Analiza chimica calitativa a solutiei extractive apoase

Are ca scop stabilirea principalelor grupe de principii active ,prin reactii chimice specifice.Realizarea acestui obiectiv presupune doua etape:- produsul vegetal este supus unor extractii succesive cu solventi de polaritati diferite ,de la apolar la polar (in general eter etilic,metanol,apa);- in fiecare solutie extractiva se efectueaza reactii chimice specifice diferitelor clase de principii active.Deoarece producatorul recomanda administrarea amestecului de produse vegetale sub forma de infuzie ,analiza chimica s-a realizat pe solutie apoasa.Tehnica de lucru:

Obtinerea infuziei:Peste o lingurita de produs vegetal se adauga 200 mL apa clocotita si se lasa la infuzat 15 minute dupa care se filtreaza prin vata.Pe solutia apoasa s-au analizat urmatoarele principii active: substante cu caracter reducator oze si poliholozide mucilagii salicozida ODP-uri flavone saponozide taninuri alcaloizi carotenoide

1.Substante cu caracter reducator

Identificarea substantelor cu caracter reducator se realizeaza prin reactia cu reactivul Fehling.Principiul reactiei: are la baza proprietatea ozelor de a reduce hidroxidul amino-cupric la oxid cupros.Reactivi necesari: reactiv Fehling I, reactiv Fehling II.Tehnica de lucru: peste 1 ml solutie extractiva adusa in prealabil in eprubeta se adauga 1 ml reactiv Fehling (obtinuta prin amestecarea extempore a 0,5 ml reactiv Fehling I cu 0,5 ml reactiv Fehling II). Amestecul se incalzeste la flacara mica .Se observa aparitia unui precipitat rosu- caramiziu (oxid de cupru) care sedimenteaza in timp.

2. Oze si poliholozide

Identificarea se realizeaza atat prin reactia cu reactivul Fehling cat si prin cea cu reactivul Molisch.Principiul reactiei: sub actiunea acidului sulfuric concentrat ,ozele se deshidrateaza cu formarea furfuralului (pentozele) sau a hidroximetil-furfuralului (hexozele); acestia ,prin cuplare cu timol ,genereaza compusi colorati in rosu-purpuriu.Reactivi necesari: H2SO4 conc. , timol 10 g/L.Tehnica de lucru : 3-5 mL solutie extractiva se concentreaza in capsula pana la sicitate.Peste reziduul format (racit in prealabil) se adauga 1mL acid sulfuric concentrat si proba se mentine in repaus cel putin 5 minute (pentru deshidratare), dupa care se trateaza cu 1-2 picaturi timol 10g/L.Se formeaza un compus colorat in rosu-portocaliu (dependent de concentratia ozelor din proba).

3.Mucilagii

Identificarea se realizeaza prin precipitare in alcool sau acetona.Tehnica de lucru: intr-o eprubeta continand 10 mL metanol sau acetona se toarna in fir subtire, sub continua agitare ,2-3 mL solutie apoasa concentrata.Precipitatul format se separa prin filtrare (pe hartie de filtru) si se aduce intr-o eprubeta. In cazul prezentei mucilagiilor se observa un precipitat.

4.Carotenoide

Reactia Carr-Price

Principiul reactiei: la tratare cu triclorura de stibiu , carotenoidele formeaza compusi colorati in albastru ,care trec in rosu purpuriu si apoi in rosu-brun.Reactiv necesar : reactiv Carr-PriceTehnica de lucru: 1-2 mL solutie extractiva se aduce la reziduu intr-o capsula de portelan, pe baie de apa. Peste reziduu se adauga 1-2 picaturi reactiv Carr Price.In cazul unei reactii pozitive se observa aparitia unei coloratii albastre, care vireaza rapid in rosu-purpuriusi apoi in rosu-brun.

Reactia Winterstein

Principiul reactiei:la tratare cu acid sulfuric concentrat carotenoidele formeaza compusi colorati in albastru-verzui.Reactiv necesar: acid sulfuric concentrat.Tehnica de lucru: 1-2 mL solutie extractiva se aduce la reziduu intr-o capsula de portelan,pe baie de apa.Dupa racire , peste reziduu se adauga 1-2 picaturi acid sulfuric concentrat.In cazul unei reactii pozitive se observa aparitia unei coloratii albastre-verzui.

Reactia cu acid clorhidric concentrat

Principiul recatiei: la tratare cu acid clorhidric concentrat carotenoidele cu structura epoxidica formeaza compusi colorati in verde albastrui.Reactiv necesar: acid clorhidric concentratTehnica de lucru: 1-2 mL solutie extractiva se aduce la reziduu , intr-o capsula de portelan, pe baia de apa.Dupa racire, peste reziduu se adauga 1-2 picaturiacid clorhidric concentrat.In cazul unei reactii pozitive se observa aparitia unei coloratii verde-albastrui.

5.Salicozida

Se identifica prin reactia cu clorura de fer (III).Principiul reactiei :salicozida are capacitatea de a forma coloratie specifica, rosie-portocalie, la tratarea cu clorura de fer (III) .Reactiv necesar: clorura de fer (III)10g/L.Tehnica de lucru:0,5g produs vegetal maruntit (sita II,III) se supune extractiei prin refluxare cu apa.Dupa fiecare extractie ,se filtreaza.Filtratelor reunite li se adauga 5 mL acetat de plumb 100 g /L.Proba se mentine pe baie de apa pana cand precipitatul format se concretizeaza , apoi se filtreaza.Solutia partial purificata, rezultata in urma indepartarii taninului se trateaza cu 1 g Na2CO3 pentru indepartarea excesului de ioni de plumb.Dupa filtrare, solutia extractiva purificata se trateaza cu 1 mL clorura de fer (III) 10g /L.Se obtine o coloratie specifica rosu-portocalie.

6.ODP-uri

Se identifica prin reactia cu reactivul Arnow.Principiul reactiei: formarea nitrozoderivatilor (in mediu acid) si tautomerizarea spontana a acestora la oximele corespunzatoare, care prezinta coloratie rosie si se solubilizeaza in mediu alcalin.Reactivi necesari: acid clorhidric 0,5 N sau 1N ,reactivul Arnow,hidroxid de sodiu 0,5 N sau 1 N.Tehnica de lucru:0,5 g produs vegetal pulverizat se extrag prin refluxare repetata cu apa sau alcool.Dupa racire, solutiile se filtreaza ,apoi se reunesc.1mL solutie extractiva se trateaza cu 1 mL acid clorhidric 0,5 N, 1 mL reactiv Arnow si 1 mL hidroxid de sodiu 0,5N.Apare o coloratie rosie sau rosu violeta ca urmare a formarii oximei acidului cafeic.

7.Flavone

Formarea fenoxizilor

Principiul reactiei: flavonozidele si agliconii formeaza in mediu alcalin fenoxizi colorati in galbenReactiv necesar: hidroxid de sodiu 100g/L.Tehnica de lucru: la 1 mL solutie extractiva apoasa se adauga 0,5 mL solutie de hidroxid de sodiu 100 g/L.Se observa intensificarea coloratiei galbene.

Reactia Shibata (reactia cianidolului sau reactia de reducere a gruparii ceto de la C4)

Principiul reactiei: se bazeaza pe proprietatea flavonozidelor sau a agliconilor acestora sa isi reduca gruparea ceto in prezenta hidrogenului nativ.Reactivi necesari: magneziu metalic,acid clorhidric concentrat.Tehnica de lucru:la 1 mL solutie extractiva apoasa se adauga cateva fragmente de magneziu metalic si 0,5 mL solutie de acid clorhidric concentrat. Reactia este insotita de efervescenta.Modificarea culorii are loc in decurs de cateva minute.

Reactia de obtinere a chelatilor

Principiul reactiei : se bazeaza pe proprietatea flavonozidelor sau a agliconilor acestora de a forma in prezenta metalelor bi- sau trivalente chelati colorati in galben intens si care prezinta o fluorescenta galben-verzuie sau albastra in lumina UV.De asemenea formeaza combinatii oxalo-borice sau citroborice cu fluorescenta galben-verzuie in lumina UV.Reactivi necesari: acetat de sodiu 100 g/L,clorura de aluminiu 25 g /LTehnica de lucru : la 1 mLsolutie extractiva apoasa se adauga 0,5 mL solutie acetat de sodiu 100 g/L si 1 mL solutie clorura de aluminiu 25 g/L.Se observa intensificarea coloratiei galbene.

8.Saponozide

Proba de spumefiere

Principiul reactiei : o solutie apoasa continand saponozide,prin agitare energica timp de 15 secunde ,formeaza o coloana de spuma persistenta cel putin 15 minute.Tehnica de lucru:5,00 mL solutie extractiva apoasa continand saponozide se agita timp de 15 secunde,apoi se lasa in repaus.Existenta unei spume persistente si dupa 15 minute denota prezenta saponozidelor.

Reactii de precipitare cu hidroxid de bariu,acetat bazic si neutru de plumb

Principiul reactiei:saponozidele formeaza cu hidroxidul de bariu ,acetat bazic si neutru de plumb precipitate albe,insolubile in exces de reactiv.Reactivi necesari: hidroxid de bariu 100 g/L,acetat de plumb (II) 50g/L,acetat bazic de plumb (II).Tehnica de lucru: peste 1 mL solutie extractiva apoasa se adauga 0,5 mL reactiv.Aparitia unor precipitate alb-galbui indica prezenta saponozidelor.

9.Taninuri

Reactia cu clorura ferica

Principiul reactiei: in prezenta cationului Fe (III) taninurile catehice formeaza precipitate si/sau coloratie verde-negricioasa, iar cele galice precipitate si/sau coloratie albastra-negricioasa.Reactiv necesar : clorura de fer (III) 10 g/LTehnica de lucru: la 1 mL solutie extractiva se adauga 0,5 mL solutie de clorura de fer .Se obtine un precipitat si/sau coloratie diferita in functie de tipul de tanin.