita i E6 de M. spicata prezint cea mai ridicat activitate antimicrobian.

Conform datelor din fig. 5.3, (anexa 2, fig 1), C. albicans prezint rezistena la E1 . De asemenea, valori apropiate celor nregistrate de E1 au fost remarcate i n prezena extractului E2.

Dintre extractele testate se poate afirma faptul c E4 de M. piperita i E5 de M. spicata prezint activitatea biologic cea mai pronunat.

Dintre cele doua antibiotice E8 are efectul antimicrobian cel mai pronunat (fig. 5.2 i 5.3).

Fig. 5.4. Efectul extractelor de M. piperita i M. spicata asupra speciei bacteriene

K. pneumoniae Specia bacterian K. pneumoniae prezint o sensibilitate crescnd ncepand cu E2 pn la E6. Efectul bacteriostatic cel mai pronuntat l prezint extractele de M. spicata (fig. 5.4). (anexa 2, fig.2).

Fig. 5.5. Efectul extractelor de M. piperita i M. spicata asupra speciei bacteriene E. coli

Fig. 5.6. Efectul extractelor de M. piperita si M. spicata asupra speciei bacteriene S. aureusn general , activitatea bacteriostatic a extractelor de M. piperita i M. spicata este mai redus n cazul speciei E. coli i S. aureus (fig. 5.5. si 5.6), (anexa 3, fig.1).

Efectul antibacterian cel mai pronunat a fost evideniat prin utilizarea extractului E4 de M. piperita (fig. 5.5).

Dintre cele doua antibiotice testate E8 are un impact negativ mai mare asupra speciilor: E. coli si S. aureus (fig. 5.5 si 5.6), (anexa 3, fig. 2).

Din studiile efectuate de Kazemi i M., Rostami H. i Shafiei S. (2012), cu privire la activitatea antibacterian i antifungic a uleiurilor eseniale din unele plante medicinale printre care i Mentha piperita, respectiv Mentha spicata reiese faptul c Mentha piperita prezint activitate antimicrobian , dar aceasta este mai redus comparativ cu Mentha spicata.

CONCLUZIIActivitatea antimicrobian depinde de plant, compoziia chimic a extractelor, precum i de specia microbian.

Speciile microbiene testate prezint rezistena fa de solventul alcoolic (E1), cu excepia speciei S.aureus.

n urma antibiogramei, se constat faptul c dintre cele doua antibiotice antibacteriene se remarc n special E8.

Conform studiilor cuprinse n aceast lucrare nu exist diferene semnificative ntre speciile microbiene Salmonella i C. albicans i ntre cele doua specii i varianta control n privina rezistenei nregistrat n urma interaciunii cu solventul, respectiv cu E2.

Dintre toate extractele alcoolice de M. piperita testate, E2, E3, E4 au prezentat activitate antimicrobian mai accentuat i n special ultimele doua extracte.

Dintre toate extractele alcoolice de M. spicata testate, E5 prezinta efect bacteriostatic n cazul tuturor culturilor microbiene testate.

n concluzie se poate recomanda utilizarea extractelor cu activitate antimicrobian pronunat difereniat n funcie de specia microbian.

De asemenea se pot utiliza ambele plante cu specificaia c este de preferat s se in cont de partea component a plantei din care se obine extractul.ANEXA 1

Fig.1. Efectul extractelor de M.piperita i M. spicata asupra speciei Enterococcus faecalis (foto original)

Fig.2. Efectul extractelor de M.piperita i M. spicata asupra speciei Salmonella (foto original)ANEXA 2

Fig. Fig.1. Efectul extractelor de M.piperita i M. spicata asupra speciei Candida albicans (foto original)

Fig. Fig.2. Efectul extractelor de M.piperita i M. spicata asupra speciei Klebsiella pneumonia (foto original)ANEXA 3

Fig. Fig.1. Efectul extractelor de M.piperita i M. spicata asupra speciei Escherchia coli (foto original) Fig. Fig.1. Efectul extractelor de M.piperita i M. spicata asupra speciei Staphylococcus aureus (foto original)BIBLIOGRAFIE1. Ali M. A., M. Saleem, W. Ahmad, M. Parvez and R. Yamdagni (2002). A Chlorinated Monoterpene Ketone, Acy-lated-Sitosterol Glycosides and a Flavanone Glycoside from Mentha longifolia (Lamiaceae), Phytochemistry, Vol. 59, No. 8, pp. 889-895. 2. Anghelescu Eufimia i colab. (1996). Bacteriologie medical, Editura Mirton Timioara3. Ba Adrian Gheorghe, (2001). Cercetri privind producerea i valorificarea plantelor medicinale i aromatice n sistemul agriculturii ecologice pentru zona de sud a Romniei, Bucureti (Rezumatul tezei de doctorat). 4. Borozan Aurica Breica, (2006). Microbiologie (indrumator de lucrari practice), Editura Mirton Timisoara, p.62-70.5. Burt S.A., Reinders, R.D. (2003). Antibacterial activity of selected plant essential oils against Escherichia coli O157:H7, Letters in Applied Microbiology, pp,36, 162-167.6. Ctlina Tudora, (2011). Tehnologii de cultivare a plantelor medicinale i aromatice n zona Clrai-Silistra, Bucureti.7. Delamare APL, Moschen-Pistorelo IV, Artico L, Atti-Serafini L, Echeverrigary S (2007). Antibacterial activity of the essential oils of Salvia officinalis L. And Salvia triloba L. cultivated in South Brazil. Food Chem.,100:603-608.8. Giurgiu Eugen, Octavian Claudiu Giurgiu (2012). Plante medicinale importante n tratamentele naturiste, Ediia ilustrat.

9. Imbrea Florin, (2006). Plante medicinale i aromatice,Editura Eurobit, Timioara.10. Jansenn MA. ET AL. (1987). Antimicrobial ativities of essential oils. Pharmaceutische Week blad ( Scientific Edition).11. Juarez Castillo, Gonzalez V, Jaime-Aguilar H, Martinez G, Linares E, Bye R, Romero I. (2009). Anti-Helicobacter pylori activity of plants used in Mexican traditional medicine for gastrointestinal disorders. J Ethnopharmacol.12. Kazemi M., Rostami H. and Shafiei S. (2012). Antibacterial and Antifungal Activity of some Medicinal Plants from Iran. Journal of Plant Sciences,pp 7: 55-66.13. Lzureanu Aurel, Agrotehinc, (1994). Editura Helicon, Timioara.14. Moldovan Roxana i colab., (2008). Curs de Microbiologie Medical, Universitatea de Medicin i Farmacie Victor Babe Timioara.15. Muntean Leon S., Tma Mircea, . Duda Marcel M., Vrban Dan I., Florian Simion (2007). Tratat de plante medicinale cultivate i spontane, Ed. Risoprint Cluj-Napoca.

16. Murray, BE. (1990). "The life and times of the Enterococcus.". Clin Microbiol Rev 3 (1): 4665. PMID2404568.17. Nascimento G.G.F., Juliana, Locatelli, Freitas, P.C., Giuliana, L.Silva (2000). Antibacterial activity of plant extracts and phytochemicals on antibiotic-resistant bacteria, Brazilian Journal of Microbiology, 31:247-256.18a. Niculae Mihaela , Spnu Maria, Carmen Dana andru, F. Brudac, P. Bolf (2008). Studii preliminare asupra potenialului antimicrobian al unor extracte vegetale. Analele SNBC Vol. XIII. 18b. Ponnan Arumugam Rajenderan Murugan .,Mahalingam Subathra Arabandi Ramesh (2009). Superoxide radical scavenging and antibacterial activities of different fractions of ethanol extract of Mentha spicata (L.), Boston.19. Pramila, D. M.1, Xavier, R.1, Marimuthu, K.1, Kathiresan, S.1, Khoo, M. L.1, Senthilkumar, M.2, Sathya, K.2 and Sreeramanan.(2012). Phytochemical analysis and antimicrobial potential of methanolic leaf extract of peppermint Mentha piperita: Lamiaceae. Journal of Medicinal Plants Research Vol. 6(2), pp. 331-335. 20. Preeti Dixit, Dr. K.N.M.I.P.E.R. Cloth Mills, Satish Park, Modi Nagar. (2013). A comparative screening of antibacterial activity of Anisomeles Indica with Mentha piperita against human pathogenic microorganisms, vol. 3 (1), pp.85-88.21. Rojas, J.J., Veronica, J. Ochoa, Ocampo, S.A., Munoz, J.F. (2006). Screening for antimicrobial activity of ten medicinal plants used in Colombian folkloric medicine: A possible alternative in the treatment of non-nosocomial infections, BMC Complementary Medicine, 6:2.

22. Ryan KJ, Ray CG (editors) (2004). Sherris Medical Microbiology (4th ed.). McGraw Hill. ISBN0-8385-8529-9.23. Spirling L. I. and I. R. Daniels (2001).Botanical Perspectives on Health Peppermint: More than Just an After-Dinner Mint, Perspectives in Public Health, Vol. 121, No. 1.24. Thiago ASA, Nelson LA, Elba LCA, Ulysses PA. (2008). A new approach to study medicinal plants with tannins and flavanoids contents from the local knowledge. J. Ethnopharmacol, 120: 72-80.25. Toma Felicia Screa, (2006). Bacteriologie Medical. Editura University Pres Targu Mure.

26. http://ro.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli

27. http://www.farmacia-verde.ro/2011/03/07/tonicul-din-gradina-menta

28. http://ro.wikipedia.org/wiki/Ment%C4%)

29. http://ro.wikipedia.org/wiki/Mentha_spicata30. http://mymedicalfinder.com/food-herbs-supplements/herbs/spearmint

31. http://www.doctoracasa.ro/plante-a-z/431-izma-menta.html

32. http://www.bioproduct.ro/articole/menta_ideala_pentru_gradini_parfumate.htm33. http://en.wikipedia.org/wiki/Candida_albicans34. http://www.scrigroup.com/educatie/biologie/diagnosticul de laborator35. http://www.aromaazinternational.com/Mentha-Piperita-9336. http://mkk.szie.hu/dep/kerteszet/ta/knkt/gyogyn/Mentha%20spicata.html37. www.google.ro/search?q=salmonella+typhi&hl=ro&source=lnms&tbm=isch&38. http://www.google.ro/Enterococcus%.2520faecalis39. www.visualphotos.com/image/1x6040624/coloured_sem_of_enterococcus_faecalis40. http://prep4md.blogspot.ro/2008/06/staphyococcus-aureus-and-food.html 41.http://www.marlerblog.com/lawyer-oped/e-coli-o157h7-season-is-nearly-upon-us-will-it-be-2005-and-2006-or-2007-and-2008/#.UdWQsawQyZR42. http://www.tumblr.com/tagged/klebsiella%20pneumoniae43. http://vetbook.org/wiki/cow/index.php/Klebsiella_spp44. fineartamerica.com/products/candida-albicans-yeast-sem--poster.html

45. http://thunderhouse4-yuri.blogspot.ro/2009/12/candida-albicans.html46. http://www.google.ro/search?q=mentha+piperita&hl=ro&source=lnms&tbm47. http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mentha_spicata_var._viridis_002.JP

48. http://www.keepourfoodsafe.org/2011/06/49. http://medchrome.com/mbbs-exams/staphylococcus-aureus-lab-diagnosis-and-disePAGE 1