2

2. Sterilizare i dezinfecie. (Gabriela-Loredana Popa, Loredana-Sabina Manolescu)

2. 1. Cuvinte cheieSterilizare

Dezinfecie

Cldur umed

Cldura uscat

Dezinfecie chimic

2. 2. Introducere (definiii)Curareareprezint ndeprtarea materiei organice de pe instrumente sau echipamente.Sanitarizareareprezint reducerea numrului de ageni patogeni din locurile publice (restaurante, toalete publice, etc.) n vederea prevenirii transmiterii bolilor.

Septic= contaminat cu ageni patogeni.Aseptic= lipsit de ageni patogeni i nepatogeni. Prinasepsiese evit contaminarea mediului cu microorganisme i se menine sterilitatea esuturilor, mediilor de cultur, medicamentelor etc.

Antisepsie= ndeprtarea / distrugerea formelor vegetative bacteriene de pe esuturi vii. Se realizeaz cu ajutorul substanelor antiseptice (substane chimice).

Bacteriostatic= inhib creterea bacteriilor far a le distruge.Bactericid= distruge bacteriile (fr a distruge ntotdeauna i sporii).Sporicid= agent capabil s distrug sporii.Fungicid= agent chimic capabil s distrug fungii.Virucid= agent chimic capabil s distrug virusurile.

2. 3. SterilizareaPrin sterilizare se distrug toi agenii (patogeni, nepatogeni, forme vegetative sau spori) de pe o suprafa sau din orice tip de mediu.

2. 3. 1. Sterilizarea prin cldurCldura este o metod fizic prin care se distrug agenii patogeni.

2. 3. 1. 1. Sterilizarea prin cldur uscatMecanism = oxidarea, denaturarea proteinelor sau carbonizarea structurilor bacteriene.

Sterilizarea prin nclzire la incandescen(la rou) reprezint meninerea n flacra becului Bunsen, pn la nroire, a obiectului care urmeaz a fi sterilizat. n acest mod se sterilizeaz ansa bacteriologic (cu bucl sau fir); exersm la LP.

Flambareareprezint trecerea prin flacr (de 2-3 ori) a unui obiect, fr a se atinge temperatura de incandescen. n acest mod se procedm n cazul portansei, lamelor, gtului unui recipient de sticl (eprubet, etc). Nu reprezint sterilizare !

Incinerarea reprezint arderea complet, la temperaturi ntre 870-980C a unormateriale de unic folosin, unor materiale infectate (infectele), reziduuri organice solide, gunoi. Incinerarea se realizeaz n crematorii (incineratoare).

Cuptorul cu aer cald (pupinel, etuv, cuptor Pasteur)este o cutie metalic cu perei dubli n care se obine i se menine o temperatur constant i uniform pentru sterilizare. Este necesar i un sistem de ventilaie pentru uniformizarea temperaturii n interiorul aparatului. Temperatura este de 180C, iar durata o or. Acest tip de sterilizare este recomandat pentru obiecte de sticl, obiecte de porelan, pulberi inerte i termostabile, uleiuri anhidre, instrumentar chirurgical (preferabil sterilizat n autoclav) etc. Pupinelul nu trebuie suprancrcat; aerul trebuie s poat circula printre obiectele puse la sterilizat. Sticlria i obiectele de porelan trebuie splate i uscate complet nainte de sterilizare i nvelite n hrtie special. Nu se vor steriliza n pupinel soluiile apoase, obiectele de plastic, obiectele de cauciuc, alte materiale termolabile, materiale contaminate din laborator.

2. 3. 1. 2. Sterilizarea prin cldur umedMecanism = coagularea proteinelor i degradarea enzimelor. Se consider a fi cea mai eficient metod de sterilizare.

Fierberea se realizeaz la 100C, 30 minute; distruge formele vegetative bacteriene dar nu i sporii.

Tindalizarea(sterilizare intermitent) se realizeaz la la 100C,cte 30 minute, 3zile consecutiv. Se pot steriliza medii de cultur i mediile care conin zaharuri i gelatin. n prima zi sunt omorte formele vegetative bacteriene iar n a doua i a treiazisunt omori sporii care germineaz.

Pasteurizarea se realizeaz la trei nivele: nalt, mediu i jos. Este o metod de conservare a alimentelor fr a distruge calitatea acestora.Prin pasteurizare sunt distruse bacteriile n form vegetativ dar nu i sporii.Pasteurizarea joas se realizeaz la63C, 30 secunde.Pasteurizarea nalt (ultra-high-temperature/ UHT),se realizeaz la140C, 3 secunde. Se utilizeaz frecvent pentruprodusele lactate.

Autoclavarea este cea mai folosit metod de sterilizare.Folosete aburul sub presiune(de ex. la o temperatur de 121C, 15 minute). Autoclavul este un cazan metalic de presiune care se nchide etan cu un capac. Capacul este prevzut cu un sistem special de nchidere i n interiorul lui vaporii de ap sunt comprimai la presiunea necesar sterilizrii.Vaporii de ap ajung la 121C, la 1 atmosfer.

Prin autoclavare se sterilizeaz medii de cultur, obiecte de cauciuc, bumbac, diferite substane n soluie, unele obiecte de sticlrie, materiale contaminate din laborator, instrumentar chirurgical (metalic), aparate de filtrat etc.

Controlul sterilizrii prin autoclavare se poate realize prin metode biologice (hrtii de filtru ce conin o cantitate de 106spori deBacillus stearothermophilus; hrtiile sunt puse in autoclav odata cu materialele ce urmeaz a fi sterilizate i ulterior sunt puse la incubat pe medii de cultur; dac bacteria se dezvolt n urma incubrii nseamn c sterilizarea nu a fost eficient).2. 3. 2. Sterilizarea prin filtrareReprezint o metod fizic de sterilizare. Bacteriile pot fi reinute mecanic i electrostatic n porii unui filtru. De-a lungul timpului au fost utilizate o serie de filtre clasice (porelan, sticl poroas, azbest impregnat cu caolin, pmnt de infuzori). Acum se folosesc mai frecvent membrane filtrante din esteri de celuloz sau ali polimeri precum acetatul de celuloz (pori ntre 8 i 0,025mm). Unele dintre cele mai bune filtre de sterilizare sunt filtrele HEPA(High Efficiency Particulate Air Filters),filtre care se utilizeaz pentru sterilizarea aerului n hotele microbiologice.Sterilizarea prin filtrare este utilizat pentru decontaminarea aerului, a unor medii de cultur (care nu se pot steriliza prin autoclavare), a unor reactivi care sunt sensibili la temperaturile atinse n cazul sterilizrii prin cldur etc.

2. 3. 3. Sterilizarea prin intermediul radiaiilorSe realizeaz prin doua tipuri de radiaii: neionizante (UV) sau ionizante (X etc). Mecanism = ruperea legturilor de hidrogen sau oxidarea legturilor duble.

2. 3. 3. 1. Radiaiile neionizanteAcest tip de sterilizare este similar cu sterilizarea cu aer cald; poate fi utilizat pentru a steriliza seringi preambalate sau catetere. Se pot utiliza i microundele.

Un alt exemplu sunt radiaiile ultraviolete, UV. Ele au lungimi de und diferite. Cele de 250-260 nm sunt utile n sterilizarea suprafeelor de lucru, a aerului, (pentru repartizarea mediilor de cultur, alte manevre aseptice etc) n cazul n care nu exist hote microbiologice cu flux laminar. Distrug bacteriile dar nu pot penetra sticla, apa sau unele substane. Pot arde pielea i ochii. Lmpile cu UV sunt numite lmpi germicide. Radiaiile UV cu lungimi de und de 200-390 nm sunt cele mai eficiente.

2. 3. 3. 2. Radiaiile ionizanteSunt un tip de radiaii cu putere mare de penetrare (ex.razeleX, gamma i razelecosmic). Este o sterilizaresimilar sterilizrii la rece. Radiaiile gamma cu surs Co60sunt mai eficiente dect radiaiile UV. Radiaiile ionizante se utilizeaz n sterilizri industriale (pentru alimente, medicamente, mnui, recoltoare, plci Petri, etc).

2. 4. Antiseptice i dezinfectanteDezinfecia reprezint distrugerea formelor vegetative bacteriene (uneori i a sporilor) din anumite medii (lichide, solide) sau de pe suprafee. Se realizeaz cu ajutorul unor ageni fizici sau cu ajutorul substanelor dezinfectante. Este important att concentraia, durata aplicrii, ct i remanena dezinfectantului.

2. 4. 1. Hipocloriiiclorinarea descoperit in Suedia (1744), din 1890 se folosete n dezinfectare;

soluiile de hipoclorit se prepar proaspt (n fiecare zi de lucru);

concentraia n clor activ este poate s difere n funcie de scopul urmrit;

au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ, unor spori bacterieni, fungilor (100 ppm, n o or), virusurilor (200 ppm, n 10 minute);

se pot utiliza pentru purificarea apei;

efectul este diminuat n prezena substanelor organice (ex. proteine).

2. 4. 2. Derivaii fenolici

distrug membrana plasmatic, inactiveaz enzimele, denatureaz proteinele;

se folosesc sub form de derivai fenolici;

soluiile fenolice se prepar proaspt (n fiecare zi de lucru);efectul nu este diminuat n prezena substanelor organice;

au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ, fungilor, unor virusuri (ex. HIV inactivat de soluia 0,5%).

2. 4. 3. Glutaraldehidacel mai frecvent este utilizat concentraia de 2% la un pH alcalin (efect asupra bacteriilor n form vegetativ, endosporilor, fungilor, virusurilor);

efectul nu este diminuat n prezena substanelor organice;

se poate folosi i la dezinfectarea suprafeelor metalice;

nu poate fi folosit pentru suprafee (este nevoie de un timp mare de expunere pentru a fi eficient); ideal pentru dezinfectarea echipamentelor contaminate, imersate n containere meninute nchise (ex. endoscoape etc).

2. 4. 4. Iodoforiisunt substane care elibereaz iodul n soluii apoase;

inhib sinteza proteic;

au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ, unor spori bacterieni, fungilor, unor virusuri (ex. virusuri cu nveli lipidic);

sunt inactivai de substane organice (ex. proteice), mase plastice, detergeni;

pot fi utilizai pentru dezinfecia suprafeelor, dezinfecia pipetelor contaminate.

2. 4. 5. Dezinfectareacu etilenoxiddistruge bacteriile, nu i sporii (ex. sporii deBacillus subtilisnu sunt distrui);

se utilizeaz pentru materiale puin rezistente la temperaturi ridicate sau radiaii (ex. materiale din cauciuc, plastic, echipament electronic etc);

este exploziv (pentru evitarea exploziei, de ex. utilizm etilenoxidului n camere speciale, cu presiune negativ);

pentru siguran trebuie respectate toate recomandrile productorului;

exist inconveniente (efecte carcinogenetice, efecte la nivelul sistemului nervos etc);

sterilizarea este influenat de concentraie, temperatur, umiditatea relativ i timpul de expunere (o dublare a concentraiei reduce la jumtate timpul necesar).

2. 5. Direcii de cercetareChiar dac nu toate noiunile prezentate n manualele de specialitate trebuie nvate ca atare, n dezvoltarea pe parcursul activitilor universitare considerm c este necesar ca cititorii s citeasc mai mult, pentru o ct mai bun informare. Ca atare, recomandm cteva link-uri corespunztoare unor articole care pot fi studiate folosindu-se resurseleWorld Wide Web.

1.http://www.microrao.com/micronotes/sterilization.pdf

2.http://www.cdc.gov/hicpac/disinfection_sterilization/13_10othersterilizationmethods.html

3.http://www.ific.narod.ru/Manual/Clean.htm

4.http://www.health.qld.gov.au/endoscopereprocessing/module_2/2_1.asp

5.http://generalbacteriology.weebly.com/sterilization-and-disinfection.html

6.http://www.diffen.com/difference/Disinfect_vs_Sterilize

2. 6. Povestire adevratn urma infectrii unei plgi abdominale cuMycobacterium chelonae(dup o liposucie), a fost declanat o investigaie. Liposucia a fost realizat n ambulatoriu (realizat sub anestezie local).

Investigaiei a ncercat s determine dac au avut loc i alte cazuri de infecii cu mycobaterii atipice, anterior liposuciei, n respectivul cabinet medical.

M. chelonaeeste rspndit n sol i ap, inclusiv n apa de la robinet. n literatur au mai fost raportate infecii ale pielii i esuturilor moi, inclusiv infecii dup intervenii chirurgicale cosmetice. Sursa posibil a infeciei raportate putea fi contaminarea echipamentelor i/sau dezinfectarea sau sterilizarea lor inadecvat. S-a descoperit c n acest caz canulele de liposucie au fost cltite cu ap de la robinet i unele echipamente au fost dezinfectate cu soluie cuaternar de amoniu. Investigaia a artat c n acel cabinet medical existau nereguli n curarea corespunztoare, dezinfecia i sterilizarea echipamentelor de liposucie. Cu excepia medicului, ntreg personalul din cabinet lucra far licen. Att asistenii medicali ct i restul personalului fuseser instruii pentru curarea i sterilizarea echipamentelor de liposuctie dar nu existau protocoale scrise pentru sterilizarea n autoclav a materialelor reutilizabile i nici nu era inut evidena utilizrii acestuia. n plus, nu se foloseau controale biologice pentru verificarea bunei funcionri a autoclavului aa cum stipulau instruciunile productorului. Cabinetul nu avea protocoale scrise de dezinfecie i sterilizare. Asistentele amestecau ce rmnea n sticlue mici de povidon iodat i apoi foloseau amestecul pus ntr-o sticl mare. De asemenea foloseau tampoane de vat nmuiate n alcool i inute ntr-un recipient n loc de tampoane ambalate individual. O alt neregul identificat a fost utilizarea soluiei de alcool izopropilic 70% dintr-o sticl nesteril deschis, n locul unei soluii sterile de irigare, pentru a cura canula de liposucie, mai exact pentru a disloca esutul de pe ea n timpul liposuciei.

Ancheta epidemiologic nu a mai descoperit i alte cazuri de infecii cu micobacterii atipice n acest cabinet. Testele de laborator efectuate pe probe de ap de la robinet i aer din sistemul de ventilaie au fost negative pentruM. chelonae.n acest situaie cabinetul nu a putut fi incriminat pentru mbolnvirea pacientei.

S-a recomandat implementarea unor protocoale corecte pentru curare, sterilizare i dezinfecie, conform indicaiilor productorilor. S-a recomandat utilizarea unor controale biologice pentru verificarea bunei funcionri a autoclavului. Cadrelelor medicale far licen le-a fost suspendat dreptul de practic. Cabinetul a fost nchis pn la remedierea neregulilor.

2. 7. De reinutn orice laborator trebuie s existe protocoale scrise ale procedurilor de sterilizare i dezinfecie.

Laboratoarele trebuie s fie afiliate la un sistem de control i management al bolilor infecioase i toi care lucreaz n laborator trebuie s cunoasc modul de funcionare al sistemelor de sterilizare, al autoclavului i a substanelor dezinfectante.

2. 8. Verificai-v cunotinele1. Sterilizarea distruge:

A. Agenii patogeni

B. Agenii nepatogeni

C. Formele vegetative

D. Sporii

E. Endosporii

2. Dezinfecia:

A. Reprezint distrugerea formelor vegetative bacteriene

B. Reprezint distrugerea tuturor sporilor

C. Este eficient independent de cantitate

D. Se realizeaz cu ajutorul substanelor dezinfectante

E. Este eficient independent de timp

3. Prin autoclavare se sterilizeaz:

A. Articole de cauciuc

B. Medii de cultur

C. Diferite substane n soluie

D. Pipete i lame

E. Materiale contaminate din laborator

4. Iodoforii:

A. Sunt substane care elibereaz iodul n soluii apoase

B. Nu inhib sinteza proteic

C. Au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ

D. Au efect asupra unor spori bacterieni

E. Nu pot fi utilizai pentru dezinfecia suprafeelor

5. Urmtoarele afirmaii sunt corecte:

A. Autoclavarea se realizeaz la otemperatur de 121C timp de 15 minute

B. Tindalizarea se realizeaz la 100C, 30 minute, 3 zile consecutive

C. Septic nseamn neinfectat

D. Aseptic nseamn infectat cu ageni nepatogeni

E. Agentul bacteriostatic este un agent care distruge bacteriile

2. 9. Myth busters(ALEGEI ntre adevrat i fals)1. Argintul are propriei antimicrobiene. O moned de argint pus n mediu de cultur inoculat va inhiba creterea bacterian.

2. Clorura de mercur este bactericid dar este inactivat de materia organic.

3. Afumarea este o metod de sterilizare foarte eficient.

4. Fierberea timp de 10 minute distruge sporii.

5. Radiaiile ultraviolete pot produce leziuni la nivel ocular.