Diagnosticul maladieihidatice, de la preclinic la biologia moleculară
• Patricia Mihailescu1, Carmen Cretu1,2, Claudia Istrate1
• 1-SC EcoParaDiagnostic SRL București
• 2-UMF”Carol Davila” București
A XIV - a Conferință Științifică Națională a OBBCSSR ”Medicina de laborator - tehnici și/sau diagnostic de laborator?”
10 noiembrie 2018 Rin Grand Hotel București
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Istoric• Antichitate_ Hippocrates, Aretaeus și Galen
”ficatul plin cu vezicule cu lichid” – condiție care ducea la decesul pacientului
• Evul mediu_ 1758 -în prezent 85 de denumiri.
• 1801 Rudolphi, a definit genul Echinococcus
• 1855 au fost descrise două tipuri de hidatide
• 1957 Vogel_demonstrează prin infecții experimentale ciclul bilologic al Echinococcus multilocularis demonstrând existența celei de-a doua specii implicate.
• 1980_ Echinococcus: granulosus, multilocularis, oligarthus șivogeli
• 1990_ secvențe scurte de mtADN (cox1 și nad1)
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
EchinococcusE.granulosus sensu stricto
G1-G3
E. equinus
G4
E.ortleppi
G5
E.canadenșis
G6-G10
E.felidis
E.multilocularis
E.oligarthra
E.vogeli
E.shiquicus
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Încadrare taxonomică
Încrengătura Plathelmintes
Clasa Cestoda
Familia Taeniidae
Genul Echinococcus
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Raspândirea geografică
(după Ito A și col., 2016)
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Stadiul infectant
Stadiul de diagnosticOncosferele eclozează și străbat peretele intestinal.
Chist hidatic în ficat, plamani, etc)
Scolex care se atșează de intestine
Gazda intermediară (ovine, caprine, porcine, etc)
Ingestia chisturilor(în organe)
Gazda definitivă: câinele și alte canidae
Ingestia ouălor (cu fecale)
Ou embrionat (în fecale)
Adult în intestinul subțire
Protoscolex din chist
1. Adult E.g;
2. Ou embrionat;
3. Oncosferele ce străbat peretele intestinal;
4. Chist hidatic în diferite organe;
5. Protoscolex din chist;
6. Scolex care se atașează pe peretele intestinal.
Ciclul biologic
Echinococcus granulosus
Adaptat după:https://et.wikipedia.org/wiki/Fail:CDC_Echinococcus_Life_Cycle.svg
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Ciclul biologic
Echinococcus multilocularis
Adaptat după:Wahlström et al. Acta Veterinaria Scandinavica 2011, 53:9 http://www.actavetscand.com/content/53/1/9
Infecția gazdelor definitive: consumul de rozătoare infectate
Excreția ouălelor prin materiile fecale în mediu
Infecția porcinelor/mistreților: ingerarea ouălor din mediu
Infecția oamenilor: contactul cu câînii infectați
Infecția oamenilor: consumul de fructe de pădure infestate
Infecția rozătoarelor: ingerarea ouălor din mediul inconjuraător
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Echinococoza
Chistică – Echinococcus granulosus Alveolară – Echinococcus multilocularis
După: Eckert J.&Deplazes P.-10.1128/CMR.17.1.107-135.2004. Clin. Microbiol. Rev. 2004, 17(1):107.
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Echinococcoza chistică
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Localizări
Ficat 65%
Plămân 25%
Alte organe 10%
Dupa:Gottstein, 1986OBBCSSR C
ONFERINTA 2
018
Diagnosticul
• Clinic_ anamneza pacientului
• Durere in zona ficatului (localizări hepatice)
• Hepatosplenomegalie
• Icter
• Varsături
• Reacții alergice (produse la fisurarea chisturilor)
• Coma (localizare cerebrală)
Pacienți ASIMPTOMATICI
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Diagnosticul paraclinic
• Hemoleucograma completă
• Parametrii hepatici
• Parametrii renali
NESPECIFICI
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Diagnostic paraclinic specific
• Screening – ELISA
• Confirmare – Western blot
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Diagnostic imagistic
• Radiografia pulmonară
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Diagnostic imagisticEcografia abdominală
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Diagnosticul imagisticCT/RMN
RMNCT
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Studiu retrospectiv01.01.2017 –01.08.2018
Laboratorul Centrului Medical Eco-Para-Diagnostic SRL București
470 analize serologice pentru determinarea anticorpilor specifici IgG anti Echinococcus granulosus
9 teste de viabilitate
9 analize de genotipare
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Metodele utilizate
• ELISA
• WESTERN BLOT
• EXAMEN MICROSCOPIC
• ANALIZE DE BIOLOGIE MOLECULARĂ
• Extracție ADN din membrane proligere
• Amplificare (PCR)
• Secvențiere
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Rezultate
ELISA
• 256
• 82 (32,04%) POZITIVE
• 9 (3,51%) INCERT
• 165 (64,45%) NEGATIV
Western Blot
• 214
• 34 (15,88%) POZITIVE
• 180 (84,12%) NEGATIVE
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Localizările chisturilor
Ficat17/34 – 50%
Plămân3/34 – 8.82%
Muscular1/34 – 2.94%
Alte localizări13/34 – 38.24%
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Test de viabilitate(9 probe)• 8 pozitive
• 1 negativ
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Genotipare (secvențe scurte de ADN mitocondrial_ mtADN_ cox1)
• 9 probe/9
• Echinococcus granulosus sensu stricto
• Genotipul G1
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
Concluzii
Anamneza completă a pacientului este o etapă esențială în despistarea precoce a cât mai multe cazuri;
Diagnosticul = corelație între cel clinic, imagistic și de laborator.
Profilaxia prin:
• Respectarea regulilor esențiale de igienă personală și comunitară;
• Aplicarea tratmentelor antiparazitare corecte, periodic și regulat de către medicii veterinari;
• Educatia medicală este esențială în cunoașterea/popularizarea modalităților de transmitere și prevenție, contribuind semnificativ la reducerea cazurilor de echinococoză.OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8
OBBCSSR CONFERIN
TA 201
8