225429867 metode de colorare

7/25/2019 225429867 Metode de Colorare

1/16

METODE DE COLORARE BACTERIANA

Timpii de efectuare a frotiului bacterian

1.Etalarea ntinderea produsului pe lama, intr-unstrat subtire.

2.Uscarea la temperatura camerei sau la termostat

3.Fixarea fizic sau cimic

!."olorarea propriu zis


2/16

#impii de efectuare ai frotiului

1. Etalarea


3/16

#impii colora$iei %&'(1. "olorare cu )iolet de *entiana sau cristal )iolet, timp de 1-2 min

2. (ordansare +fixare cu solutie lu*ol 1-2 minute3. palare cu apa demineralizata!. iferentiere cu solutie de alcool-acetona. olutia se toarna tinand

lama in pozitie inclinata +/-10 sec pana cand licidul scurs numai este colorat.

/. palare cu apa demineralizata. &ecolorare cu solutie de fuxina diluata in prealabil 110, timp de

30 sec.. palare cu apa demineralizata4. Uscare5. Examinare la microscop cu obiecti) uscat sau umed


4/16

#impii coloratiei %&'(


5/16

Mecanisme de actiune ale colorantilor asupraelementeloc componente bacteriene

6ioletul de *entiana coloreaza in )iolet toate celulele bacteriene,fix7ndu-se pe componentele citoplasmatice.

8u*olul permite fixarea colorantului in celul ecolorantul alcool-acetona )a decolora bacteriile %ram ne*ati)e,

care au un perete sarac in peptido*licani, care lasa sa treacadecolorantul ce contine alcool +molecula lipofila. 'cesta )adecolora citoplasma, eliminand )ioletul de *entiana.

impotri)a, in cazul bacteriilor %ram poziti)e, peretele esteimpermeabil pentru alcool, deoarece contine un strat dens depeptodo*licani. 'ceste bacterii )or rm7ne colorate n )iolet

"ontra-colora$ia cu fuxin )a colora n ro9u bacteriile %ramne*ati)e decolorate n etapa anterioar. Fuxina nu are efectasupra bacteriilor %ram poziti)e care rm7n colorate n )iolet


6/16

"olora$ia %ram


7/16

Examinare microscopica

:acili ubtilis %ram ;Escericia coli %ram -

"oci %ram poziti)i

"oci %ram ne*ati)i


8/16


9/16

"olora$ia


10/16

"oloratia cu albastru metilen

Procedura:1. e realizeaz un frotiu care se fixeaz la cldur 9i

se las s se rceasc.

2. Frotiul se acoper cu solu$ie de albastru de metilen+omolo* al albastrului de orto-toluidin timp de 2-

minute.

3. e spal colorantul iar lama se las s se usuce.

RezultateB Arin aceast metoda *ranula$iilemetacromatice intracelulare se coloreaz nro9u p7n la ne*ru iar restul elementelorcelulare n albastru-pal.


11/16

(etoda de colorare


12/16

Examinare microscopica

:acilii Coc-coloratia


13/16

Sisteme/Scara de cuantificare

Nr de BAAR percamp

Brightf. &IUATLD/W! Sca"e

#$%%%'

Brightf. & ATSSca"e

#$%%%'

("u)r. &IUATLD/W!

Sca"e

#*%%+*,%'

("u)r. & ATSSca"e

#*%%+*,%'

-er)

$+*/%% campuri

$+/$%% campuri

$+/$% campuri$+/$ campi

$%+/$camp

01$%%/$camp

Negati2

Actua"

Actua"

$3*3

3

3

Negati2

Actua"

$3

*33

43

43

Negati2

Actua"

Actua"

Actua"$3

*3

3

Negati2

Actua"

Actua"

$3*3

3

43

(etode de cuantificare a densit$iibacililor alcool-acido rezisten$i


14/16

"oloratia (aD-%runald-%iemsa

(etoda foloseste un amestec de coloranti

acizi, bazici si neutri. #impii coloratieiB

5 e acopera frotiul cu solutie (aD-%runald5 e adau*a aceeasi cantitate de apa distilata

neutra5 e amesteca cu a?utorul unei pipete Aasteur5 e asteapta 2 minute5 e )arsa solutia de pe lama

5 e adau*a solutie %iemsa timp de 2/-30minute5 e spala lama cu apa de robinet sub ?et slab5 e usuca frotiul

5 e examineaza la microscop cu imersie


15/16

munofluorescen$a

Substan fluorescent !uloare obinut'uramin G 6erde'uramin G-&odamin : %albenportocaliu'cridin Gran*e %albenportocaliu

Contra-coloraie Fond

6ermanganat de p)tasiu

Acridin7 !range

8ar)n 9nchis/Negru

:a";en/p)rt)ca"iu


16/16

munofluorescen$a

"olora$ie cu auramin pe fond colorat cu acridin-portocaliu

225429867 metode de colorare

Documents