Slide 1

Fracionarea celularDefiniie Este o tehnic bazat pe caracteristicile structurilor subcelulare (form, dimensiune, densitate) care reuete s le diferenieze astfel permind separarea lor. Celulele pot fi dezmembrate prin: -ocosmotic -ultrasonicare -filtrare prinsitemici. Dac celula este dezmembrat ntr-o manier delicat, fiecare din organitele sale poate fi izolat.Procesul de dezmembrare celular se numete omogenizare,iar procesul ulterior de izolare a organitelor se numete,fracionare. Izolarea organitelor necesit tehnici de chimie fizic mergnd de la strecurare prin site simple, la sedimentarea gravitaional sau precipitare diferenial sau la ultracentrifugare sau marcare fluorescent a fragmentelor n gradiente de densitate generate pe computer.

George Palade a realizat importana excepional amicroscopiei electronicei abiochimiein studiile decitologie.mpreun au combinat metodele de fracionare a celulei cumicroscopie electronic, producnd componeni celulari care erau omogeni morfologic. Analiza biochimic a fraciunilormitocondrialeizolate a stabilit definitiv rolul acestor organule subcelulare ca un component major productor de energie. Cel mai important element al cercetrilor lui Palade a fost explicaia mecanismului celular al produciei deproteine. A pus n eviden particuleintracitoplasmaticebogate nARN, la nivelul crora se realizeaz biosinteza proteinelor,numiteribozomisaucorpusculii lui Palade.

Tehnica de fractionare celulara are doua aplicatii majore: extragerea organitelor celulare, separarea lor de mediul normal celular, intr-o cantitate suficienta si de o mare puritate, pentru a putea fi studiata compozitia chimica si functiile lor. identificarea localizarii intracelulare a unor molecule specifice, alaturi de celelalte tehnici de citochimie.

Principiile fractionarii celularePrimul pas in extragerea unor cantitati suficiente de organite celulare il reprezinta ruperea membranelor plasmatice prin diferite procedee mecanice si chimice, urmata de separarea fractiunilor celulare prin centrifugare, in functie de volum si densitate. Centrifugarease foloseste pentru o rezolutie cat mai buna a diferentierii organitelor celulare, de diferentele dintre proprietatile lor fizice, din care cele mai importante sunt marimea si densitatea. Exista numeroase similitudini intre organite atat in ceea ce priveste marimea cat si densitatea lor, insa, in general, structuri care au un volum asemanator au densitati diferite.Centrifugarea diferentiatapresupune separarea fractiunilor celulare fie doar in functie de marimea particulelor subcelulare, fie doar dupa densitatea lor.Pentru ruperea membranelor plasmatice, celulele sunt suspendate intr-o solutie ce contine o sare cu un pH apropiat de cel al mediului intracelular (de exemplu sucroza izotonica). Ulterior este necesara agitarea suspensiei celulare la o viteza foarte mare, prin centrifugare sau prin plasarea sa intr-un camp sonic de inalta frecventa. Prepararea omogentelor celulare In vederea izolarii fractiilor celulare si a studierii proprietatilor lor functionale, se porneste de la un tesut sau de la celule libere, a caror membrane plasmatice trebuiesc rupte. Omogenatul celular (tisular) este reprezentat de componentele celulare, suspendate intr-un mediu corespunzator.Omogenatele celulare se pot obtine de la orice tip de celula procariota sau eucariota. Nu orice tip de tesut este adecvat omogenizarii si fractionarii. De regula, se folosesc tesuturi moi, relativ voluminoase si usor manevrabile: ficat, muschi, rinichi, creier.Tesutul se mai alege si in functie de tipul de organite celulare pe care dorim sa le separam; pentru obtinerea mitocondriilor se prefera ficatul, pentru izolarea nucleilor se va utilize ficat sau timus, etc.