Determinarea fitosterolilor bioactivi din uleiul de masline

Cuprins:

1. Generalitati ulei de masline2. Sterolii: structura chimica 3. Clasificare steroli 4. Clasificarea tehnicilor cromatografice 5. Cromatografia de lichide: -cromatografia de inalta performanta

Avantaje cuplarii HPLC-MS6. Studiu: Separarea si determinarea sterolilor din uleiul de masline prin

HPLC-MS

1. GENERALITATI

Măslinul este un arbore originar din Siria și zonele de litoral din Turcia, foarte răspândit și în Grecia continentală și în arhipelagul elen. Este considerat "arborele veșnic roditor", fiind un arbore cu o longevitate extraordină, având o uimitoare putere de regenerare, dând mereu rădăcini și lăstari noi.

Genul olea conține în jur de 20 de specii larg răspândite în jurul globului. Sunt pomi mici întâlniți în zonele limitrofe Mării Mediterane, în sudul Africii, în sud-estul Asiei, în estul Australiei. Frunzele măslinilor se mențin verzi pe întreaga durată a anului.Măslinul preferă climate cu ierni blânde și veri toride, se dezvoltă foarte bine pe soluri calcaroase atinse de briza mării.

Uleiul de masline contine polifenoli, vitamine E si alti antioxidanti, substante care constituie conservantii naturali ai uleiului. Antioxidantii diminueaza aparitia peroxizilor. Astfel se incetineste procesul natural de oxidare si rancezirea a uleiului. Polifenolii au un rol foarte important in compozitia uleiului de masline.

Maslinele contin peste 30 de tipuri de polifenoli, insa nivelul acestora scade odata cu “imbatranirea” fructului si apoi cu trecerea timpului.

80% din uleiul de masline este compus din acizi grasi monosaturati, care rezista la oxidare.Acestia determina cresterea colesterolului “bun” (HDL) si la scaderea colesterolului “rau” (LDL), raspunzator pentru intarirea arterelor si cresterea riscului accidentelor vasculare.

Uleiul de masline se poate clasifica in :

Uleiul de masline extra-virgin : cel de calitate superioara, provine din prima presare a maslinelor.Are o aciditate care nu depaseste 0.8% cu un continut scazut de acid oleic.

Uleiul de masline virgin : cel obtinut direct masline exclusive prin mijloace mecanice,cu o aciditate nu mai mica de 2%.

Uleiul de masline normal : extras din pulpa si samburii ramasi dupa a 2-a presare a maslinelor de calitate inferioara.

Uleiul rafinat : fiind considerat ca fiind de o calitate mai slaba decat cel virgin.

2. STEROLII Steridele sunt lipide simple care se gasesc in cantitate mica in toate organismele vegetale si animale. Ele sunt esterii naturali ai acizilor grasi cu sterolii.

STRUCTURA CHIMICASterolii sunt monoalcooli secundari ciclici, care deriva de la o hidrocarbura policiclica, numita steran.Sterolii naturali sunt majoritatea lor de tip trans optic active, lrvogiri cu exceptia coprosterolului care este dextrogir, fiind isomer cis. Sterolii sunt substante cristalizate care au puncte de topire mai ridicate decat gliceridele, variind intre 102-170 °C. Sunt solubili in solventi organic si greu solubili in apa. Acei steroli care au in molecula o legatura dubla dau reactii de aditie halogenii. Sterolii se pot recunoaste, dand reactii de culoare cu acidul sulfuric concentrate, peroxizi in solutie de chloroform. 3.CLASIFICARE

Sterolii se clasifica dupa provenineta in :

Fitosteroli caracteristici plantelor superioare si celor inferioare; Micosteroli caracteristici ciupercilor; Zoosterolilor caracteristici organismelor animale.

FITOSTEROLII-

Fitosterolii se găsesc în cantitate mai mare în plantele superioare, în semințele plantelor oleaginoase, leguminoase și în boabele cerealelor. Cel mai răspândit este sitosterolul care uneori este însoțit de un procent mai mic de stigmasterol. Ei se găsesc în natură sub formă liberă dar și sub formă de fitosteride, glicozide. Ei au importanță în biosinteza hormonilor steroidici dar și a vitaminelor D. Fitosterolii se

găsesc în numeroase plante dar și în semințele unor plante. Se pare că au un rol important în organism prin menținerea nivelului colesterolului la un nivel cât mai mic, mai ales atunci când sunt consumați în cadrul unei alimentații fără colesterol. Inhibă absorbția intestinală a colesterolului; esterii liposolubili (stanoli derivați 5 alfa saturați) au fost introduși pentru scăderea nivelului seric la colesterolului din anii 1990. Inhibiția absorbției intestinale a colesterolului are drept efect stimularea sintezei de colesterol, un factor ce are drept rezultat scăderea nivelului seric al colesterolului cu cel puțin 10% împreună cu fitosterolii. În cadrul tratamentului cu medicațiehipocolesterolemiantă (statine) s-a observat că această medicație combinată cu o dietă bogată în stanoli duce la reducerea nivelului colesterolului și o creștere a fitosterolilor serici.

4.CLASIFICARE TEHNICILOR CROMATOGRAFICE

S-su realizat numeroase variante ale metodei cromatografice, diferind unele de altele in primul rand prin natura fazei mobile, dar si a celei stationare.

Cromatografia de lichide (LC): Termenul de cromatografie de lichide este utilizat pentru a denumi o gama extinsa de sisteme cromatografice care au în comun faptul ca utilizeaza o faza mobila lichida.Comparativ cu cromatografia de gaze, cea de lichide are avantajul ca permite si analizarea probelor greu volatile sau instabile termic, iar faptul ca si faza mobila participa la separare ofera posibilitati suplimentare pentru realizarea unor separari eficiente.

In cadrul cromatografiei de lichide se mai face distinctia intre cromatografia pe coloana deschisa si cea pe coloana inchisa.Pe de alta parte , in cadrul fiecareia dintre acestea, distingem mai multe variante.

In cadrul cromatografiei de lichide( LC) se disting, in functie de mecanismele de separare: -cromatografia de adsorbtie

-cromatografia ionca

-cromatografia de inalta performanta

-cromatografia pe hartie

- cromatografia pe strat subtire

Toate acestea se caracterizeaza prin simplitate, accesibilitate si prêt de cost scazut, dar totodata si prin performante ceva mai slabe decat cromatografia de lichide pe coloana sub presiune ridicata(HPLC) variant moderna a LC.

COMPLETARE.DESEN. GUTT..MOD FUNCTIONARE @@@

Cromatografia de lichide de inalta performanta (HPLC)

Cromatografia de lichide de inalta performanta(HPLC) acopera, in proportie aprox 80%, analiza substantelor molecular: organice, organo-metalice si anorganice inclusive compusii foarte polari sau labile termic, precum si compusii cu masa molecular mare.

 HPLC folosește o coloană încărcată cu diferite materiale (faza staționară), o pompă ce împinge faza(ele) mobilă(e) prin coloana și un detector care arată timpurile de retenție ale moleculelor. Timpul de retenție depinde de interacțiunea dintre faza staționară, moleculele de analizat și solvenții utilizați.

Analiza

Proba de analizat este introdusă în volum mic în fluxul fazei mobile. Trecerea analitului prin coloană este încetinită de prezența unor interacții de natură chimică sau fizică in faza staționară, acestea trecând de a lungul coloanei. Totalul încetinirilor depinde de fiecare analit în parte, faza staționară și compoziția fazei mobile.

Timpul la care un analit specific eluează (iese afară din coloană) este numit timp de retenție; timpul de retenție sub condiții particulare este considerat o caracteristică unică de identificare a analitului dat. Folosirea unei coloane încărcată cu particule mici (care creează o presiune de împingere mai mare) crește viteza lineară, acordând compușilor timpul minim să difuzezeprin coloană, conducând astfel la o îmbunătățire a rezoluției cromatogramei rezultate. 

Solvenții comuni care se utilizează includ orice combinație miscibilă cu apa sau lichide organice variate (de obicei metanol sau acetonitril). Apa poate conține soluții tampon sau săruri care ajută la separarea componenților de analizat sau componenți ca acid trifloroacetic care acționează ca agent de împerechere ionică.

Cuplajul cu spectrometria de masa a transformat, in ultimul timp, aceasta metoda in principalul mijloc de analiza a compusilor molecular naturali sau sintetici, constituind unul din pilonii pe care se sprijina chimia sintetica actual sip e care s-a

dezvoltat biochimia si biotehnologia moderna.

Schema bloc a unui cromatograf HPLC :

Avantajele cuplarii HPLC-MS

Cromatografia este o metoda de achizitie simultana atat a timpilor de retentive, cat si a maselor molecular ale componentilor din amestec;

Nu exista degradare termica

Analiza este mai rapida

Se pot analiza cantitati foarte mici de proba, avand o sensibilitate inalta

Se pot obtine informatii prin LC/MS/MS.

Masa molecular medie sau indicia de polidispersitate pot fi utilizate pentru a verifica procedurile de sinteza, in studiul mecanismelor de degradare, determinare aditivilor si a impuritatilor.

Determinarea maei molecular absolute a lantuilor macromoleculare spre deosebire de tehnicile cromatografice, precum SEC care frunizeaza valori relative.

6.STUDIU: Determinare fitosterolilor bioactivi din uleiul de masline

SOLVENTPOMPA INJECTOR COLOANA DETECTOR CALCULA

TOR