AGAR BILA ESCULINA – Cod: AM1012/AM5012Mediu de cultura diferential deshidratat

SCOPMediu diferential pentru izolarea si identificarea prezumtiva a streptococilor de grup D/enterococilor din alimente.

SUMARMediul agar bila esculina a fost formulat de Swan pentru izolarea si identificarea streptococilor de grup D din alimente. Initial, testul cu bila esculina a fostutilizat pentru identificarea enterococilor. Deoarece streptococii de grup D pot fi identificati prin acelasi tip de test ca cel pentru identificarea enterococilor, serecomanda si efectuarea altor teste precum toleranta la sare, pentru identificarea enterococilor. Meyer si Schonfeld au demonstrat ca majoritateaenterococilor au crescut pe esculina si au lizat-o in timp ce alti streptococi nu au crescut. Acest mediu este utilizat pentru a diferentia enterococi siStreptococcus bovis fata de alti streptococi. Rochaix a explorat importanta hidrolizei esculinei in identificarea enterococilor. Agarul bila esculina este inclus inmanualul analitic bacteriologic pentru testarea alimentelor si cosmeticelor si este recomandat de catre APHA pentru examinarea alimentelor, apei si apeireziduale.

PRINCIPIUOxagall inhiba cresterea bacteriilor gram-pozitive altele decat streptococii de grup D si enterococi. Citratul feric este indicator al hidrolizei esculinei si alproducerii de esculetina. Enterococii/streptococii de grup D hidrolizeaza esculina glicozida in dextroza si esculetina, care reactioneaza cu citratul fericrezultand intr-un complex negru-maroniu. De asemenea, mediul ajuta la diferentierea genului Klebsiella-Enterobacter-Serratia fata de alteenterobacteriaceeae in baza hidrolizei esculinei.

FORMULA*Ingrediente in gram/litru

Peptona 5.00Extract de vita 3.00Esculina 1.00Oxgall 40.00Citrat feric 0.5Agar 15.00pH final: 6.6±0.2 la 25oC*formula ajustata pentru atingerea parametrilor de performanta

Cod Produs AM1012 AM5012Impachetare 100 g 500 g

PASTRARE SI STABILITATE:Flaconul nedeschis se pastreaza la temperatura camerei sub 30oC. In conditii optime mediul are o perioada de valabilitate de 2-5 ani. La deschiderea pentruprima data a flaconului notati data si ora, in locul specificat pentru aceasta pe eticheta. De fiecare data dupa ce luati cantitatea de mediu necesara reinchidetiermetic pentru a evita hidratarea.

INDICATII:1. Se suspenda 64.5g pudra de mediu in 1000ml apa distilata si se omogenizeaza bine.2. Se incalzeste agitand frecvent si se fierbe pentru dizolvarea completa a pulberei.3. Omogenizati si distribuiti in tuburi precum este dorit.4. Se sterilizeaza prin autoclavare la 121oC (presiune de 15 lbs) timp de 15 minute.5. Lasati mediul sa se raceasca in pozitie inclinata.

CONTROLUL CALITATIIAspectul mediului deshidratat – pudra publere, omogena, de culoare maro-galbena.Aspectul dupa preparare - gel usor opalescent, colorat in galben cu o usoara tenta albastruie.Caracteristicile culturii - dupa incubare 18-48 ore la 35-37 oC in atmosfera cu dioxid de carbon crescut.

Organisme (ATCC) Crestere Hidroliza esculineiEnterococcus faecalis (29212) Luxurianta +Escherichia coli (25922) Luxurianta -Streptococcus pyogenes (19615) Partiala – complet -

inhibataStandardele de performanta ale acestui mediu sunt in conformitate cu standardele NCCLS de asigurare a calitatii in cazul mediilor de cultura pentrumicrobiologie, preparate.

PROCEDURA DE LUCRU1. Insamantati pe mediu doua sau trei colonii.2. Incubati in conditii aerobe, 37oC pentru 18-24 ore.

INTERPRETAREA REZULTATELOR1. Inegrirea mediului in jurul coloniilor indica un rezultat pozitiv pentru hidroliza esculinei.2. Pe mediile inclinate, daca in decursul a 24-48 ore mai mult din jumatate din panta este innegrita, testul este pozitiv; daca mai putin din jumatate

din panta este innegrita sau deloc in decursul a 24-48 ore, testul este negativ.

LIMITARI:1. Utilizati un mediu usor. Un mediu greu poate cauza dificultati in interpretarea rezultatelor si poate scadea abilitatea bilei de a inhiba cresterea altor

organisme gram-pozitive care pot cauza hidroliza esculinei.2. Pe mediu pot creste unii streptococi in prezenta bilei fara a cauza hidroliza esculinei.3. Cresterea fara innegrire a mediului reprezinta un rezultat negativ.4. Bacili gram-negativi pot creste pe acest mediu si pot cauza hidroliza esculinei.5. Daca sunt prezente, tulpinile de Lactococcus, Leuconostoc si Pediociccus (izolate din infectiile la om) pot da o reactie bila-esculina pozitiva.6. Ocazional, tulpinile de Streptococcus viridans innegresc mediul sau dau reactii slab pozitive.7. Acest mediu nu este recomandat pentru izolarea primara a specimenelor.

Folosirea si aruncarea mediilor de cultura deshidratateInocularea deliberata sau accidentala a mediilor de cultura cu bacterii, conduce la producerea unui numar foarte mare de organisme. Concentratii mari aleoricaror microorganisme prezinta un risc biologic si trebuie aruncate conform normelor de siguranta. Astfel, dupa utilizare placile preparate, probele, sioricare alte materiale contaminate trebuie sterilizate sau incinerate inainte de aruncare. Toate deseurile autoclavate trebuie aruncate in conformitate cureglementarile locale in rigoare. Numai personalul calificat in efectuarea de proceduri caracteristice microbiologiei trebuie sa manipuleze probele infectate simediile de cultura inoculate. Utilizatorul trebuie sa se asigure ca orice instalatie sau aparat folosit si contaminat din intamplare trebuie dezinfectat in modcorespunzator sau sterilizat. Mediul ambient in care culturile microbiologice sunt manipulate trebuie de asemenea luat in considerare.

Rev. 12.2014 ms