Download - LP 1 - Algoritmul de Diagnostic Virusologic
-
ALGORITMUL
DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE
-
Etapele diagnosticului
virusologic
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
-
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE STERIL!!!
-
Fluidele orale reduc riscul contaminarii,
simplifica procedura de recoltare
-
PRODUSE PATOLOGICE Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.
Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai febrelor hemoragice.
Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor).
Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar adenovirusuri enterice.
Secretii nazo faringiene
a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale de catre personal calificat
Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale, adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial, v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.
Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de inceperea tratamentului.
Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.
-
PRODUSE PATOLOGICE Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice.
Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei pipete.
Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.
Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile, respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila a regiunii.
Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale.
Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile de celule.
-
Transportul probelor recoltate
Rapid
La rece
Sigur ambalare riguros corecta
etichetarea cu semn biorisc
documentatie in legatura cu agentul biologic transportat
-
Formular de trimitere pentru diagnostic
virusologic
Adresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic
Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, e-
mail)
Nume, prenume pacient Sex, Varsta
Date clinice, suspiciune
diagnostic
Data debutului
simptomatolgiei
Tipul produs patologic Data, ora recoltarii
Tipul tratamentului administrat
in prealabil
Date epidemiologice (contact
cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatorii
in zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)
Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului
-
1. Izolare virala in: Culturi de celule
Ou de gaina embrionat
Animal de laborator
2. Detectia directa a : Particulelor virale EM , IEM
Antigene virale ELISA, IF
Genom viral PCR; Rt-PCR
3. Teste Serologice: a. Ac virus- specifici tip IgM
b. seroconversia in ac virus- specifici tip IgG
Direciile diagnosticului virusologic
-
Pocks-uri pe MCA a OGE - v. variolic
Izolarea virala prin inoculare pe OGE
-
Detectia directa a
particulei virale prin Microscopie Electronica
Coloratia negativa
acetat de uranil
acid fosfotungstic
Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml): SPIEM, SIA
Metode de concentrare: ultracentrifugare
difuzia in agar
centrifugare directa pe grila de ME
-
Diagnosticul serologic pe prob unic de ser - anticorpi antivirali de tip
IgM (rspunsul imun primar) - ELISA de captur
pe probe pereche de ser - proba I - la debut
- proba II - la 2-3 sptmni
ELISA tehnica indirect sau de competiie
seroconversia (proba I - nu exist anticorpi/ proba II
- apar anticorpi specifici virusului de detectat),
creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntre cele 2 probe (de minim 4 ori)
-
Etapele diagnosticului virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
Izolarea viral
Dem. virusului/componente Diagnosticul
serologic
-
VIRUSOLOGIE
Lucrari practice
Prepar. Univ Dr. Aura Temereanca
Asist. Univ dr. Cornel Popescu
Sef Lucrari Univ. dr. Camelia Sultana
-
ALGORITMUL
DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE
-
Etapele diagnosticului
virusologic
Orientarea diagnosticului (suspiciunea
de viroz)
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
-
Etapele diagnosticului
virusologic
Orientarea diagnosticului
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
-
Formular de trimitere pentru diagnostic
virusologic
Adresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic
Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, e-
mail)
Nume, prenume pacient Sex, Varsta
Date clinice, suspiciune
diagnostic
Data debutului
simptomatolgiei
Tipul produs patologic Data, ora recoltarii
Tipul tratamentului administrat
in prealabil
Date epidemiologice (contact
cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatorii
in zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)
Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului
-
V. Varicela - Zoster
-
Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
-
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE
S T E R I L !!!
-
Conteinere sterile pentru recoltarea si transportul
produselor patologice
-
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE
S T E R I L ! ! !
-
Recoltarea probelor- locul & timpul potrivit
POLIO (enterovirusuri)
-
Recoltarea produselor patologice
-
PRODUSE PATOLOGICE Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.
Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai febrelor hemoragice.
Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor).
Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar adenovirusuri enterice.
Secretii nazo faringiene
a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale de catre personal calificat
Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale, adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial, v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.
Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de inceperea tratamentului.
Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.
-
PRODUSE PATOLOGICE Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice.
Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei pipete.
Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.
Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile, respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila a regiunii.
Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale.
Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile de celule.
-
Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor
patologice Direciile diagnosticului virusologic
-
Transportul probelor recoltate
Rapid
La rece
Sigur ambalare riguros corecta
etichetarea cu semn biorisc
documentatie in legatura cu agentul biologic transportat
-
Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
-
DIRECIILE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC
1. Izolarea viral
2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale
3. Diagnosticul serologic
-
Izolarea
virusurilor
-
Izolarea virusurilor
3 sisteme de izolare folosite n virusologie
Culturi de celule
Ou de gin embrionat
Animalul de laborator
-
Izolarea virusurilor
in culturi de celule
-
HEK 293 HeLa BSC-40
Infectate cu v. variolic
Neinfectate
Izolarea pe culturi de celule
= EFECTE CITOPATICE
-
RABIE
Sus- neuron fara
incluzii Negri
Jos neuron cu incluzii
Negri (col HE)
-
Izolarea virala
prin
inoculare la
animalul de
laborator
-
RABIE modificari
patognomonice in SNC
Infiltrat mononuclear perivascular-
sus
Focare de infiltratie limfocitare in
celulele gliale -jos
-
Pocks-uri pe Membrana Chorio-alantoindiana OGE - v. variolic
Izolarea virala prin inoculare pe OGE
-
DIRECIILE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC
1. Izolarea viral
2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale
3. Diagnosticul serologic
-
Detectia directa
a particulei
virale
-
Microscopia electronica
Coloratia negativa
acetat de uranil
acid fosfotungstic
Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml)
Metode de concentrare: ultracentrifugare
difuzia in agar
centrifugare directa pe grila de ME
-
Microscopie electronica
Coloratie negativa
vaccinia
-
Microscopie electronica
Coloratie negativa
variola
-
Electron micrographs of hepatitis C virus purified from cell culture.
Scale bar is 50 nanometers.
-
Detectia directa a
componentelor
viraleAcid nucleic
Antigene virale
-
Detectia directa a acidului
nucleic viral - PCR
-
Thermocycler
-
Detectia directa a antigenelor
virale ELISA (test imuno-enzimatic)
-
sandwich ELISA. (1) Plate is coated with a capture antibody; (2) sample is added,
and any antigen present binds to capture antibody; (3) detecting antibody is added,
and binds to antigen; (4) enzyme-linked secondary antibody is added, and binds to
detecting antibody; (5) substrate is added, and is converted by enzyme to
detectable form.
-
Detectia directa a antigenelor virale
reactia de imunofluorescenta (IF)(test rapid de detectie a Ag)
-
Identificarea virusurilor prin neutralizarea
efectului citopatogen
Reactia de Seroneutralizare
- Identificarea Enterovirusurilor
RSN
-
Identificarea virusurilor prin inhibarea efectului viral
Matrice
Nucleocapsida helicoidala
ARNss
HA - hemaglutinina
transcriptaza
anvelopa
NA - neuraminidaza
Reactia de Hemaglutinoinhibare
-Identificarea virusurilor gripale
RHAI
-
DIRECIILE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC
1. Izolarea viral
2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale
3. Diagnosticul serologic
-
Raspuns
imun
primar
Raspuns
imun
secundar
Diagnosticul serologic in infectiile virale
-
Diagnosticul serologic pe prob unic de ser - anticorpi antivirali de
tip IgM (rspunsul imun primar) - ELISA de captur
pe probe pereche de ser- proba I - la debut
- proba II - la 2-3 sptmni
ELISA tehnica indirect sau de competiie
seroconversia In proba I nu exist anticorpi In proba II apar anticorpi specifici virusului de detectat
creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntre cele 2 probe (de minim 4 ori)
-
Etapele diagnosticului virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
Izolarea viral
Dem. virusului/
componente
Diagnosticul
serologic
1. Algoritmul de diagnostic virusologic1