Cancerul de col uterin, cu o incidenta anuala de 500000 de cazuri si o mortalitate de aproximativ 50%, reprezinta a

doua cauza de deces la femei dupa cancerul mamar. Cel mai important factor de risc in dezvoltarea cancerului

cervical este infectia genitala cu virusul papilomatozei umane (HPV). Mai mult de 70% dintre tumorile maligne

sunt provocate de genotipurile virale 16, 18 si aproximativ 12% de genotipurile 31, 33, 51 si 45. Avand in vedere

implicatiile infectiei cu HPV, se impune detectarea cu acuratete a ADN HPV.

DETECTIA SI GENOTIPAREA HPV PRIN

TEHNOLOGIA DPO SI ELECTROFOREZA

CAPILARA

Cristina Dragomir, Madalina Badila, Lorand Savu

Genetic Lab, Bdul Ghencea nr. 43B, Sector 6, Bucuresti

Pentru detectia HPV, ADN izolat din celule endocervicale a fost amplificat printr-o reactie PCR multiplex folosind

un set de primeri DPO (Dual Priming Oligonucleotide) marcati fluorescent (Seeplex® HPV18 ASE Genotyping

Kit, Seegene) specifici pentru tipurile HPV cu risc oncogenic crescut - 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59,

68 si respectiv pentru tipurile HPV cu risc oncogenic scazut - 6, 11, 42, 43, 44. Ampliconii fluorescenti obtinuti sunt

analizati prin electroforeza capilara (ABI 310 Genetic Analyzer). Spre deosebire de reactiile PCR multiplex in

care sunt folositi primeri conventionali, primerii DPO, ce constau in doua regiuni separate de atasare a primerilor

legate printr-un lant de polidezoxinozina, previn atasarea si extensia nespecifica, evitandu-se rezultatele fals

pozitive.

Au fost testate 100 paciente. In urma testarii 25%

dintre paciente au prezentat HPV cu risc oncogenic

crescut (in special genotipurile 16, 31, 33, 52 sau 51),

7% au prezentat HPV cu risc oncogenic scazut (in

special genotipul 6). La 8% si 1% dintre paciente s-au

detectat cate doua si respectiv trei genotipuri HPV.

Introducere

Materiale si metode

Concluzii

Rezultate

Introducerea sistemului de primeri DPO creste specificitatea si sensibilitatea detectiei ADN HPV. In plus,

introducerea automatizarii prin electroforeza capilara diminueaza riscul contaminarii probelor si ofera

posibilitatea procesarii unui numar mare de probe intr-un timp scurt.

Fig.1 Genotipuri HPV