Colorarea simpl

Determinarea microbiologiei la bere

Colorarea simpl Fi de lucru

1. Dezinfectarea lamei- se terge lama pe ambele fee, cu o bucat de vat mbibat n alcool.

2. Sterilizarea lamei- se trece de cteva ori, pe ambele fee, lama prin flacra becului de gaz.

3. Recoltarea probei- mediile solide se recolteaz cu ansa sterilizat. n prealabil, n flacra becului de gaz pn la rou:- mediile lichide se recolteaz cu pipeta Pasteur innd-o ntre degetul mare i mijlociu al minii drepte, cu arttorul aplicat pe orificiul superior, acoperit cu vat.

4. Depunerea / etalarea probei pe lam.- pentru mediile solide n centrul lamei sterilizate, aezate n plan orizontal, se depune cu pipeta Pasteur 1 - 2 picuturi ap distilat / ser fiziologic steril; se depune uniform coninutul ansei, n mediul de dispersie; etalarea (ntinderea preparatului ntr-un strat ct mai uniform i mai subire) se realizeaz cu firul buclat;

- pentru mediile lichide: n centrul lamei sterilizate, aezate n plan orizontal, se depune cu pipeta Pasteur 1 - 2 picturi prob .

5. Uscarea / fixarea preparatelor- uscarea se realizeaz prin meninerea lamei cu preparat deasupra conului flcrii becului de gaz, la o distan de 10 - 15 cm sau prin amplasarea lamelor cu praparat pe un stativ din aluminiu conectat la o surs electric, cu efect de nclzire (prin ndeprtarea apei se realizeaz imobilizarea celulelor de studiat pe suprafaa lamei port-obiect);

- fixarea se realizeaz prin trecerea lamei cu preparat uscat (de 5-7 ori) prin conul flcrii becului de gaz (are loc o omorre a bacteriilor prin inactivarea termic a componentelor proteice ale enzimelor).

6. Colorarea- se depune pe suprafaa frotiului (preparatul uscat i fixat) 2-3 picturi de colorant i se las s acioneze 2 minute pentru cristal violet, albastru de metilen, violet de genian sau 30 secunde colorantul fuxin;

- se scurge colorantul;

- se spal preparatul n jet subire de ap;

- se zvnt ntre dou fii de hrtie e filtru, prin presare uoar;

- se adaug 2 picturi de ulei de cedru.

7. Fixarea pe platin. Prinderea imaginii. Examinarea la microscop

- se fixeaz preparatul pe platin;

- se regleaz poziia preparatului pe platin;

- se fixeaz obiectivul de imersie (90, 1 OOx), prin rotirtea discului revolver;

- se regleaz fluxul de lumin, cu ajutorul condensorului;

- se coboar obiectivul, pn cnd acesta atinge uor preparatul (privind lateral), prin manevrarea vizei macrometrice;

- se prinde" imaginea, privind prin oculare i rotind uor viza macrometric, n sensul care determin ridicarea obiectivului;

- se regleaz claritatea imaginii, privind prin oculare i acionnd viza micrometric.