Determinarea contaminarii bacterienea aerului, suprafetelor si obiectelorCunoasterea gradului de contaminare a aerului, suprafetelor si obiectelor cu microorganisme constiuie un criteriu important de apreciere a conditiilor de igiena. Determinarile se fac in special pentru acele spatii pentru care exista un risc crescut de transmitere a bolilor infectioase.Determinarea germenilor din aer

Aerul nu are o microflora proprie. In aer se gasesc totusi in permanenta germeni aflati in suspensie: virusuri, bacterii, fungi. Acesti germeni provin din mediul extern(germeni care se dezvolta la 15-22C aeromicroflora criofil), sau sunt de provenienta umana sau animala(germeni care se dezvolta la 37C-aeromicroflora mezofil). Acestia din urma sunt germenii care prezinta interes din punct de vedere al importantei determinarii lor, pentru ca prezenta lor este legata de posibilitatea transmiterii aerogene a unor boli infectioase. Germenii mezofili de origine umana eliminati in aer sunt saprofiti, conditionat patogeni sau strict patogeni si provin din: nazofaringe si cavitatea bucala, mai rar din trahee si bronhiile mari ; de pe suprafata cutanata(intacta sau lezata) ; dejecte.Analiza bacteriologica a aerului nu se face in scop de diagnostic epidemiologic ci de apreciere a potentialului ambiantei de a permite transmiterea aerogena a infectiilor. Indicatorii bacteriologici de contaminare a aerului-numarul total de germeni mezofili din aer, care se dezvolta la 37C, reprezinta un indicator global al aprecierii conditiilor de igiena dintr-o incapere.

-numarul de streptococi hemolitici reprezinta un indicator al contaminarii aerului cu flora nazofaringiana si bucala iar prezena tulpinilor - hemolitice indica prezenta unei persoane bolnave sau purtatoare de germen.

-numarul de stafilococi (majoritatea sunt germeni saprofii care populeaz cile aeriene sau tegumentele umane sau animale) reprezinta un indicator cu semnificatie apropiata de cea a microrganismelor mezofile, indicand mai prcis originea umana sau animala a contaminarii.

-numarul de germenii coliformi (germeni de origine intestinal, )indica un grad mare de insalubrizare a mediului dintr-o incpere. Metode de determinare Etapele specifice sunt:- recoltarea germenilor din aer; -insamantarea si incubarea; -interpretarea rezultatelor.Recoltarea prin sedimentare metoda Koch

-consta in retinerea germenilor pe suprafata unor cutii Petri ce contin medii de cultura solide.

-cutiile Petri se expun la locul determinarii timp de 5-60 minute, n funcie de gradul contaminrii.

-dupa terminarea expunerii se inchid si se incubeaza la termostat la 37C /24 ore.

-se numara coloniile dezvoltate (fiecare germen da nastere la o colonie).Avantaje : metoda simpla ce permite un numar mare de derminari.Dezavantaje : determina doar germenii sedimentati in unitatea de timp cat a fost expusa cutia Petri, rezultatele neindicand gradul real al contaminarii aerului.Recoltarea prin aspiratieDispozitivul de recoltare este alcatuit din sistemul de aspiratie, debitmetrul si sistemul de retinere a germenilor.

Retinerea germenilor in acest tip de metoda se realizeaza prin filtrare, barbotare sau impact.

a. recoltarea prin aspiratie cu retinere prin filtrare: se folosesc filtre Petri din nisip de cuart steril sau filtre solubile care dupa recoltare se spala cu solutii izotone sterile care vor fi insamantate ulterior in diferite dilutii.Aplicabilitate mai mare o au membranele filtrante care dupa aspirarea aerului sunt aplicate direct pe suprafata mediului de cultura.

b. Recoltarea prin aspiratie cu retinere prin barbotare: aerul aspirat este barbotat prin solutia izotona sterila ce se afla in vasul de barbotare. Aceasta solutie se insamanteaza pe suprafata unui mediu de cultura solid .c. Recoltarea prin aspiratie cu retinere prin impact: aerul aspirat este proiectat direct pe suprafata mediului de cultura solid ce va retine germenii aflati in suspensie in aerul aspirat.Toate metodele mentionate au ca etape urmatoare retinerii pe cea a incubarii si interpretarii rezultatelor.

Mediile de cultura folosite sunt medii solide fiind diferite in raport cu indicatorul bacteriologic cercetat:-geloza nutritiva sau geloza sange pentru determinarea numarului total de germeni mezofili.

-geloza sange cu violet de gentiana pentru determinarea numarului de streptococci .

- geloza nutritiva sau geloza sange pentru determinarea numarului de stafilococi.Recoltarea prin electroprecipitare inducerea de sarcini electrice cu ajutorul unor electrozi de depunere aezai pe un mediu de cultur solid.Interpretare :Numarul total de germeni mezofili:

-incaperi in care se desfasoara activitati umane: sub 2500/m aer.

-colectivitati de copii: sub 1500/maer

-industrie alimentara: sub 600/maer.

-spitale: sub 600/m aer in saloane; sub 500/m aer in sali cu risc crescut de transmitere a infectiilor(sali de tratamente, de pansamente, de nasteri, bucatarii dietetice) ; sub 300/m aer in blocul operator.

Numarul de streptococi/stafilococi (tulpini hemolitice): se admit maxim 1-2% din numarul total de germeni mezofili si semnifica o contaminare de origine umana. Nu se admit in unitile sanitare.Numarul de coliformi: nu se admit iar prezenta lor semnifica un mediu insalubru.

Determinarea contaminarii bacteriene a suprafetelor si obiectelor

Pentru aprecierea gradului de contaminare a suprafetelor si obiectelor se folosesc : aceeasi indicatori dar cu precizarea ca germenii coliformi devin in acest caz indicator obligator. Etapele determinarii sunt aceleasi : recoltare, insamantare, incubare, interpretare.Metode de recoltare

Stergerea cu tampoane sterile:

Suprafata supusa analizei se apreciaza cu ajutorul unor sabloane sterile ce vor delimita o suprafata cunocuta. Odata stabilita, suprafata va fi stearsa cu un tampon de vata sau tifon sterilizat(asemanator cu ecuvioanele folosite in recoltarea exudatului faringian), uscat sau usor umezit in solutia izotona sterila. Dupa recoltare tampoul se introduce intr-un flacon ce contine 10 ml solutie izotona sterila. Se agita si din suspensie se vor face diverse dilutii pentru insamantare. Se face apoi incubarea si numararea coloniilor urmata de interpretare . Spalarea suprafetelor sau obiectelor-Se spala( mai ales mainile)cu solutie izotona sterila care va fi apoi insamantata pe mediu de cultura si incubata.

-Utilizarea de pelicule adezive sterilizate ce se aplica pe suprafata de cercetat iar dupa recoltare se depun pe suprafata mediului de cultura minim 30 secunde, dupa care se incubeaza.

-Contactul direct cu mediul de cultura timp de minim 15 secunde, urmata de incubare.

Interpretare:

Numar total de germeni mezofili:

-salon-sub 5/cm-sali cu risc crescut-sub 3/cm-bloc operator-sub 2/cm-mainile chirurgilor dupa spalare-sub 10/cm-minile personalului ce efectueaza diferite proceduri pe bolnav-sub 40/cm.-instrumente sterile -absentiO mana este considerata curata daca pe o suprafata de 2,8 cm sunt determinati pana la 1 germene mezofil, relativ curata daca sunt determinati pana la maxim 100 germeni mezofili si murdara daca sunt determinati peste 100 germeni mezofili.

Nu se admite prezenta germenilor : streptococi si stafilococi hemolitici si a germenilor coliformi.