Vol. 7, Nr. 1, An 201422

PRACTICA FARMACEUTIC

Progrese n tehnologia de fabricare a vaccinurilor abordri i reglementareADVANCES IN MANUFACTURING TECHNOLOGY OF VACCINES APPROACHES AND REGULATION

Biol. pr. Mirela Tavakol

Agenia Naional a Medicamentului i a Dispoziti velor Medicale (ANMDM)

Adresa de coresponden:Biol. pr. Mirela Tavakol, Agenia Naional a Medicamentului i a Dispozitivelor Medicale (ANMDM), Str. Aviator Sntescu nr. 48, Sector 1, Bucureti

Vaccinarea a reprezentat pentru omenire un instrument crucial pentru combaterea, inerea sub control i eradicarea unor boli infecioase grave. Descoperirea si introducerea practi cii vaccinrii au nsemnat reducerea esenial a mortalitii asociate mbolnvirilor cu agenii patogeni pentru care au fost obinute vaccinuri. De exemplu, conform datelor Organizaiei Mondiale a Sntii (OMS), vaccinurile mpotriva tuberculozei, dift eriei, tetanosului, pertussis, poliomielitei, rujeolei, hepati tei B i Hib contribuie anual la prevenirea a 2,5 milioane de decese.

DE LA VACCINURI CONVENIONALE LA VACCINURILE MODERNEVaccinurile pot fi ncadrate n multe ti puri, n funcie de modalitatea de obinere, refl ectnd evoluia n decursul ti mpului a tehnologiei de fabricare a vaccinurilor. Astf el, vaccinurile pot conine microoorganisme ntregi, vii atenuate sau inacti vate. Vaccinurile vii atenuate au fost primele vaccinuri uti lizate. Acest ti p de vaccinuri este obinut prin culti varea microorganismelor n condiii subopti male sau prin pasaj succesiv n culturi, tehnici ce determin atenuarea virulenei n condiiile meninerii capacitii de a induce rspunsul imun. Este cazul vaccinului poliomieliti c (Sabin), ti foidic oral, rujeol-rubeol-oreion, vaccinul BCG, vaccinul mpotriva febrei galbene etc. Dei caracterizate printr-o efi cacitate foarte ridicat, vaccinurile vii atenuate au dezavantajul riscului de apariie a mutaiilor, respecti v de reversie la

virulen, precum i contraindicaia n cazul persoanelor imunocompromise.

O alt categorie de vaccinuri o consti tuie vaccinurile care conin microorganisme ntregi, ns inacti vate prin metode chimice sau fi zice. Din aceast categorie fac parte vaccinurile mpotriva hepati tei A, vaccinul poliomieliti c (Salk), vaccinul gripal etc. Acest ti p de vaccinuri are avantajul unei stabiliti mai ridicate, ns efi cacitatea este mai redus i necesit rapeluri.

Un alt ti p de vaccinuri este cel reprezentat de anatoxine toxine bacteriene tratate chimic pentru a-i pierde toxicitatea, n contextul meninerii imunogenitii. Exemple de anatoxine sunt anatoxina tetanic sau anatoxina dift eric.

Deoarece vaccinurile convenionale au ridicat pe parcursul ti mpului difi culti determinate n principal de complexitatea preparatului vaccinal uti lizat i manifestate prin reacii adverse, s-a impus rafi narea tehnologiilor de fabricare a vaccinurilor, n sensul concentrrii eforturilor asupra obinerii unor vaccinuri care s conin anti gene nalt purifi cate, eliminnd astf el riscul accidentelor post-vaccinale care decurg din reversia la virulen, a reaciilor de ti p autoimun sau a reaciilor alergice. De asemenea, dezvoltarea tehnologiilor de fabricare a urmrit cunoaterea la nivel molecular a anti genelor care declaneaz rspunsul imun din partea organismului pentru a reproduce prin sintez unele anti gene (vaccinuri

Vol. 7, Nr. 1, An 2014 23

CERCETARE TIINIFIC

polipepti dice) sau a obine anti gene proteice prin tehnologia ADN recombinant.

VACCINURILE SUBUNITARE Vaccinurile subunitare conin exclusiv anumii determinani anti genici ai microorganismelor patogene. Vaccinurile subunitare sunt obinute fi e plecnd de la procese de culti vare convenional, fi e prin tehnologia ADN recombinant. Vaccinurile subunitare deriv din vaccinurile coninnd ageni infecioi inacti vai, mbuntind ns aspectele de efi cacitate i siguran ale acestora din urm. Determinanii anti genici inclui n vaccin sti muleaz n mod efi cient rspunsul imun, iar prezena unui numr redus de molecule provenite din microorganismul patogen reduce riscul de apariie a reaciilor adverse. Vaccinurile subunitare conin n principal structuri de suprafa ale patogenilor, aa cum este cazul vaccinului mpotriva hepati tei B, care conine anti genul Australia, anti gen de suprafa (AgHBs). Tot anti gene de suprafa sunt i hemagluti nina i neuraminidaza, glicoproteine de suprafa coninute n vaccinurile gripale subunitare. Tot structuri de suprafa, ns de natur polizaharidic (anti gene capsulare), sunt coninute i n vaccinurile mpotriva Haemophilus infl uenzae, Streptococcus pneumoniae sau Neisseria meningiti dis. Deoarece acest ti p de structuri sunt slab imunogene, pentru obinerea unor vaccinuri cu efi cacitate adecvat, anti genele sunt conjugate cu molecule proteice (de exemplu, cu anatoxin tetanic).

Astf el, una dintre provocrile obinerii vaccinurilor moderne este reprezentat de faptul c un nivel nalt de purifi care al anti genelor conduce uneori la pierderea imunogenitii, necesitnd cuplarea cu un carrier proteic sau cu o sare de aluminiu. Uti lizarea adjuvanilor este ns asociat cu apariia reaciilor locale la locul de vaccinare. De asemenea, durata imunitii conferite prin vaccinare este mai redus dect n cazul vaccinurilor vii.

Vaccinurile obinute prin tehnologia ADN recombinant sunt produse prin modifi care geneti c, ADN-ul care codifi c pentru molecula int fi ind introdus de obicei prin intermediul unei plasmide sau a unui vector viral, ntr-un microorganism sau linie celular adecvat, n care ADN-ul este exprimat i tradus la protein. Produsul dorit este ulterior recuperat prin extracie i purifi care. n acest mod a fost obinut vaccinul mpotriva hepati tei B, pe celule de Saccharamyces cerevisiae. Cerinele de calitate pentru vaccinurile obinute prin tehnologia ADN recombinant sunt sti pulate n monografi a specifi c din Farmacopeea European.

Vaccinurile ADN reprezint cea mai recent direcie de dezvoltare n fabricarea de vaccinuri. Inocularea intramuscular sau intradermic a vaccinurilor consti tuite din plasmide ADN conduce la internalizarea ADN-ului n celule, la exprimarea anti genului codifi cat de acesta i n fi nal la instalarea unui rspuns imun anti gen-specifi c. ADN-ul injectat este reprezentat practi c de o plasmid plus un promotor care asigur sinteza proteinei imunogene.

Pn n prezent nu exist nici un vaccin ADN de uz uman autorizat, acest ti p de vaccin afl ndu-se nc n investi gaie clinic. Astf el, se afl n dezvoltare vaccinuri ADN n care anti genele ce urmeaz s fi e exprimate de plasmidele obinute prin tehnici de inginerie geneti c, aparin virusurilor gripale, HIV, agentului patogen al tuberculozei, malariei i anti gene ale virusului Ebola. Avantajul acestui ti p de vaccin rezid n faptul c sti muleaz att imunitatea umoral, ct i cea celular. De asemenea, acest ti p de vaccinuri este stabil i nu impune meninerea n condiii controlate (refrigerat), aa cum este cazul pentru vaccinurile convenionale. Spre deosebire de vaccinurile vii atenuate, n cazul vaccinurilor ADN nu sunt prezente riscurile care decurg dintr-o potenial atenuare neadecvat a tulpinilor vaccinale. Alte avantaje ale acestei noi tehnologii sunt reprezentate de faptul c plasmidele uti lizate sunt uor de fabricat n canti ti mari, iar imunitatea conferit este pe termen lung.

Dezavantajele identi fi cate pn n prezent n ceea ce privete vaccinurile ADN sunt legate de faptul c acest ti p de vaccinuri este limitat la imunogene proteice, dar i de alte poteniale riscuri care urmeaz a fi evaluate i aduse sub control prin metode specifi ce (risc mutagen, risc de determinare a rezistenei la anti bioti ce la recipient etc.).

REGLEMENTAREA VACCINURILORConform legislaiei europene n vigoare, urmtoarele produse pot fi considerate medicamente biologice: proteine recombinante, anti corpi monoclonali, produse derivate din snge, produse imunologice (vaccinuri, seruri, toxine), alergeni i medicamente obti nute prin tehnologii avansate (medicamente pentru terapie genic i terapie celular). n plus, numeroase alte produse sunt considerate, de asemenea, medicamente biologice, pe baza unor considerente ti inifi ce, acestea ntrunind criteriile legale ale originii biologice i complexitii acestora. CMDh (Grupul de coordonare a procedurilor de recunoatere mutual i descentralizat pentru medicamente de uz uman) a elaborat i publicat un

Vol. 7, Nr. 1, An 201424

PRACTICA FARMACEUTIC

document care listeaz aceast categorie de produse tratate n mod inconstant ca produse biologice.

Vaccinurile fac parte din categoria medicamentelor biologice i, n consecin, se supun reglementrilor specifi ce.

Organismul responsabil pentru autorizarea vaccinurilor obinute prin tehnologia ADN recombinant este Agenia European a Medicamentului (European Medicines Agency EMA). EMA este, ntre altele, responsabil pentru autorizarea i a altor medicamente obinute prin procese biotehnologice, aa cum sunt metodele ti p hibridoma i de obinere a anti corpilor monoclonali, dar i de expresie controlat a genelor care codifi c proteine biologic acti ve n organisme procariote i eucariote, inclusiv celule mamaliene transformate.

Agenia European a Medicamentului este responsabil pentru evaluarea ti inifi c a medicamentelor dezvoltate de companiile farmaceuti ce i pentru care se intenioneaz uti lizarea n Uniunea European. Pe site-ul EMA exist disponibile ghiduri specifi ce pentru produsele biologice. n ceea ce privete vaccinurile ADN, exist de asemenea disponibile pe site-ul EMA ghiduri specifi ce, n prezent afl ndu-se n curs de actualizare ghidul referitor la aspectele de calitate, non-clinice i clinice pentru produsele obinute prin transfer genic (CPMP/BWP/3088/99).

Ghidurile sunt instrumente complementare monografi ilor i capitolelor generale ale Farmacopeei Europene sau ale altor farmacopei, consti tuind instrumentul ti inifi c de baz folosit ca referin n scopul asigurrii calitii medicamentelor. Ghidurile sunt disponibile pe site-urile ofi ciale ale EMA (www.ema.europa.eu), ale Conferinei Internaionale pentru Armonizare (Internati onal Conference on

Harmonizati on - ICH) (www.ich.org), OMS (www.who.int) sau n volumul 3A al Rules Governing Medicinal Products in the European Union Eudralex.

n plus fa de cele menionate, din punct de vedere al asigurrii unei caliti adecvate a medicamentelor imunologice i a produselor derivate din snge, aceste categorii de medicamente sunt supuse procedurii de eliberare ofi cial a seriei (O cial Control Authority Batch Release OCABR), procedur aplicat n statele membre ale Uniunii Europene sub coordonarea Directoratului European pentru Calitatea Medicamentului (EDQM). Aceast procedur presupune verifi carea lot de lot, prin testare de laborator, a conformitii produsului cu specifi caiile aprobate n cadrul autorizrii. n acelai ti mp, se realizeaz analiza tendinelor pentru parametrii testai n ti mpul produciei i eliberrii seriei. Necesitatea testrii suplimentare de ctre autoritatea competent a seriilor de produse imunologice i derivate din snge decurge, esenial, din variabilitatea acestor ti puri de produse, complexitatea procesului de fabricaie, dar i a metodelor de control. Aceste aspecte consti tuie numai o parte din fundamentul procedurii de eliberare a seriei, procedur ce confer o siguran suplimentar asupra calitii medicamentelor imunologice.

CONCLUZIEProgresele remarcabile nregistrate n tehnologia de fabricare a vaccinurilor precum i apariia de noi vaccinuri moderne au impus, ntre altele, revizuirea abordrii din punct de vedere al reglementrii vaccinurilor i au deschis noi perspecti ve din punct de vedere al aplicabilitii principiilor vaccinrii. Introducerea de noi vaccinuri n programele de imunizare naionale s-a refl ectat, conform OMS, n datele stati sti ce care demonstreaz succesul n ceea ce privete controlul bolilor prevenibile prin vaccinare.

1. V. Lazr, C. Chifi riuc, R. Cernat, D. Bulai, D. Stewart-Tull. Imunobiologie, Editura Univ. din Bucureti , 2006

2. Jonathan A. McCullers, MD, Je rey D. Dunn. Advances in vaccine technology and their impact on managed care, PharmD, MBA, P&T, Vol. 33 No. 1, January 2008

3. Christi n Andersson. Producti on and delivery of recombinant subunit vaccines, Department of Biotechnology, Royal

Insti tute of Technology (KTH), Stockholm, Sweden, 2000

4. Farmacopeea European, ediia 8.0, 2014, Products of recombinant DNA technology, 01/2008:0784.

5. Annex to Regulati on (EC) no 726/2004 of the European parliament and of the Council of 31 March 2004 laying down community procedures for the authorisati on and supervision of medicinal products for

human and veterinary use and establishing a European Medicines Agency, amended.

6. htt p://www.ema.europa.eu7. htt p://ec.europa.eu/health/documents/

eudralex/index_en.htm8. htt p://www.who.int/immunizati on/

monitoring_surveillance/routi ne/coverage/en/

BIBLIOGRAFIE