Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12

Elaborare metodic pentru studeni i profesori

(Chimie farmaceutic - II)

RED.:01

DATA:

06.07.2009

Pag. 1 / 17

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12

Elaborare metodic pentru studeni i profesori

(Chimie farmaceutic - II)

RED.:01

DATA:

06.07.2009

Pag. 2 / 17

Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu

Facultatea Farmacie

CATEDRA CHIMIE FARMACEUTIC I TOXICOLOGIC

Aprobat la edina catedrei Proces verbal __ din __ ef de catedr, d.h.f., profesor universitar

_____________ Vladimir ValicaSubstane medicamentoase, derivai de tetracicline i nitrofenilalchilamineIndicaii metodice pentru studenii anului IIIAutori: Livia Uncu, Vladimir Valica, Elena Donici, Ana PodgorniCHIINU 2015IntroducereAceast tem include medicamente din grupul tetraciclinelor i nitrofenilalchilaminelor. ncepnd studierea temei, studenii se familiarizeaz cu unele particulariti de analiz a medicamentelor studiate (determinarea a diferitor indici fizico-chimici, analiza grupelor funcionale specifice, metode fizico-chimice de analiz i altele).

Scopul: A determina calitatea preparatelor medicamentoase derivai ai tetraciclinelor i nitrofenilalchilaminelor n corespundere cu structura lor chimic, care le determin metodele de obinere, prevederile de calitate i condiiile de conservare.

Scopuri determinate1. De a nsui caracteristica comparativ a proprietilor fizice i fizico-chimice a substanelor medicamentoase studiate.

2. De a acumula deprinderi n efectuarea reaciilor generale i particulare de identificare a substanelor medicamentoase studiate.

3. Reieind din proprietile fizice i chimice ale preparatelor medicamentoase studiate, a putea determina impuritile i argumenta prezena lor.

4. A putea efectua dozarea preparatelor medicamentoase n corespundere cu cerinele DAN.

5. A putea stabili condiiile de conservare a preparatelor medicamentoase n dependen de structura lor chimic i proprieti.

Coninutul lucrrii Pregtirea teoretic pentru ndeplinirea scopurilor determinare.

Lucrul practic al studenilor.

Recapitulare.

Material informativ

Caracteristica general a antibioticelorAntibioticele sunt substane care introduse n organism exercit efecte toxice fa de microorganismele bacteriene. Clasificarea antibioticelor:

1. Clasificarea chimic:

Betalactamide (heterociclice)peniciline, cefalosporine; Fosfonai fosfomicina; Lincosamide lincomicina, clindamicina; Macrolide eritromicina, oleandomicina, azitromicina; False macrolide rifampicine; Polipeptide polimixine, bacitracina; Glicopeptide vancomicina, teicoplanina; Aminoglicozide streptomicine, neomicine, canamicine, gentamicine; Tetracicline (aliciclice) Arilalchilice (aromatice) fenicoli, cloramfenicol; Diverse: fusidanine, cumarine, sinergistine, ciclotialidine, oxazolidinone, chinolone etc.2. Dup tipurile de activitate antibacterian:

bactericide, omoar germenii; sunt indicate n infecii grave. Dezavantajul lor este c produc efecte toxice n momentul n care mor germenii. Exemplu: peniciline, cefalosporine, aminoglicozide.

bacteriostatice, inhib multiplicarea germenilor; sunt indicate n cazul infeciilor uoare. Exemplu: tetraciclina, eritromicina, cloramfenicol.3. Dup spectru de activitate al antibioticelor:Totalitatea microorganismelor sensibile la un antibiotic sau chimioterapic reprezint spectrul antimicrobian al acestuia.

Antibiotice cu spectru ngust

Antibiotice cu spectru larg

Antibiotice cu spectru ultralarg4. Dup mecanismul de aciune:

la nivelul peretelui bacterian peniciline, cefalosporine, vancomicina, bacitracina, cicloserina; la nivelul membranei citoplasmatice vancomicina, polimixine, amfotericina B, nistatina; la nivelul ribozomilor sau nucleului aminoglicozidele, tetraciclinele, cloramfenicolul.Rezistena microbian la antibiotice

Mecanismele biochimice de instalare a rezistenei la antibiotice:

-elaboreaz enzime specifice pentru un anumit antibiotic. Exemplu: betalactamazele,penicilaza, cefalosporinaza, acetilaza care acetileaza cloramfenicolul, fosforilaza;

-scderea permeabilitii peretelui microbian fa de antibiotic;

- modificarea configuraiei receptorilor sau afinitii acestuia pentru antibiotic;

-elaborarea unui antagonist endogen;

- pompare n exterior a antibioticului.

Rezistena intrisec (natural) este determinat de:

- asimilarea sczut a antibioticului prin porine n interiorul celulei (impermeabilitatea celular);

- sisteme de eflux. Aceste bacterii au virulen joas, dar rezistena lor multipl le permite s persiste n mediul spitalicesc i s cauzeze infecii nosocomiale (ex Ps. aeruginosa). Rezistena dobndit este determinat de:

- mutaiile ce afecteaz gene de pe cromozomii bacterieni sau mutaiilor n gene mobile dobndite. Mutaiile implic de obicei tergerea, substituirea sau adiia uneia sau mai multor perechi de baze cauznd substituirea unuia sau ctorva aminoacizi dintr-un peptid esenial.

Rezistena transferabil- conjugare (pasaj intercelular al plasmidelor sau transpozonilor) cea mai comun metod de transfer a rezistenei la bacteriile importante clinic;

- transducie (transfer de ADN prin bacteriofagi);

- transformare (asimilarea de ADN);

Metode de analiz ale antibioticelor

Dozarea:

Metode biologice:

Determinarea activitii microbiologice a antibioticelor prin metoda difuzimetric se bazeaz pe compararea zonelor de inhibiie ale creterii unui microorganism-test, produse de concentraii cunoscute dintr-un antibiotic-standard, cu zonele de inhibiie produse de concentraii presupuse egale ale antibioticului de analizat;Determinarea activitii microbiologice a antibioticelor prin metoda turbidimetric se bazeaz pe msurarea concentraiei (la fotocolorimetru sau turbidimetru) a celulelor de microorganism-test care formeaz o densitate optic (tulbureal) n rezultatul creterii lor n prezena unei cantiti minime de antibiotic.

Metode fizico-chimice:

Spectrofotometria (UV, VIS, IR)

Fotocolorimetria

Fluorimetria

Cromatografia

Uniti de aciune antibacterian

1 UA antibacterian este cantitatea minim de antibiotic, care manifest aciune bacteriostatic sau bactericid asupra coloniei standard de test- microorganism ntr-un anumit volum al mediului de cultur.

Aciunea biologic se msoar n UA, care se conin n 1 ml de soluie sau 1 mg de substan.

Substane medicamentoase, derivai de tetraciclineTetraciclinele prezint derivai ai naftacenei parial hidratat, compus alctuit din patru carbocicle hexagonale condensate binar.

Naftacen (tetracen)

Tetarciclinele sunt compui polifuncionali. Ei conin hidroxil fenolic (poziia 10), hidroxili enolici (3 i 12), grupa dimetilaminic (poziia 4), gruparea carboxamid (poziia 2), gruparea metilic (poziia 6), hidroxili alcoolici (poziia 6, 12a la tetraciclin), pot fi i alte grupri la derivaii corespunztori. Tabelul 1Substanele medicamentoase, derivai ai tetraciclinelorDenumirea romna, latin i chimic, formula de structurDescrierea. Solubilitatea

Clorhidrat de tetraciclin

Tetraciclini hydrochloridum

Clorhidrat de 4-dimetilamino-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahidro-3,6,10,12,12a-pentoxi-6-metil-1,11-dicetonaftacen-2-carboxamid

Pulbere galben cristalin, cu gust amar, fr miros.

Solubil n ap 1:10 i 1:100 n alcool.

-239 - -2580, =2,0-2,8

r = 480,9

Clorhidrat de oxitetraciclin

Oxytetraciclini hidrochloridum

Clorhidrat de 2-dimetilamino-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-hidroxi-6-metil-1,11-dicetonaftacen-2-carboxamid

Pulbere galben, cristalin, fr miros, cu gust amar.

Uor solubil n ap (1:3), greu n alcool.

-118 - -2000, =2,3-2,9

r = 496,9

Clorhidrat de doxiciclin Doxyciclini hydrochloridu

Clorhidrat de 6-dezoxi-5-oxitetraciclin

Pulbere galben, cristalin, fr miros, cu gust amar.

ncet solubil n 3 pri de ap, n metanol, practic insolubil n eter i cloroform. Se dizolv n soluii de hidroxizi i carbonai alcalini, n care se inactiveaz n timp.r = 512,9

Metode de obinere ale tetraciclinelorn industria farmaceutic de antibiotice, tetraciclinele se obin prin metoda de biosintez n profunzime, n fermentatoare de mare capacitate, pe medii de cultur speciale, aseptice. Mediile de cultur conin substane care constituie surse de carbon (amidon, extract de porumb, glucoz, uleiuri vegetale), surse de azot (aminoacizi, cazein, proteine, uree, fin de soia), sruri minerale (sulfai i fosfai de potasiu, calciu, magneziu , fer, cupru). Pentru fiecare antibiotic n mediul de cultur se mai adaug factori determinani specifici: ioni de clorur pentru clortetraciclina, inhibitori de clorurare pentru tetracicline. Durata procesului de fermentaie este 4-6 zile, temperatura 26-280C, pH = 4-6. Dup filtrarea prealabil antibioticul din mediul de fermentaie se izoleaz prin procedeele de extracie, absorbie sau precipitare.

Proprietile chimice i identificarea tetraciclinelorTetraciclinele sunt compui amfoteri. Grupa dimetilaminic posed proprieti bazice i de aceea tetraciclinele formeaz sruri cu acizii organici i anorganici (srurile sunt instabile, uor hidrolizeaz). Pe baza hidroxizilor enolici i fenolic ei posed proprieti acide i pot forma sruri solubile cu metalele alcaline. Posednd structur aliciclic a inelelor A, B i C i a hidroxilului fenolic, moleculele tetraciclinelor sunt instabile la aciunea bazelor, carbonailor, metalelor alcaline, acizilor minerali puternici (pH=2) a luminii i umiditii.

n mediul slab alcalin i la temperatura mai mare de 300C tetraciclinele se supun procesului de epimerizare: inversarea configuraiei funciei dimetilaminice la C4 cu formarea epitetraciclinelor, lipsite de activitate antibiotic.

Tetraciclin Epitetraciclin

n mediul alcalin tetraciclinele se descompun n izotetracicline, inactivndu-se complet. Aceast transformare este nsoit de intensificarea culorii galbene, proprietate care poate fi folosit pentru identificarea tetraciclinelor (reacie de grup).

Izotetraciclina

Pentru deosebirea tetraciclinelor se petrece reacia cu acidul sulfuric concentrat. n primul rnd se formeaz anhidroderivai, apoi se petrece reacia de oxidare cu formarea produselor colorate diferit.

Tetraciclina

Anhidrotetraciclina

Reacii de identificare datorate hidroxilului fenolic:

1. Tetraciclinele formeaz cu cationi polivaleni complexe chelate insolubile i colorate. Pentru identificarea tetraciclinei se utilizeaz reacia de formare a fenolailor i enolailor de fer (III):

2. Pentru identificarea tetraciclinei se utilizeaz de asemenea reacia de formare a azocoloranilor:

Determinarea cantitativ a tetraciclinelor

Metoda biologic

Metoda acido bazic n mediu anhidru;

Metode fizico-chimice spectrofotometric, spectrofluorimetric, fotocolorimetric bazat pe reaciile cu clorura de fier (III) sau cu srurile de diazoniu.

Relaii structur-activitate n seria tetraciclinelorTetraciclinele sunt antibiotice bacteriostatice cu spectru larg de aciune. Clortetraciclina i oxitetraciclina, antibiotice naturale, au fost obinute din Streptomyces aureofaciens i respectiv Streptomyces rimosus n anii 1948-1950. Tetraciclina este un analog fr clor, obinut prin dehalogenizarea clortetraciclinei n 1953. Demeclocilina a fost obinut prin demetilarea clortetraciclinei. Folosirea lor este actualmente ntru-ctva limitat din cauza frecvenei relativ mari a tulpinilor bacteriene rezistente.

Tetraciclinele semisintetice din generaia a doua doxiciclina i minociclina au o poten mai mare, sunt active fa de unele tulpini bacteriene rezistente la tetraciclinele clasice, se absorb aproape complet din intestin, au o penetrabilitate tisular superioar i menin concentraii active timp mai ndelungat.

Alternana grupelor fenol-oxo-enol-oxo i prezena grupei dimetilamino (poziia 4) sunt indispensabile activitii; nlocuirea grupei carboxamidice (poziia 2) cu un rest acetil sau cian scade activitatea; Alchilarea carboxamidei permite obinerea de compui mai solubili; Prezena unei grupe OH- pe C5 (oxitetraciclina) conduce la creterea stabilitii moleculei n mediu acid; Modulrile la C6 au condus la tetracicline de semisintez cu t1/2 superior celor naturale i cu activitate superioar; Modulrile pe ciclul D au adus la obinerea minociclinei i aminociclinei, foarte active pe stafilococi rezisteni pe alte tetracicline i betalactamine.Proprietile farmacologice ale tetraciclinelor

Mecanismul de aciune

Tetraciclinele penetreaz prin difiziune membrana extern a bacililor gram-negativi i sunt transportate activ prin membrana citoplasmatic a celulelor microbiene, acumulndu-se intracelular. Celulele sensibile acumuleaz tetraciclinele n concentraii ce depesc mult concentraiile extracelulare. n interiorul celulei, tetraciclinele se leag reversibil de subunitile ribozomale 30 S cu blocarea consecutiv a legrii aminoacil-ARNt de complexul ARNm ribozom. Ca urmare, este oprit includerea aminoacizilor n lanul peptidic i respectiv mpiedicat sinteza proteinelor bacteriene. (fig. 1)Spectrul de aciune al tetraciclinelor cuprinde bacterii gram-pozitive i gram-negative pneumococi, gonococi, meningococi, Listeria, B-anthracis, Brucella, Vibrio cholerae, Haemophilus influenzae, Propionbacterium acnes, kampilobacterii, fuzobacterii, clostridii, riketsii, spirochete, micoplasme, chlamidii i unele protozoare. O mare parte din tulpinile de streptococ hemolitic, enterococi, E.coli, Klebsiella, Shigella, Enterobacter, Haemophilus influenzae, Seratia i Proteus indol-pozitiv, majoritatea tulpinilor de Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa i bacteroizi sunt rezistente la tetracicline.

Profilul farmacocinetic al tetraciclinelor este diferit n funcie de generaie. Preparatele din generaia a doua fiind mai liposolubile sunt mai avantajoase din punct de vedere al biodisponibilitii, distribuiei tisulare i epurrii.Tetraciclina, oxitetraciclina, demeclociclina se absorb din tractul gastro-intestinal n proporie de 60-80%, doxicilina i minociclina n proporie de 90-100%. Absorbia se petrece preponderent n poriunea superioar a intestinului subire. Absorbia este diminuat n caz de utilizare concomitent a produselor lactate, a medicamentelor care conin calciu, magneziu, fier, datorit formrii chelailor neabsorbabili. Cuplarea cu proteinele plasmatice variaz ntre 65% tetraciclina i 88% doxicilina. Tetraciclinele sunt distribuite larg n esuturile i lichidele din organism. Ptrunderea n esuturi este superioar n cazul doxiciclinei i minociclinei. Trec bariera placentar, realizeaz concentraii relativ mari n lapte (pn la 50-100%). Se elimin tetraciclinele prin bil i cu urina. Doxiciclina nu se elimin prin rinichi, eliminndu-se prin colon sub form de chelai inactivi (tabelul 2).

Tabelul 2Parametrii farmacocinetici ai tetraciclinelor

Preparatul Absorbia la admi-nistrare oral (%)Cuplarea cu protei-nele plas-matice (%)Timpul de njumtireCile de eliminare (pri-mare/secunda-re-% de elimi-nare sub form neschimbat)Influena alimentelor asupra absorbiei

n norm (ore)n anurie (ore)

Demeclocic-lina 669110-1740-60Prin rinichi/cu bila (42%)diminuare

Oxitetracicli-na 58356-1047-66Prin rinichi/cu bila (70%)diminuare

Tetraciclina75-77656-1157-108Prin rinichi/cu bila (60%)diminuare

Doxiciclina 90-1009312-2212-22cu bila /prin rinichi (35%)influeneaz nesemnificativ

Indicaii terapeutice: Tetraciclinele sunt antibiotice de prim alegere n tratamentul brucelozei, febrei recurente, holerei, richetsiozelor (tifos exantematic, febra Q), n infecii cu Chlamydia (limfogranulomatoz venerian, uretrite nespecifice, psittacoz, trahom) i cu Mycoplasma.Tetraciclinele sunt avantajoase n pneumoniile provocate de Chlamydia, Coxiella, Francisella, Mycoplasma ca i n infeciile pelvine provocate de bacili gram-negativi sensibili. Contraindicaii: Tetraciclinele sunt contraindicate n insuficiena renal (cu excepie doxiciclinei) la femeile nsrcinate i la copii pn la 8 ani. La sugari poate crete presiunea lichidului cefalorahidian cu bombarea fontanelelor.

Reacii adverse: La administrarea tetraciclinelor reaciile adverse se ntlnesc n 7-30% din cazuri, cu predominarea fenomenelor toxice.

a) Din partea tubului digestiv: fenomene de iritaie gastric i intestinal pirozis, grea, vom, dureri epigastrice, diaree cauzate de aciunea iritant a preparatelor asupra mucoasei gastro-intestinale. b) Aciunea hepatotoxic

c) Aciunea nefrotoxic

d) Oasele i dinii: tetraciclinele se acumuleaz n esuturile calcificate, unde formeaz chelai cu ortofosfatul de calciu. e) Fotosensibilizarea

f) Aciunea toxic local asupra esuturilor: administrarea intravenoas a tetraciclinelor poate duce la tromboze venoase. Injectarea intramuscular provoac aciune iritant local dureroas.

Interaciuni medicamentoase: n caz de administrare concomitent a tetraciclinelor cu antiacide, preparate de fier, purgative ce conin magneziu, hidrocarbonat de sodiu, absorbia tetraciclinelor este diminuat din cauza formrii complexelor neabsorbabile i creterii pH-ului.

Barbituricele, carbamazepina, fenitoina prin inducia enzimelor microzomiale hepatice diminuiaz, n caz de administrare concomitent, concentraia plasmatic a doxicilinei.

n caz de administrare concomitent a anticoncepionalelor orale hormonale i a tetraciclinelor garania contracepiei se diminuiau, crete frecvena hemoragiilor.

n caz de asociere a tetraciclinelor cu metoxifluranul crete riscul aciunii nefrotoxice.Forme farmaceutice: Tetraciclina capsule 250 mg, compromate filmate 100 mg, unguent oftalmic 1%, unguent 3%;

Oxitetraciclina capsule 250 mg;

Doxicilina capsule 100 mg.

Substane medicamentoas, derivai de nitrofenilalchilamineTabelul 3Substanele medicamentoase din grupul nitrofenilalchilaminelorDenumirea romn, latin i chimic. Formula de structurDescrierea, solubilitatea

Chloramphenicolum

Cloramfenicol (Levomicetina)

D-(-)-treo-1-para-nitrofenil-2-dicloracetil- amino-propandiol-1,3Pulbere cristalin alb sau alb cu nuan slab galben-verzuie, cu gust amar. Puin solubil n ap, uor solubil n alcool.

[(]20o= de la +180 pn la +210 (5% soluie n 95% alcool) r = 323,13

Chloramphenicoli natrii succinas

Succinat de cloramfenicol sodic

Sarea de a succinatului de D-(-)tr-1-p-nitrofenil-2-dicloracetilaminopropandiol-1,3

Mas poroas uscat de culoare alb sau cu nuan glbuie, cu miros slab specific, cu gust amar, higroscopic. Foarte uor solubil n ap i alcool.

Propieti chimice i metodele de analizCloramfenicol, fiind un derivat de -aminoalcool cu soluia sulfat de cupru (II) formeaz precipitat albastru, solubil n n-butanol, care se coloreaz n violet:

Cloramfenicolul se supune descompunerii hidramine n diferite condiii. Astfel, dup hidroliz i oxidarea ulterioar cu periodat de sodiu se formeaz 4-nitrobenzaldehida, acidul formic, aldehida formic i amoniac:

Reacia de hidroliz n mediu bazic st la baza identificrii cloramfenicolului i derivailor si. Apare coloraie galben, ce trece n portocaliu. La nclzirea ulterioar se depune precipitat rou-crmiziu de acid azobenzoic:

acid azobenzoic (precipitat rou-crmiziu)

Reacii pentru grupa nitro-aromatic

Grupa nitro- aromatic dup reducerea sa pn la grupa amin aromatic primar se diazoteaz i se cupleaz cu soluia bazic de -naftol, formnd azocolorant. Reacia se utilizeaz pentru identificarea cloramfenicolului:

Pentru identificarea substanelor medicamentoase ce conin n structura sa grupa nitro- aromatic este utilizat i reacia de formare a bazelor Schiff cu p-dimetilaminobenzaldehida, dup reducerea prealabil a grupei nitro pn la amin aromatic. Cloramfenicolul d coloraie portocalie intens:

Baza Schiff

Acidul succinic n succinatul de cloramfenicol sodic se identific la nclzire cu rezorcina i acid sulfuric concentrat. Soluia se coloreaz n galben cu fuorescena galben-verzuie n UV. n caz cnd n loc de rezorcin se ia hidrochinon, i dup rcire se dilueaza cu ap i se adauga benzen, stratul acestuia se coloreaz n rou.

Metode de dozare

Nitritometria

Dozarea cloramfenicolului se efectueaz nitritometric dup reducerea nitrogrupei cu ajutorul pulberii de zinc n mediu acid:

Proprietile farmacologice ale CloramfenicoluluiCloramfenicolul este un antibiotic de sinteza cu spectru larg de actiune. Fiind solubil in apa, poate fi utilizat in injectii intramusculare si intravenoase. In organism este absorbit rapid si sufera un proces de hidroliza (in special la nivelul ficatului), prin care se pune in libertate cloramfenicol activ. Se elimina in cea mai mare parte prin rinichi, in forma biologic inactiva. Este eficace in infectii biliare. Are un spectru antibacterian larg, avand actiune bacteriostatica asupra multor germeni gramnegativi si grampozitivi.

Mecanismul de actiune: cloramfenicolul actioneaza bacteriostatic, inhiba sinteza proteica prin inhibitia peptidiltransferazei. Uneori influenteaza sinteza proteica a mitocondriilor celulelor eucariote - asa se explica toxicitatea asupra maduvei hematogene.

Indicatii: infectii severe provocate de germeni sensibili la cloramfenicol: febra tifoida, meningite purulente, peritonite purulente, pneumonii si bronhopneumonii; septicemii cu germeni sensibili la cloramfenicol si rezistenti la alte atibiotice.

Contraindicatii: leucopenie, anemie, agranulocitoza, boli hepatice grave; in insuficienta renala si la nou-nascuti la femei gravide, in ultima perioada de sarcina; in profilaxia infectiilor.

Reactii adverse: la tratamente prelungie si repetate se pot produce: deprimarea severa a hematopoiezei, anemie aplastica, purpura trombopenica, agranulocitoza (la doze mari), uscaciunea gurii, greata, eruptii cutanate, reactii neurotoxice (cefalee, confuzie mintala, nevrita optica); la nou-nascuti, mai ales prematuri, dozele obisnuite pot provoca un sindrom toxic mortal (sindromul cenusiu).

Precautii: se vor evita curele repetate (chiar cele scurte), fiind posibila aparitia unor depresiuni ale maduvei hematogene. Se va administra cu prudenta la hepatici si renali, la gravide, la sugari.

Mod de administrare: continutul unui flacon se dizolva in 10 ml solutie izotonica de clorura de sodiu.

Adulti: 0,5 g cloramfenicol la 6-8 ore;

Copii: 25-50 mg/kg corp/zi; Nou nascuti: 10 mg/kg corp/zi.

LUCRUL PRACTIC

Sarcina 1. De apreciat calitatea substanelor medicamentoase dup indicii Descriere i Solubilitatea.

Datele de oformat n form de tabel i de fcut concluzia despre calitate dup indici indicai mai sus.Adnotare: Solvenii se ntrebuineaz conform prevederilor DAN.

Sarcina 2. De apreciat identificarea derivailor tetraciclinelor cu ajutorul reaciilor comune de identificare.

2.1. Reacii comune pentru derivaii tetraciclinelor

2.1.1 Identificarea tetraciclinelor cu ajutorul diazo-reactivuluiAproximativ 0,05 g substan se dizolv n 5 ml de soluie de hidroxid de sodiu i se adaug 4 ml de diazoreactiv (0,1 g de streptocid n 8 ml de acid clorhidric diluat la nclzire, dup rcire se adaug 2 ml soluie de 0,1 mol/l de nitrat de sodiu).

2.1.2. Reacia de izomerizare la aciune cu hidroxid de sodiu

0,01 g de substan medicamentoas (tetraciclin, oxitetraciclin) se dizolv n 2 ml soluie de hidroxid de sodiu10%; se formeaz o soluie galben-cafenie; se nclzete la baia de ap clocotind 1-2 minute, apare o fluorescen albastr, care se observ n lumin UV.

2.1.3.Reacia cu clorur de fier (III)

La 0,01 g substan medicamentoas se adaug 2 picturi de soluie de clorur de fer (III) 3% i 10 ml ap; apare o coloraie roie.

2.1.4. Reacia de formare a anhidrotetraciclinei cu acidul clorhidric concentrat

0,005-0,01 g substan medicamentoas se dizolv n 2 ml de acid clorhidric concentrat i se nclzete la baia de ap, clocotind timp de 2-3 minute. Tetraciclina formeaz o coloraie galben i fluorescen galben-verzuie, oxitetraciclina coloraie rou-oranj i fluorescen galben-verzuie, care se observ n lumin UV.

2.2. Reacii specifice pentru derivaii tetraciclinelor i nitrofenilalchilaminelor1. Clorhidrat de tetraciclin

1.A. La 1-2 ml substan se adaug 0,2 ml dimetilformamid, 0,1 ml soluie 0,5 mol/l hidroxid de sodiu i se nclzete pe baia de ap. Apare o coloraie roie-violet, care trece n viiniu.

1.B. La 0,5 mg substan se adaug 1 ml acid sulfuric concentrat; apare o coloraie violet. Se adaug 0,05 ml clorur de fer; coloraia devine brun sau rou-brun.

1.C. La soluia de substan se adaug 1-2 ml nitrat de argint i 1 ml hidroxid de sodiu; apare un precipitat alb cazeos.

2. Clorhidrat de oxitetraciclin2.A. La 0,5 mg substan se adaug 1 ml acid sulfuric concentrat; apare o coloraie rou-purpurie, care la adugarea a 1 ml ap devine galben-portocalie.

2.2.2.B. Reacia pentru ionul de clor.

3. Doxiciclin

3.A. La 0,5 mg substan se adaug 2 ml acid sulfuric concentrat; apare o coloraie galben.4. Cloramfenicol (levomicetin)

4..Reacia de hidroliz n mediu bazic: La 0,1 g preparat se adaug 5 ml solutie hidroxid de sodiu i se nclzete; apare o coloraie roie, care trece n rou-portocaliu la nclzirea ulterioar. La fierberea acestei soluii culoarea se intensific; se formeaz un precipitat rou-crmiziu i apare un miros de amoniac. Filtratul dup acidulare cu acid azotic d reacie caracteristic la cloruri (Vezi 2.1.).

4.B.Reacia de obinere a azocolorantului dup reducerea grupei nitro: la cteva cristale substan se adaug 2 ml acid clorhidric diluat i 0,1 g pulbere de zinc i se nclzete pe baia de ap 2-3 minute. Dup rcire soluia se filtreaz. La soluia obinut se adaug 3-4 picturi soluie nitrit de sodiu i se agit; solutia obinut se adaug la 3 ml soluie bazic -naftol. Apare coloraie rou-viinie ori precipitat rou-portocaliu.

4.C. Reacia de formare a compusului complex: la cteva cristale preparat se adaug 3 picturi soluie sulfat de cupru i 0,5 ml soluie hidroxid de sodiu 10 %, peste 1 minuta se agit cu 0,5 ml n-butanol. Stratul de butanol se coloreaz n albastru-violet.5. Succinat de cloramfenicol sodic5.. Reacia de hidroliz n mediu bazic: 0,01 g preparat se amestec cu 10 ml soluie hidroxid de sodiu; apare coloraie galben. 2.3. Identificarea tetraciclinei i doxiciclinei prin metoda CSS

Condiii de cromatografiere:

Absorbant - Kieselgur.

Sistema de solveni (developant) propilenglicol ap aceton acetat de etil (3:6:45:45).

Soluie de aplicat:

Cte 1 ml soluii 0,05% substane n metanol.

1 ml soluie standard oxitetraciclin 0,05% n metanol.

1 ml soluie standard doxiciclin 0,05% n metanol.

Tehnica de lucru: Placa cromatografic se introduce n vasul cromatografic cu developat, se las pn cnd acesta migreaz aproximativ 16 cm de la linia de start, se scoate, se usuc la aer, apoi se ine n etuva 3minute i se exameneaz n lumin UV la = 366 nm.

Pe cromatogram trebuie s apar spoturi identice cu spoturile soluiilor standarde aplicate, cu aceiai valoare a Rf ului.

2.4. Determinarea absorbiei preparatelor din grupul tetraciclinelor

Absorbia soluiilor de substane cu concentraia 0,002% trebuie s corespund cu absorbanta soluiilor standarde de substane (vezi tab. 2, Fig.2, Fig,3).

Clorhidrat de tetraciclin

Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei metanolice analizate de clorhidrat de tetraciclina 0,0016%, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint maxime de absorbie la 270 nm si 363 nm.

Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de tetraciclina 0,0016% n acid clorhidric 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint maxime de absorbie la 269 nm si 356 nm.

Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de tetraciclina 0,0016% n hidroxid de sodiu 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint maxime de absorbie la 268 nm si 380 nm.

Clorhidrat de doxiciclin

Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei metanolice analizate de clorhidrat de doxiciclin 0,002%, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint maxime de absorbie la 269 nm si 352 nm.

Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de doxiciclin 0,002% n acid clorhidric 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint maxime de absorbie la 269 nm si 346 nm.

Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de doxiciclin 0,002% n hidroxid de sodiu 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint maxime de absorbie la 255 nm si 376 nm.Tabelul 2

Absorbana preparatelor din grupul tetraciclinelor

SubstanaSolvent( nmAbsorbana

Clorhidrat de tetraciclininAcid clorhidric 0,01 mol/l3800,36 - 0,39

Clorhidrat de oxitetraciclinap3530,54 - 0,58

Clorhidrat de doxitetraciclinAcid clorhidric 1 mol/l + metanol3490,28 - 031

Fig.2 Spectrele solutiei standard de Fig.3 Spectrele solutiei standard de

clorhidrat de tetraciclina in diferiti clorhidrat de doxiciclina in diferiti

solventi cu concentratia 0,0016% solventi cu concentratia 0,002%

Spectofotometrie IR. Spectrul n infrarou al clorhidratului de tetraciclina si clorhidratului de doxiciclina n regiunea de la 4000 cm-1 pn la 600 cm-1 trebuie s corespund cu spectrul n infrarou al substaniilor standard, obinut prin dispersie n bromur de potasiu (R).

Fig. 4 Spectrul in infrarosu al solutiei Fig. 5 Spectrul in infrarosu al solutiei

standard de clorhidrat de tetraciclina standard de clorhidrat de doxiciclina

Sarcina 3. De efectuat determinarea cantitativ a substanelor medicamentoase1. Cloramfenicol (Levomicetin)1.. Metoda spectrofotometric. 0,1 g preparat se introduc ntr-un balon cotat de 100 ml i se dizolv la nclzire, (circa 500), se rcete i se aduce cu apa pn la cot. 1 ml din soluia obinut se transfer ntr-un balon cotat de 100 ml, se aduce cu apa pn la cot i se citete absorbana soluiei obinute la lungimea de und 278 nm, absorbana specific, A este 298.1.. Metoda nitritometric. Circa 0,5 g preparat (mas exact) se introduc n balonul de titrare cu capacitatea de 200-250 ml, se adaug 20 ml acid clorhidric concentrat i atent, 5 g pulbere de zinc, n cantiti mici. Apoi se mai adaug 10 ml acid clorhidric concentrat, pe pereii balonului; dup dizolvarea complet a pulberei de zinc (se poate de nclzit) soluia cantitativ se trece n paharul pentru diazotare, care se rcete cu ghea; se adaug 3 g bromur de potasiu i se titreaz ncet cu soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l. Titrarea se consider finit, dac o pictur de lichid luat peste 3 minute dup adugarea soluiei de nitrit de sodiu va nlbstri imediat hrtia mbibat cu iodur de potasiu i amidon.

1 ml soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l corespunde cu 0,03231 g cloramfenicol, care n preparat trebuie s fie cel puin 98,5 % .

1.C. Metoda de titrare anhidr. Circa 0,3 g preparat (mas exact) se dizolv n amestec, care const din 20 ml acid acetic anhidru i 5 ml anhidrid acetic, se adaug 10 ml soluie acetat de mercur (II) i se titreaz cu soluie acid percloric 0,1 mol/l pn la culoarea albastr (indicator cristalin violet).1 ml soluie acid percloric 0,1 mol/l corespunde cu 0,04126 g cloramfenicol, care n preparatul uscat trebuie s fie cel puin 98,5 % i cel mult 101,0 %.ntrebri pentru pregtirea de sine stttoare1. Caracteristica general a antibioticelor. Clasificarea antibioticelor.

2. Rezistena microbian la antibiotice. Cauzele i mecanismele apariiei rezistenei la antibiotice.

3. Caracteristica general a structurii chimice i proprietilor tetraciclinelor. Legtura dintre structur i aciune biologic.

4. Numii grupele funcionale care se conin n structura tetraciclinelor.5. Indicai gruprile de legtur, care condiioneaz coloraia tetraciclinelor precum i absorbia intensiv n ultravitolet.

6. Demonstrai corelaia nre structura chimic i solubilitate n ap, acizi, baze a substanelor medicamentoase din grupa tetraciclinelor.

7. Prin ce sunt condiionate proprietile amfotere ale tetraciclinei? Indicai grupele funcionale care condiioneaz aceast proprietate.

8. Tetraciclina, doxicixlina (vibromicina), oxitetraciclina, metaciclina. Cerine fa de calitate, metodele de analiz.9. Utilizarea metodelor fizico-chimice (UV- i IR- spectroscopie, diferitor tipuri de cromatografie) n analiza derivailor tetraciclinelor.10. Scriei reaciile de identificare ale tetraciclinei pentru hidroxilul fenolic.

11. n ce condiii se obin izoderivaii i anhidroderivaii tetraciclinelor. Scriei structura lor de formul.

12. Efectuai schema epimerizrii a tetraciclinei. Indicai condiiile n care are loc acest proces.

13. Particularitile i motivele metodei biologice de determinare cantitativ a antibioticilor din grupa tetraciclinelor.

14. Noiunea de 1 unitate de aciune antibacterian.

15. Indicai mecanismul de aciune al tetraciclinelor.

16. Explicai de ce este contraindicat administrarea concomitent a tetraciclinelor cu antiacide, preparate de fier, purgative ce conin calciu, magneziu, hidrocarbonat de sodiu.17. Explicai de ce este contraindicat administrarea concomitent a tetraciclinelor cu produsele lactate (lapte, iaurt, brnz).18. Indicai reaciile adverse ale tetraciclinelor.

19. Relaii structur-activitate n seria tetraciclinelor.20. Indicai formele farmaceutice ale preparatelor din grupa tetraciclinelor.21. Determinai condiiile de pstrare a substanelor medicamentoase studiate n condiii de farmacie. Indicai factorii mediului nconjurtor ce acioneaz asupra calitii preparatelor.22. Obinerea i analiza substanelor medicamentoase, derivai ai nirtrofenilalchilaminelor: cloramfenicol (levomicetina) i esterui lui: succinat. 23. Enumerai metodele de identificare a atomilor de halogeni legai covalent n molecula cloramfenicolului.24. Demonstrai posibilitatea utilizrii reaciei de descompunere hidraminic cu determinarea ulterioar a produselor de hidroliz n identificarea cloramfenicolului.25. Reeind din structura chimic a cloramfenicolului argumentai utilizarea metodei nitritometrice n dozarea acestuia. Bibliografie:1. Conspectul leciei.

2. abilev F.V. Chimie farmaceutic, Chiinu: Universitas, 1994.-p 675p

3. Farmacopea romn. Ediia X-a Bucureti: Editura medical, 1993.-1315p.

4. Ghid farmacoterapeutic. Ch.: F.E.-P. Tipografia central, 2006. 1424 p. 5. Haieganu E., Stecoza C. Chimie terapeutic. Vol. II. Bucureti: Editura Medical, 2006-2008. 253 p.

6. .. .- .: -, 2007. 624 .

7. . . .. .: , 2001. 384 .

Aparataj i reactivi folosii la tema: Substanele medicamentoase, derivai de tetracicline i nitrofenilalchilamineSubstane medicamentoase:

1. Clorhidrat de tetraciclin

2. Clorhidrat de oxitetraciclin

3. Clorhidrat de doxiciclin4. Cloramfenicol (Levomicetin)

Reactivi:

1. Soluie hidroxid de sodiu 10%

2. diazoreactiv3. Soluie clorur de fier (III) 3%

4. Soluie acid clorhidric concentrat

5. dimetilformamid6. soluie hidroxid de sodiu 0,5 mol/l 7. Soluie acid sulfuric concentrat8. soluie nitrat de argint 9. Sistema de solveni (developant) propilenglicol ap aceton acetat de etil (3:6:45:45)10. soluie standard oxitetraciclin 0,05% n metanol11. soluie standard doxiciclin 0,05% n metanol12. soluie acid clorhidric 0,01 mol/l Vesel, aparatur:

1. Baie de ap

2. Reou electric3. bagheta de sticl 4. Sticl de ceas5. Eprubete

6. Hrtie de filtru

7. Balan analitic

8. Plnii de filtrare

9. baloane cotate 100 ml10. Fiole de cntrire cu dop rodat

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED Unknown

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

EMBED ISISServer

PAGE 2

_1359109311.unknown

_1385122584.unknown

_1359109310.unknown