insamantari artificiale noi

8/6/2019 insamantari artificiale noi

1/40

INSAMANTARILEINSAMANTARILE

ARTIFICIALEARTIFICIALE


2/40

Biotehnologie de generaia IBiotehnologie de generaia I--a, ce permitea, ce permite

multiplicarea descendenei unui masculmultiplicarea descendenei unui masculvaloros, dincolo de limitele biologice alevaloros, dincolo de limitele biologice aleacestuiaacestuia

Aplicat pe scar larg la bovine i ovine i,Aplicat pe scar larg la bovine i ovine i,ntrntr--o msur mai mic, la celelalte speciio msur mai mic, la celelalte specii(cabaline, suine, canide)(cabaline, suine, canide)

Ofer avantaje de ordinOfer avantaje de ordin ::

EconomicEconomic

ZootehnicZootehnic ameliorarea raselorameliorarea raselor

MedicalMedical


3/40

Indicaiile de ordin clinic Deficiena anatomic la unul dintre parteneri ce nu permite

monta natural (angustia vulvei sau a vaginului, diferenamare de greutate sau talie, etc.);

Masculul refuz monta deoarece actul montei i provoacdurere;

Sunt cazuri n care masculul i femela nu se accept reciprocdin pur antipatie, n timp ce cu ali parteneri ar fi dispui sse monteze;

Caracterul dominant puternic al femelei ce atrage dup sineinhibarea masculului;

Lipsa de experien a unuia dintre parteneri poate faceimposibil monta natural.

Momentul nepotrivit


4/40

Avantaje economice

Elimin costurile, riscurile si timpul legate de

transportul femelei.

D.p.d.v. al proprietarului masculului, dac acesta are un

an expozitional foarte bun, inseminarea artificialpermite recoltarea spermei si nsmntarea femelelor

fr ntreruperea activittilor curente.

Materialul seminal congelat permite reproducerea unui

mascul de mare valoare o lung perioad de timp dupmoartea sa

Riscul transmiterii bolilor venerice este minimalizat


5/40

Cuprinde patru etape principale :Cuprinde patru etape principale :

Recoltarea spermeiRecoltarea spermei Examenul materialului seminalExamenul materialului seminal

Ex. MacroscopicEx. Macroscopic

Ex. MicroscopicEx. Microscopic

Ex. complementareEx. complementare

Diluarea si conservarea materialului seminalDiluarea si conservarea materialului seminal

RefrigerareaRefrigerarea

CongelareaCongelarea In gheata carbonicaIn gheata carbonica

In azot lichidIn azot lichid

Inocularea materialului seminalInocularea materialului seminal


6/40

Reuita I.A. depinde de trei puncte cruciale:

Calitatea spermei;

Alegerea momentului optim de I.A.;

Alegerea metodei adecvate de inseminare.


7/40

A. Recoltarea spermeiA. Recoltarea spermei

Indiferent de metoda de recoltare utilizata, aceastatrebuie sa fie precedata de examenul general almasculului, inclusiv al aparatului genital, cu efectuareade teste specifice (ex.: examen serologic pentrubruceloza).

Recoltarea se poate face in prezenta unei femele aflatein estru sau cu ajutorul feromonilor artificiali (vier,caine)


8/40

Examenul reproducatorului mascul

Anamneza

regimul de mont;

comportamentul n timpul montei;

rezultatele montelor anterioare;

afeciuni recente, ndeosebi ale sferei genitale;

eventualele tratamente efectuate i rezultatul lor;

regimul de utilizare la munc, sport sau antrenament,

performanele individuale


9/40

Examenul reproducatorului mascul

Inspectia Generala

Locala

Reflexele sexuale Apropierea

Erectia Saltul

Intromisiunea

Ejacularea

Palpatia

Ecografia testiculara si prostatica Examene serologice pt bolile veneriene (bruceloza,

herpesviroza etc.)


10/40

A. Recoltarea spermeiA. Recoltarea spermei

1. Vaginul artificial1. Vaginul artificial Imita conditiile de temperatura, presiune siImita conditiile de temperatura, presiune si

lubrifiere din vaginul femelei in estrulubrifiere din vaginul femelei in estru

Alcatuit din : carcasa cu robinet, camasa dinAlcatuit din : carcasa cu robinet, camasa dinlatex + inele de cauciuc, pahar colector +latex + inele de cauciuc, pahar colector +

protectieprotectie

Recoltarea se poate face pe o femela in calduriRecoltarea se poate face pe o femela in calduri

spontane sau induse hormonal, pe manechinspontane sau induse hormonal, pe manechinsau pe un alt masculsau pe un alt mascul

Folosit la taur, armasar, berbec, vier, caineFolosit la taur, armasar, berbec, vier, caine


11/40


12/40

2. Electroejacularea2. Electroejacularea

Stimularea centrilor nervoStimularea centrilor nervoi ai ereci ai erecieiiei i ejaculi ejaculrii dinrii din

mmduva lomboduva lombo--sacralsacral, cu ajutorul unui curent electric de, cu ajutorul unui curent electric dejoasjoas tensiunetensiune

Se practicSe practic la taur (electrod endorectal bipolar), berbecla taur (electrod endorectal bipolar), berbec

(electrod endorectal monopolar(electrod endorectal monopolar i electrod lombari electrod lombar

monopolar)monopolar) i motani motan

Avantaj :Avantaj : poate fi folositpoate fi folosit la masculii cu impotenla masculii cu impoten dedecopulacopulaie (impotentia coeundi)ie (impotentia coeundi)

Dezavantaje :Dezavantaje : ejaculatul este inferior d.p.d.v. cantitativ siejaculatul este inferior d.p.d.v. cantitativ si

calitativ celui obtinut cu vaginul artificial ; uneori se poatecalitativ celui obtinut cu vaginul artificial ; uneori se poate

produce ejacularea in furouproduce ejacularea in furou


13/40

3. Metoda prezervativului (condomului)3. Metoda prezervativului (condomului) Se practica uneori la armasarSe practica uneori la armasar

Pe post de prezervativ, se poate utiliza o manusaPe post de prezervativ, se poate utiliza o manusaobstetricala pentru ETRobstetricala pentru ETR

4. Metoda manuala (masturbarea)4. Metoda manuala (masturbarea) Se practica la vier si la caineSe practica la vier si la caine

La vierLa vier elementul esential este presiuneaelementul esential este presiuneaexercitata de operator cu degetele la nivelulexercitata de operator cu degetele la nivelul

portiunii spiralate a penisului, analog papilelorportiunii spiralate a penisului, analog papilelorcervicale ale scroafeicervicale ale scroafei

La caineLa caine presiunea trebuie exercitata la nivelulpresiunea trebuie exercitata la nivelulbulbilor glandului, iar penisul se orienteazabulbilor glandului, iar penisul se orienteaza

posterior atunci cand masculul paseste peste manaposterior atunci cand masculul paseste peste manaoperatoruluioperatorului


14/40

5. Masajul transrectal al veziculelor seminale5. Masajul transrectal al veziculelor seminalei al ampulelor canalelor deferentei al ampulelor canalelor deferente

Este o metod practicat uneori la taur, n cazulEste o metod practicat uneori la taur, n cazulimpotenei de copulaieimpotenei de copulaie

Prezint dezavantajul c ejacularea se produce frPrezint dezavantajul c ejacularea se produce frerecie, n furou, iar n cazul masajului preaerecie, n furou, iar n cazul masajului preaenergic al gtului vezici urinare exist risculenergic al gtului vezici urinare exist risculamestecului spermei cu urina.amestecului spermei cu urina.

Avantajul principal const n simplitatea metodei,Avantajul principal const n simplitatea metodei,care nu necesita nici un fel de materialecare nu necesita nici un fel de materialesuplimentaresuplimentare


15/40

B. Examinarea materialului seminalB. Examinarea materialului seminal

EsteEste precedatprecedat ii corelatcorelatntotdeaunantotdeauna cucu examenulexamenul fizicfizicgeneralgeneral alal reproducreproductoruluitoruluimasculmascul..

11..ExEx.. macroscopicmacroscopic::

VolumVolum se apreciazse apreciaz imediatimediatdupdup recoltare prin citire directarecoltare prin citire directa

n paharul de recoltaren paharul de recoltare

CuloareCuloare-- se apreciazse apreciaz subiectivsubiectivimediat dupimediat dup recoltarerecoltare i variazi variazn funcn funcie de specie, concentraie de specie, concentraiaian spermatozoizi sau prezenn spermatozoizi sau prezenaasubstansubstanelor strelor strineine n ejaculatn ejaculat(s(snge, puroi, urinnge, puroi, urin, etc)., etc).


16/40

pHpH apreciat cu ajutorul pHapreciat cu ajutorul pH--metrelor saumetrelor sau

cu hcu hrtie indicatoare specialrtie indicatoare special; exist; exist oocorelacorelaie directie direct ntre calitatea spermeintre calitatea spermei ii

pHpH--ul acesteia (cu cul acesteia (cu ct proba de spermt proba de sperm esteeste

mai bunmai bun cu atcu att estet este mai acidmai acid)) MirosMiros -- sperma normalsperma normal este inodoreste inodor;;

prezenaprezena urinurineiei,, aa puroiulpuroiuluiui,, aa ssngelngeluiui sausau aaununoror medicamentemedicamente n ejaculatn ejaculat modificmodific

mirosulmirosul acestuiaacestuia


17/40

2. Ex.2. Ex. mmicroscopic:icroscopic:

ConcentraConcentraia materialului seminalia materialului seminal

--tehnicatehnica hemocitometrichemocitometric:: adaptatadaptat dupdup tehnicatehnica dedenumnumrarerare aa globulelorglobulelor roroiiii..

-- metodametoda electronicelectronic (SQA)(SQA):: multmult maimai rapidrapid ii maimai exactexact..PePe bazabaza densitiidensitii opticeoptice determindetermin concentraia,concentraia,mobilitateamobilitatea ii procentulprocentul dede spermatozoizispermatozoizi frfr anomaliianomalii..

-- sistemelesistemele computerizatecomputerizate dede analizanaliz aa spermeispermei (CASA)(CASA)::softulsoftul esteeste proiectatproiectat pentrupentru aa determinadetermina concentraconcentraia,ia,viabilitatea,viabilitatea, morfologiamorfologia ii mobilitateamobilitatea spermatozoizilorspermatozoizilor..EsteEste foartefoarte rapidrapid ii precisprecis..

Azoospermia=

absen=

absena spermatozoizilora spermatozoizilor n ejaculatn ejaculat Oligozoospermia = un num= un numr scr sczut de spermatozoizizut de spermatozoizi nnejaculat (raportat la specie)ejaculat (raportat la specie)


18/40

Mobilitatea spermatozoizilorMobilitatea spermatozoizilor- Mobilitatea generalaa spermei se apreciaza cat mai repede dupa

recoltare prin examenul in picatura suspendata (o picaturade sperma nediluata se depune pe o lama); miscarea in val(taur, tap) se noteaza cu 5, iar lipsa de miscare cu 0

- Mobilitatea individualase apreciaza prin examinarea uneipicaturi de sperma proaspata diluata depusa intre lama silamela; se vor aprecia miscarea de inaintare, traiectoria

liniara si viteza de inaintare (velocitatea). Mobilitateaindividuala se noteaza pe o scara de la 0-5, sperma normalaregasindu-se in intervalul 2,5-5.

Astenozoospermia defineste o mobilitate foarte scazuta aspermatozoizilor.


19/40

Morfologia spermatozoizilor Se apreciaz imediatdup recoltare prin examen microscopic (100x cu

imersie) i colorare (albastru de metilen, violet degeniana, tu de China, opal-bleu, albastru-tripan-Giemsa, eozin-negrozin, Spermac etc). Oferposibilitatea de a pune n eviden spermatozoizii

imaturi, cu anomalii (majore sau minore) sau mori.

Teratozoospermia = exces de forme teratologice ale

spermatozoizilor dintr-un ejaculat. ntr-un ejaculatnormal procentul spermatozoiziloranormali, imaturisau mori = max 20%.


20/40


21/40

Principalele anomalii morfologice ale spermatozoizilor:majore i minore


22/40

ViabilitateaViabilitatea

Tehnici de colorare intravitale (eozinaTehnici de colorare intravitale (eozina--negrozina, albastrunegrozina, albastrutripantripan--Giemsa etc.) sau tehnici de colorare fluorescenta,Giemsa etc.) sau tehnici de colorare fluorescenta,urmate de examinare microscopica simpla sau specialaurmate de examinare microscopica simpla sau speciala(microscop cu lumina polarizata, microscop cu contrast de faza(microscop cu lumina polarizata, microscop cu contrast de fazasau cu lumina fluorescenta)sau cu lumina fluorescenta)


23/40

3. Ex. complementare:3. Ex. complementare:

Testul hipoosmotic permite aprecieri privind integritatea

membranei spermatozoidului. n mediul hipoosmotic,spermatozoizii normali prezint gonflri ale membranei dinzona piesei intermediare i/sau a celei din regiunea cozii.

Proba redox urmrete aprecierea metabolismului celulelorspermatice prin intermediul unei substante colorate peprincipiul masurarii capacitatii de reducere a (albastru demetilen); cu cat decolorarea amestecului este mai rapida cuatat proba de sperma este mai buna.


24/40

Coloraia Spermac - Permite identificareastatusului membranelor acrozomului

Analiza structurii cromatineispermatozoizilor(SCSA) pune n eviden

modul n care are loc fragmentarea ADN. Ex. bacteriologic

- presupune recoltarea separat a fraciunilorejaculatului i realizarea de nsmnri pe medii

pentru germeni aerobi, anaerobi, micoplasme ifungi; n mod normal, n sperm se gsescaproximativ 10.000 celule bacteriene/ml.


25/40

Ex. imunologic

- urmrete detectarea anticorpilor antispermatici care araltera capacitatea fecundant a spermatozoizilor. Ruperea

barierei hemato-testiculare (n traumatisme, infecii)

permite contactul spermatozoizilor cu sngele circulant=> sinteza de ctre propriul sistem imun a anticorpilorantispermatici


26/40

C. DiluareaC. Diluarea i conservarea materialului seminali conservarea materialului seminal

DiluareaDiluarea materialuluimaterialului seminalseminal se realizeaz n scopulfracionrii ejaculatului =mai multe doze de inseminare.

Mediile de diluie trebuie s conin:

- substane energetice (glucide);- substane crioprotectoare (glicerina, lecitina din glbenuulde ou);- substane tampon - menin constant pH-ul spermei n timpuldilurii i conservrii (citrai, fosfai, tartrai, etc);

- substane care s activeze mobilitatea spermatozoizilor ncile genitale femele (mucinaza);- substane care s mpiedice dezvoltarea florei microbiene(antibiotice, sulfamide)

Diluantul trebuie s fie izoton i izoterm cu sperma, s aib

acelai pH cu aceasta, s se prepare uor, s fie economic, s-imen in ro riet ile un tim ndelun at.


27/40

Conservarea materialului seminal urmrete

meninerea mobilitii i capacitii fecundante aspermatozoizilor un timp ct mai ndelungat, nafara cilor genitale femele.

Principiul care st la baza crioconservriimaterialului seminal = reducerea temperaturiispermei determin o scdere a activitiimetabolice a spermatozoizilor permind stocarea

lor.


28/40

Conservarea materialului seminal se poate realizaprin:

-refrigerare (pstrare la 2-8 grade Celsius)

-congelare (pstrare n azot lichid la -196 gradeCelsius).

Procedee de congelare a materialului seminal:- congelarea n paiete (mari, mijlocii i mici);

- congelarea n fiole;

- congelarea n pilule n ghea carbonic la 79 grade Celsius abandonat la ora actual


29/40

Etapele congelrii

Centrifugarea pt. A ndeprta excesul defluid prostatic

Diluarea

Echilibrarea termic pt a evita ocul termicsperma este refrigerat (1-4 ore) nainte deplonjarea n azotul lichid

Ambalarea se prefer paietele: volum mic,congelare uniform, se pot marca ptidentificarea animalului i data recoltrii

Congelarea propriu-zis


30/40

Decongelarea materialului seminal

Exista o corelatie intre ratele de racire si cele de decongelare se respecta instructiunile furnizate de firma/persoana care afacut congelarea

Decongelarea n baie de ap caldPt. paietele de 0,5 ml: 8 secunde la 70C sau 30-60 secunde la35C

In apa cu gheata timp de 3 minute

Decongelare in buzunar


31/40


32/40

D. Inocularea materialului seminalD. Inocularea materialului seminal =depunerea materialului seminal n cile genitale

femele.

Principii

- n momentul optimpentru fiecare specie;

- la locul de elecie caracteristic fiecrei specii;

- instrumentarul folosit la inseminare s fiesterili

nclzitla 38 C;- s se evite traumatizarea mucoasei vestibulo-vaginale, cervicale sau uterine n timpul inoculrii.


33/40

PentruPentru spermasperma refrigeratrefrigerat:: -- flaconulflaconul cucu materialmaterial seminalseminal

sese laslas lala temperaturatemperatura camereicamerei 55 minuteminute;; sese utilizeazutilizeaz

spermasperma carecare conconineine celcel pupuinin 6060%% spermatozoizispermatozoizi cucu

mimiccriri vioaievioaie dede naintarenaintare..

PentruPentru spermasperma congelatcongelat:: -- sese inoculeazinoculeaz dupdup

decongelaredecongelare;; sese admiteadmite inoculareainocularea spermeispermei carecare conconineine

minimumminimum 3535--4040%% spermatozoizispermatozoizi cucu mimiccriri vioaievioaie dedenaintarenaintare..


34/40

Inocularea spermei laInocularea spermei la vaca::

-- se inoculeaz o singur doz de material seminal la

12 ore de la depistarea estrului--nn canalul cervicalcanalul cervicalsausau nn cavitatea uterinacavitatea uterina;;

-- metoda rectometoda recto--vaginalvaginal/bimanual/bimanual (cel mai frecvent)(cel mai frecvent)sausau metoda cu speculum vaginal.metoda cu speculum vaginal.


35/40

Inocularea spermei la iap:

-- depistareadepistarea momentuluimomentului optimoptim pentrupentru II..AA.. sese realizeazrealizeaz

prinprin ultrasonografieultrasonografie // ETRETR inin dinamicadinamica (evoluia(evoluia mrimiimrimiiii formeiformei folicululuifoliculului ovarianovarian,preovulator,preovulator 3535--4040 mmmm))

-- cucu 1212 oreore nainteanaintea ovulatieiovulatiei;;

-- nn cavitateacavitatea uterinuterin..


36/40

LaLa oaieoaie::--imediatimediat cece esteeste depistatadepistata inin calduricalduri (berbecul(berbecul incercator)incercator) sisi seserepetarepeta dupadupa 1212--1818 oreore;;

-- cucu unun speculumspeculum vaginalvaginal sisi seringaseringa dede inoculareinoculare sese inoculeazainoculeaza00,,11 mlml spermasperma lala nivelulnivelul canaluluicanalului cervicalcervical..


37/40

La scroafa:

- Depistarea: cu vier ncerctor / apariia imobilizrii la

ngrijitor- se folosesc catetere cu oliva sau spiralate asemanator

portiunii libere a penisului la vier (cateterul Melrose);

- varful pipetei se angreneaza in cervix, iar materialulseminal se depune in corpul uterin.


38/40

La catea:

Progesteron(ng/ml)

Momentul montei

0 1 n 36 48 ore

1 3 n 36 48 ore

3 6 n 24 36 ore

6 12 n 9 24 ore

> 12 n 12 ore ( < 24ore)

- detectarea momentuluioptim pentru I.A.:ex. citovaginal (celuleSchollen) i prin dozareaprogesteronului plasmatic

(peste 8 ng/ml) sau a LH-ului;- se mai pot utiliza

vaginoscopia si examenulecografic al ovarelor

- intravaginal, intracervicalsau intrauterin


39/40

Examenul citovaginal hormonal - estrus

celule superficiale

cheratinizate, anucleate,

grupate n ciorchine

Eritrocitele sunt rare sauchiar absente

Fondul frotiului este

curat lipsit de mucus i

detritusuri celulare


40/40

Ceaua se va menine cu trenul post. ridicat 15 min pentru afacilita pasajul spermatozoizilor n uter, timp n care se va masaclitorisul (stimuleaz contraciile vaginale i uterine

antiperistaltice)

insamantari artificiale noi

Documents