AMS 2000 TRADING IMPEX SRL

PROPUNERE TEHNICA

Anexa 11 A - Kituri si reagenti - Programe Cofinantate 2012 – SalmonellaCompartiment Bacteriologie

AplicatieAntiserurile de Salmonella de la Statens Serum Instititut se utilizeaza pentru serotiparea completa sau partiala prin aglutinare pe lama si pentru identificarea antigenelor H prin inversia de faza.

DescriereAntiserurile sint produse prin hiperimunizarea iepurilor sanatosi cu tulpini standard, fiecare poseda antigene de grup O si H. Anticorpii Vi sint monoclonali si obtinuti in lichidul de ascita de soarece.Antiserurile pot fi utilizate separate sau in combinatie, in functie de scopul efectuarii testului.Antiserurile sint ambalate in fiole de 3 ml.

Principiul Prin omogenizarea culturii bacteriene cu antiser specific se formeaza agregate observabile macroscopic (aglutinare). Serotipul se determina pe baza reactiei de aglutinare anticorpi-antigene, utilizindu-se Schema de identificare Kauffmann-White.

Produse necesare, neincluse in kitAgar neselectivAnse sau ace de inoculare Lame de sticlaSolutie ser fiziologic pH 7.4Schema Kauffmann-WhiteCutii Petri (diametru 6 cm)Cuptor cu microunde sau baie de apa (100C)Termometru Pipeta Incubator 35-37C

Mod de lucru

GeneralSerul fiziologic se se foloseste drept control negativ si trebuie sa fie negativ. In cazul in care este pozitiv (aglutineaza), tulpina este autoaglutinanta.

Aglutinarea pe lama1. Se pune o picatura (aprox. 20 µl) antiser pe lama asezata pe un fond

negru.2. Se recolteaza cu ansa cultura bacteriana provenind din citeva colonii si se

transfera in picatura de ser fiziologic, se omogenizeaza bine. Cantitatea de cultura trebuie sa fie suficienta pentru a da un aspect laptos amestecului (turbiditate).

3. Se agita lama prin inclinare timp de 5-10 secunde.

4. Daca reactia este pozitiva, se observa aglutinarea (formare de grunji) cu ochiul liber. Reactia negativa consta in mentinerea aspectului laptos. In cazul aparitiei un reactii de aglutinare intirziata sau slaba, rezultatul va fi considerat negativ.

Absenta reactiei se poate datora fie exprimarii antigenelor Vi, fie unei tulpini neacoperita de antiserul respectiv sau unei tulpini alta decit Salmonella.

Antigenul ViPrezenta antigenului Vi poate sa interfere sau sa impiedice aglutinarea antiserurilor O. Din acest motiv, probele negative trebuie examinate si pentru antigenul Vi. Coloniile in care se exprima antigenul Vi sint mai opace decit coloniile fara antigen Vi.

Pastrare si valabilitateAntiserurile se pastreaza la 2-8oC , la intuneric.Data expirarii este tiparita pe cutie si eticheta aplicata pe fiola. Turbiditatea datorata precipitarii lipoproteinelor este uneori observata dupa pastraea indelungata. Precipitarea si/sau contaminarea pot fi indepartate prin centrifugare (10,000g) urmata de filtrarea sterile (0.22 µm).