antibiotic e

Dr. Stanca Lucia PandreaDr. Stanca Lucia Pandrea

AntibioticeAntibiotice

AntibiozaAntibioza

Antibioza (anti-Antibioza (anti-îîmpotrivmpotrivăă, bios-via, bios-viaţăţă)) Francois Vuillemin – 1889Francois Vuillemin – 1889 Definirea acDefinirea acţţiunii distructive a unei iunii distructive a unei

vievieţţuitoare asupra alteia, cuitoare asupra alteia, câând sunt nd sunt îîn n contact directcontact direct

AntibioticAntibiotic

Alexander Fleming-1929-inhibarea Alexander Fleming-1929-inhibarea cresterii unei culturi de stafilococ de cresterii unei culturi de stafilococ de catre catre Penicillium notatumPenicillium notatum

PenicillinPenicillin PenicilliumPenicillium chrysogenumchrysogenum CephalosporinCephalosporin CephalosporiumCephalosporium acremoniumacremonium GriseofulvinGriseofulvin PenicilliumPenicillium griseofulvumgriseofulvum BacitracinBacitracin Bacillus subtilisBacillus subtilis Polymyxin BPolymyxin B Bacillus polymyxaBacillus polymyxa AmphotericinAmphotericin S Streptomyces nodosutreptomyces nodosus s ErythromycinErythromycin Streptomyces erythreusStreptomyces erythreus NeomycinNeomycin Streptomyces fradiaeStreptomyces fradiae StreptomycinStreptomycin Streptomyces griseusStreptomyces griseus TetracyclineTetracycline Streptomyces rimosusStreptomyces rimosus VancomyciVancomycinn Streptomyces orientalisStreptomyces orientalis GentamicinGentamicin Micromonospora purpureaMicromonospora purpurea RifamycinRifamycin StreptomycesStreptomyces mediterraneimediterranei

Antibiotice: substante de natura Antibiotice: substante de natura microbiana, metaboliti ai unor fungi sau microbiana, metaboliti ai unor fungi sau bacterii, capabili sa opreasca sau sa bacterii, capabili sa opreasca sau sa distruga microorganismele, patogene fara distruga microorganismele, patogene fara a avea efect toxic asupra organismului a avea efect toxic asupra organismului gazdagazda

Chimioterapice:substante preparate Chimioterapice:substante preparate sintetic care exercita aceleasi actiuni sintetic care exercita aceleasi actiuni asupra microorganismelor ca si asupra microorganismelor ca si antibioticeleantibioticele

Substante cu actiune antimicrobiana, Substante cu actiune antimicrobiana, antibiotice sau chimioterapice; folosite in antibiotice sau chimioterapice; folosite in terapeutica bolilor infectioase= substante terapeutica bolilor infectioase= substante antimicrobieneantimicrobiene

Clasificare antibioticeClasificare antibiotice

Originea substantelorOriginea substantelor Felul actiuniiFelul actiunii Spectrul de actiuneSpectrul de actiune Structura chimicaStructura chimica Mecanismul de actiuneMecanismul de actiune

1.Originea substantelor1.Originea substantelor

Compusi naturali ai unor fungi: Compusi naturali ai unor fungi: penicilina, penicilina, kanamicina, gentamicina, eritomicinakanamicina, gentamicina, eritomicina

Compusi naturali ai unor bacterii: Compusi naturali ai unor bacterii: polimixine, bacitracinapolimixine, bacitracina

Compusi de semisintezaCompusi de semisinteza::peniciline cu peniciline cu spectru larg, cefalosporine, tetraciclinaspectru larg, cefalosporine, tetraciclina

Compusi de sinteza( Compusi de sinteza( cloramfenicolcloramfenicol))

2.Felul actiunii2.Felul actiunii

Substante Substante bactericidebactericide: produc moartea : produc moartea bacteriilorbacteriilor

Bactericide absoluteBactericide absolute: actioneaza asupra : actioneaza asupra bacteriilor in orice faza a dezvoltarii bacteriilor in orice faza a dezvoltarii lor( lor( polimixine,, bacitracinapolimixine,, bacitracina))

Bactericide asupra Bactericide asupra bacteriilor in cresterebacteriilor in crestere ((peniciline, cefalosporinepeniciline, cefalosporine))

2.Felul ac2.Felul acţţiuniiiunii

BacteriostaticeBacteriostatice-inhiba multiplicarea -inhiba multiplicarea bacteriilor. In bacteriilor. In vivovivo bacteriile sunt distruse bacteriile sunt distruse prin interventia mecanismelor de aparare prin interventia mecanismelor de aparare ale organismului( tetraciline, cloramfenicol, ale organismului( tetraciline, cloramfenicol, eritromicina, lincomicina)eritromicina, lincomicina)

3.Spectrul de actiune3.Spectrul de actiune

Ingust tip penicilina-Ingust tip penicilina- active pe coci active pe coci GramGram pozitivipozitivi si si negativinegativi, pe bacili Gram , pe bacili Gram pozitivipozitivi (penicilina,eritromicina, vancomicina, (penicilina,eritromicina, vancomicina, lincomicina lincomicina

ingust tip gentamicina- ingust tip gentamicina- cu actiune pe cocii cu actiune pe cocii Gram Gram pozitivipozitivi si si negativi, negativi, pe bacili Gram pe bacili Gram negativinegativi

3.Spectrul de actiune3.Spectrul de actiune

Larg- active pe cocii si bacili Gram Larg- active pe cocii si bacili Gram pozitivipozitivi sisi negativi,negativi,spirochete, ricketsii,chlamidii spirochete, ricketsii,chlamidii (tetracicline, ampicilina si penicilinele (tetracicline, ampicilina si penicilinele asemanatoare, cefalosporine, chinolone).asemanatoare, cefalosporine, chinolone).

4.Structura chimica4.Structura chimica

Antibiotice beta-lactam:peniciline, cefalopsorineAntibiotice beta-lactam:peniciline, cefalopsorine Aminoglicozide:streptomicina, gentamiicna, Aminoglicozide:streptomicina, gentamiicna,

kanamicina, amikacinakanamicina, amikacina Tetracicline;teraciclina, doxixlina, minociclinaTetracicline;teraciclina, doxixlina, minociclina Macrolide:eritromicina, nistatin, amfotericinaMacrolide:eritromicina, nistatin, amfotericina Lincosamide;lincomicna, clindamicinaLincosamide;lincomicna, clindamicina Ansamicine;rifampicinaAnsamicine;rifampicina

4.Structura chimica4.Structura chimica

Polipeptide:polimixina, bacitracinaPolipeptide:polimixina, bacitracina SulfamideSulfamide Chinolone;acid Chinolone;acid

nalidixic,ofloxacina,norfloxacina, nalidixic,ofloxacina,norfloxacina, ciprofloxacinaciprofloxacina

Imidazolii;clotrimoxazolImidazolii;clotrimoxazol Neincadrate:griseofulvina, nitrofuraniNeincadrate:griseofulvina, nitrofurani

Clasificare antibiotice beta-lactamClasificare antibiotice beta-lactam

PenicilinePeniciline CefalosporineCefalosporine CarbapenemCarbapenem MonobactamiMonobactami

PenicilinePeniciline

Naturale-benzilpenicilina(Penicilina G), Naturale-benzilpenicilina(Penicilina G), benzatilpenicilina(Moldamin),procainpenicibenzatilpenicilina(Moldamin),procainpenicilina(Efitard),fenoximetilpenicina(Penicilina lina(Efitard),fenoximetilpenicina(Penicilina V)V)

Rezistente la beta-Rezistente la beta-lactamaze(meticilina,oxacilina,nafcilina, lactamaze(meticilina,oxacilina,nafcilina, cloxacilina)cloxacilina)

Aminopeniciline(ampicilina,amoxicilina)Aminopeniciline(ampicilina,amoxicilina)

PenicilinePeniciline

Carboxipeniciline(carbenicilina, ticarcilina)Carboxipeniciline(carbenicilina, ticarcilina) Ureidopeniciline(piperacilina, mezlocilina)Ureidopeniciline(piperacilina, mezlocilina) AmdinopenicilineAmdinopeniciline Combinatii cu inhibitori de beta-lactamaze:Combinatii cu inhibitori de beta-lactamaze:

-amoxicilina+acid clavulanic-amoxicilina+acid clavulanic

-ampicilina+sulbactam-ampicilina+sulbactam

-ticarcilina+clavulanat-ticarcilina+clavulanat

CefalosporineCefalosporine

GEN. I:cefalotin, cefalexinGEN. I:cefalotin, cefalexin GEN.II:cefaclor, cefamandol, cefuroxim, GEN.II:cefaclor, cefamandol, cefuroxim,

cefoxitincefoxitin GEN.III:cefotaxim,ceftriaxona, GEN.III:cefotaxim,ceftriaxona,

cefoperazona, ceftazidimcefoperazona, ceftazidim GEN.IV:cefepimGEN.IV:cefepim GEN. V:ceftarolinGEN. V:ceftarolin

5.Mecanismul de actiune5.Mecanismul de actiune

Inhibitia sintezei peretelui celularInhibitia sintezei peretelui celular Alterarea permeabilitatii sau inhibitia Alterarea permeabilitatii sau inhibitia

transportului activ prin mrmbrana celularatransportului activ prin mrmbrana celulara Inhibarea sintezei proteinelorInhibarea sintezei proteinelor Inhibarea sintezei acizilor nucleiciInhibarea sintezei acizilor nucleici

Condiţii pentru un AB să fie activCondiţii pentru un AB să fie activ

să ajungă la bacteriesă ajungă la bacterie să pătrundă în bacteriesă pătrundă în bacterie – – să fie permeabilă pentru antibiotice să fie permeabilă pentru antibiotice – – să dispună de un transportor pentru să dispună de un transportor pentru

antibioticul respectivantibioticul respectiv să atingă ţinta de acţiunesă atingă ţinta de acţiune să realizeze în bacterie o concentraţie să realizeze în bacterie o concentraţie

optimă, care săoptimă, care să inactiveze reversibil sau inactiveze reversibil sau ireversibil ţinta de acţiuneireversibil ţinta de acţiune

Ţinte ale antibioticelorŢinte ale antibioticelor

Perete celularPerete celular::

– – beta-beta- Lactamine Lactamine

– – Glicopeptide: Vancomicina,TeicoplaninaGlicopeptide: Vancomicina,Teicoplanina

----Fosfomicina, Cicloserina, BacitracinaFosfomicina, Cicloserina, Bacitracina Membrana citoplasmaticMembrana citoplasmaticaa: :

– – Polipeptide ciclice: ex. Colistin, polimixina B Polipeptide ciclice: ex. Colistin, polimixina B

– – Gramicidina, Tirociclina, Defensine, L- Gramicidina, Tirociclina, Defensine, L- Antibiotice Antibiotice

Ţinte ale antibioticelorŢinte ale antibioticelor Acizi nucleiciAcizi nucleici – – QuinoloneQuinolone – – imimidazoliidazoli – – FuraniFurani – – RifamicineRifamicine Ribozomi:Ribozomi: AB care inhibă sinteza proteică AB care inhibă sinteza proteică – – --30 S:30 S:Aminoglicozide,Tetracicline, Spectinomicine Aminoglicozide,Tetracicline, Spectinomicine --50 S50 S:grupul MLS ,Fenicoli:grupul MLS ,Fenicoli--Macrolide, Lincosamide, Sinergistine Macrolide, Lincosamide, Sinergistine --Acid fusidic: factorul de elongare (EFAcid fusidic: factorul de elongare (EF))

Ţinte ale antibioticelor Ţinte ale antibioticelor IInhibǎ sinteza acidului folicnhibǎ sinteza acidului folic::••DiaminopirimidineDiaminopirimidine••inhiba folat reductaza: Trimetoprim inhiba folat reductaza: Trimetoprim ••PirimetaminPirimetamin SulfonamideSulfonamide ••Inhiba folat sintetaza: SulfametoxazolInhiba folat sintetaza: SulfametoxazolAsocierea Trimetoprim + Sulfametoxazol = CAsocierea Trimetoprim + Sulfametoxazol = Coo--

trimoxazol(Biseptol) trimoxazol(Biseptol) – – Sulfone: DapsoneSulfone: Dapsone – – PAS (acid paraaminosalicilic)PAS (acid paraaminosalicilic)

AB AB cu tinta :cu tinta :peretele celular -peretele celular -beta-beta- Lactamine Lactamine

inhibă sinteza peptidoglicanului în faza inhibă sinteza peptidoglicanului în faza de polimerizare.de polimerizare.

ţintă de acţiunţintă de acţiunee::PBPPBP-uri-uri

– – inhibată funcţia enzimatică : inhibată funcţia enzimatică : transpeptidarea,transglicozidarea, transpeptidarea,transglicozidarea, carboxipeptidarecarboxipeptidare

Rezistenţa bacteriilor la antibiotice Rezistenţa bacteriilor la antibiotice

Bacterii rezistente = bacteriile care Bacterii rezistente = bacteriile care supravieţuiescla concentraţii mari de supravieţuiescla concentraţii mari de antibiotic, mult mai mariantibiotic, mult mai mari de decât cele din cât cele din organismul umanorganismul uman

RezistenţaRezistenţa NaturalăNaturală DobândităDobândită

Rezistenţa bacteriilor la antibioticeRezistenţa bacteriilor la antibiotice

NaturalăNaturală - caracter de- caracter de speciespecie 1. Abse1. Absennţa ţintei deţa ţintei de acţiune acţiune – – Mycoplasma reMycoplasma rezzistentăistentă lla a β-β-

lactaminlactamine e NU are perete NU are perete celulacelularr

2.2.iimpermeabiltateampermeabiltatea bacteriei bacteriei pentrupentru antibiotiantibioticc

– – Ex.MycobacteriuEx.Mycobacteriumm

Dobândită:Dobândită: când o tulpinăcând o tulpină bacteriană bacteriană

anterior sensibilanterior sensibil la un anumit la un anumit antibioticantibiotic devine rezistentădevine rezistentă

Caracter de tulpinCaracter de tulpinaa Ex.Staphylococcus aureus Ex.Staphylococcus aureus – – anterior sensibil la Peniciliă,anterior sensibil la Peniciliă, – – În prezent90% dintre În prezent90% dintre

tulpinile detulpinile de SS..aaureusureus== tulpini tulpini rezistente larezistente la PenicilinPenicilinaa

Mecanisme geneticeMecanisme genetice

RezistenţaRezistenţa apare indiferent de antibioticapare indiferent de antibiotic RRolul antibioticelor :selecţie a tulpinilor olul antibioticelor :selecţie a tulpinilor

rezistenterezistente MMecanismeecanisme cromozomialecromozomiale; mutatii; mutatii MecanismeMecanisme extraextra-cromozomiale – -cromozomiale – AchiziţiaAchiziţia de de materialmaterial genetic genetic

extracromozomial – Ex.” plasmide R “extracromozomial – Ex.” plasmide R “

MecanismeMecanisme

modificarea permeabilităţiimodificarea permeabilităţii bacterienebacteriene modificarea transportulumodificarea transportului i antibioticului inantibioticului in

bacteriebacterie modificareamodificarea ţinteţinteii eenzime de inactivare a antibioticuluinzime de inactivare a antibioticului Activarea pompelor de efluxActivarea pompelor de eflux CombinaţiiCombinaţii ale acestor mecanismeale acestor mecanisme

ANTIBIOGRAMAANTIBIOGRAMA

Tipuri de antibiogrameTipuri de antibiograme

DEFINITIEDEFINITIE

Prin antibiograma se intelege testarea Prin antibiograma se intelege testarea sensibilitatii unei tulpini bacteriene izolate dintr-sensibilitatii unei tulpini bacteriene izolate dintr-un produs patologic fata de diverse antibiotice. un produs patologic fata de diverse antibiotice.

Astfel se caracterizeaza capacitatea acestora de Astfel se caracterizeaza capacitatea acestora de a opri dezvoltarea microbiana si da informatii a opri dezvoltarea microbiana si da informatii pentru selectarea celui sau celor mai active pentru selectarea celui sau celor mai active antibiotice fata de microorganismul testat. antibiotice fata de microorganismul testat.

Termenii de antibiotic si chimioterapic se Termenii de antibiotic si chimioterapic se folosesc ca sinonimi. folosesc ca sinonimi.

Introducerea unui antibiotic in terapie este Introducerea unui antibiotic in terapie este o mare responsabilitate medicala, cerind o mare responsabilitate medicala, cerind respectarea unor conditii bine determinate:respectarea unor conditii bine determinate:

1.1. Antibiograma se face dupa stabilirea Antibiograma se face dupa stabilirea diagnosticului etiologic, prin izolarea in cultura diagnosticului etiologic, prin izolarea in cultura pura si prin identificarea agentului patogen. pura si prin identificarea agentului patogen.

In cazuri de extrema urgenta, se poate In cazuri de extrema urgenta, se poate administra un antibiotic (inainte de efectuarea administra un antibiotic (inainte de efectuarea antibiogramei) dar numai dupa recoltarea antibiogramei) dar numai dupa recoltarea produselor patologice.produselor patologice.

2. Tratamentul se realizeaza in functie de 2. Tratamentul se realizeaza in functie de rezultatele date de antibiograma, alegind rezultatele date de antibiograma, alegind antibioticul cel mai eficace, adica fata de antibioticul cel mai eficace, adica fata de care bacteria izolata are cea mai mare care bacteria izolata are cea mai mare sensibilitate.sensibilitate.

3. Antibiograma trebuie repetata daca 3. Antibiograma trebuie repetata daca tratamentul cu antibiotice este de durata mai tratamentul cu antibiotice este de durata mai lunga; aceasta deoarece agentul patogen lunga; aceasta deoarece agentul patogen poate sa cistige rezistenta fata de antibioticul poate sa cistige rezistenta fata de antibioticul utilizat.utilizat.

Apoi in cursul tratamentului datorita Apoi in cursul tratamentului datorita dezechilibrului din populatiile dezechilibrului din populatiile microbiocenozelor, poate sa se produca o microbiocenozelor, poate sa se produca o infectie supraadaugata cu o bacterie din infectie supraadaugata cu o bacterie din aceste microbiocenoze.aceste microbiocenoze.

Principiul antibiogramei consta in capacitatea Principiul antibiogramei consta in capacitatea antibioticelor de a impiedica multiplicarea antibioticelor de a impiedica multiplicarea bacteriana, fenomen cunoscut ca efect bacteriana, fenomen cunoscut ca efect bacteriostatic.bacteriostatic.

Unele antibiotice au in anumite concentratii si Unele antibiotice au in anumite concentratii si proprietatea de a omori bacteriile: efect proprietatea de a omori bacteriile: efect bactericid.bactericid.

Metode folosite pentru testarea Metode folosite pentru testarea sensibilitatii in vitro la antibioticesensibilitatii in vitro la antibiotice

metode calitative metode calitative metoda difuzimetrica Kirby Bauer - metoda difuzimetrica Kirby Bauer - clasicaclasica metoda cu antibiotic incorporat in mediu metoda cu antibiotic incorporat in mediu

semisolid – semisolid – kit-ul comercial ATBkit-ul comercial ATB Biomerieux, Biomerieux, Franta - Franta - modernamoderna

metode cantitativemetode cantitative metoda dilutiilor in mediu lichid - metoda dilutiilor in mediu lichid - clasicaclasica metoda Etest – AB BIODISK , Suedia – metoda Etest – AB BIODISK , Suedia –

modernamoderna

Metoda difuzimetricaMetoda difuzimetrica(Kirby-(Kirby-Bauer)Bauer)

Aceasta se efectueaza pe medii solide, in placi Petri, pe Aceasta se efectueaza pe medii solide, in placi Petri, pe care s-a insamintat in pinza cultura bacteriana; apoi pe care s-a insamintat in pinza cultura bacteriana; apoi pe suprafata mediului se dispun discuri cu antibiotice astfel suprafata mediului se dispun discuri cu antibiotice astfel ca in jurul acestora se va realiza un gradient de ca in jurul acestora se va realiza un gradient de concentratie prin difuziunea locala a antibioticului ( in concentratie prin difuziunea locala a antibioticului ( in imediata vecinatate a discului realizindu-se o imediata vecinatate a discului realizindu-se o concentratie mai mare de antibiotic care descreste pe concentratie mai mare de antibiotic care descreste pe masura indepartarii de acesta ).masura indepartarii de acesta ).

Metoda difuzimetricaMetoda difuzimetrica(Kirby-(Kirby-Bauer)Bauer)

Metoda difuzimetrica, cu toate ca nu Metoda difuzimetrica, cu toate ca nu stabileste concentratia minima infibitorie stabileste concentratia minima infibitorie (CMI), da informatii pretioase asupra (CMI), da informatii pretioase asupra sensibilitatii speciei testate fata de sensibilitatii speciei testate fata de antibioticele utilizate si este folosita mai antibioticele utilizate si este folosita mai frecvent in laboratorele clinice.frecvent in laboratorele clinice.

Tehnica de lucruTehnica de lucru Mediul de cultura indicat este geloza Müller-Mediul de cultura indicat este geloza Müller-

Hinton deoarece are o valoare nutritiva care Hinton deoarece are o valoare nutritiva care permite dezvoltarea optima a unei mari varietati permite dezvoltarea optima a unei mari varietati de bacterii si nu contine inhibitori ai actiunii unor de bacterii si nu contine inhibitori ai actiunii unor antibiotice. antibiotice.

Pentru bacterii cu necesitati de cultura speciale, Pentru bacterii cu necesitati de cultura speciale, se utilizeaza medii adecvate ( de ex. pentru se utilizeaza medii adecvate ( de ex. pentru Streptococcus pyogenes se foloseste geloza Streptococcus pyogenes se foloseste geloza singe ).singe ).

Tehnica de lucruTehnica de lucru

Coloniile izolate (5 colonii) obtinute din produsul Coloniile izolate (5 colonii) obtinute din produsul patologic, se insaminteaza in bulion, care se patologic, se insaminteaza in bulion, care se incubeaza la 37 °C ( ~ 5-10 min.), se determina incubeaza la 37 °C ( ~ 5-10 min.), se determina turbiditatea culturii corespunzatoare etalonului turbiditatea culturii corespunzatoare etalonului 0,5 McFarland0,5 McFarland

( cu ajutorul scariiMcFarland cu sulfat de bariu ( cu ajutorul scariiMcFarland cu sulfat de bariu sau automat pe densitometru ). sau automat pe densitometru ).

Tehnica de lucruTehnica de lucru Se insaminteaza placile in maxim 15 min. de la Se insaminteaza placile in maxim 15 min. de la

etalonare ; se lasa placa insamintata 3-5 min. etalonare ; se lasa placa insamintata 3-5 min. (niciodata mai mult de 15 min.) pentru adsorbtia (niciodata mai mult de 15 min.) pentru adsorbtia inoculului. inoculului.

Se depun discurile cu substante antibicrobiene Se depun discurile cu substante antibicrobiene la distanta de minimum 15 mm de marginea la distanta de minimum 15 mm de marginea placii si 30 mm intre centrele a doua discuri placii si 30 mm intre centrele a doua discuri vecine folosind o pensa sau, mai bine un vecine folosind o pensa sau, mai bine un dispersor automat de discuri.dispersor automat de discuri.


Se incubeaza placile la 37° C pentru 16-18 Se incubeaza placile la 37° C pentru 16-18 ore. ore.

Control de calitate : testeaza pe alta placa, Control de calitate : testeaza pe alta placa, in aceleasi conditii , tulpina de referinta in aceleasi conditii , tulpina de referinta adecvata. adecvata.

Dispersor de discuri pentru antibiograme, tuburi cu discuri Dispersor de discuri pentru antibiograme, tuburi cu discuri impregnate cu antibiotice in diferite concentratii, placa cu agar impregnate cu antibiotice in diferite concentratii, placa cu agar

Müller-Hinton pentru realizarea antibiogramei difuzimetriceMüller-Hinton pentru realizarea antibiogramei difuzimetrice

Citirea si interpretareaCitirea si interpretarea

Se masoara cu sublerul sau cu rigla gradata in Se masoara cu sublerul sau cu rigla gradata in mm , diametrul zonelor de inhibitie completa , in mm , diametrul zonelor de inhibitie completa , in lumina reflectata, pe fond negru mat. lumina reflectata, pe fond negru mat.

In cazul mediilor transparente se masoara pe In cazul mediilor transparente se masoara pe spatele placilor, iar in cazul mediilor cu singe pe spatele placilor, iar in cazul mediilor cu singe pe suprafata agarului. suprafata agarului.

Antibiograme pe mediu Antibiograme pe mediu Müller-HintonMüller-Hinton

Antibiograma pe geloza singeAntibiograma pe geloza singe

Aspectul Aspectul Zonei de Zonei de InhibitieInhibitie trebuie sa fie trebuie sa fie clar si cu contur net. clar si cu contur net.

In situatia in care se In situatia in care se observa chiar si o observa chiar si o singura colonie in singura colonie in interiorul zonei de interiorul zonei de inhibitie, se va inhibitie, se va considera rezistenta la considera rezistenta la acel antibiotic, acel antibiotic, indiferent de diametrul indiferent de diametrul zonei de inhibitie (vezi zonei de inhibitie (vezi figura )figura )

In caz de urgenta , se poate citi antibiograma In caz de urgenta , se poate citi antibiograma dupa 5-6 ore de incubare, cu conditia verificarii dupa 5-6 ore de incubare, cu conditia verificarii diametrelor si la 16-18 ore. diametrelor si la 16-18 ore.

Se verifica daca diametrele zonelor de inhibitie Se verifica daca diametrele zonelor de inhibitie ale fiecarei substante antimicrobiene sint ale fiecarei substante antimicrobiene sint cuprinse in limitele variatiei admise conform cuprinse in limitele variatiei admise conform tabelelor de interpretare furnizate impreuna cu tabelelor de interpretare furnizate impreuna cu discurile.discurile.

INTERPRETAREINTERPRETARE

Se interpreteaza astfel : Sensibil SSe interpreteaza astfel : Sensibil S Intermediar IIntermediar I Rezistent RRezistent R in functie de valorile din tabelele de interpretare. in functie de valorile din tabelele de interpretare.

Metoda cu antibiotic incorporat in mediu Metoda cu antibiotic incorporat in mediu semisolid – semisolid – kit-ul comercial ATBkit-ul comercial ATB Biomerieux, Biomerieux,

FrantaFranta

PrincipiuPrincipiu Galeria ATBGaleria ATB permite determinarea sensibilităţii permite determinarea sensibilităţii

microbiene la un set de agenti antibacterieni / microbiene la un set de agenti antibacterieni / antifungici , incorporate într-un mediu semisolid. Este antifungici , incorporate într-un mediu semisolid. Este alcătuită din 16 perechi de godeuri, din care 2/4 nu alcătuită din 16 perechi de godeuri, din care 2/4 nu conţin antibiotice/antifungice şi sunt martori de conţin antibiotice/antifungice şi sunt martori de creştere. creştere.

Celelalte perechi de godeuri conţin diferite antibiotice Celelalte perechi de godeuri conţin diferite antibiotice în cite două concentraţii (în cite două concentraţii (cc = concentratie mai mica = concentratie mai mica şi şi CC = concentratie mai mare) pentru a putea = concentratie mai mare) pentru a putea eticheta fiecare tulpină testată ca fiind sensibilă, eticheta fiecare tulpină testată ca fiind sensibilă, intermediară sau rezistentă.intermediară sau rezistentă.

Metoda cu antibiotic incorporat in mediu Metoda cu antibiotic incorporat in mediu semisolid – semisolid – kit-ul comercial ATBkit-ul comercial ATB Biomerieux, Biomerieux,

FrantaFranta

- Din tulpina de testat este preparată o suspensie care Din tulpina de testat este preparată o suspensie care este transferată în mediul de cultură cu care este este transferată în mediul de cultură cu care este inoculată galeria ATB. inoculată galeria ATB.

- Rezultatele se citesc vizual sau automat dupa 24-48 Rezultatele se citesc vizual sau automat dupa 24-48 ore de incubare la 37ore de incubare la 37C.C.

Citire si InterpretareCitire si Interpretare- Dacă nu există creştere la nici o concentraţie - Dacă nu există creştere la nici o concentraţie

înseamnă tulpină sensibilă, daca exista creştere înseamnă tulpină sensibilă, daca exista creştere numai în godeul cu concentraţia mai mică numai în godeul cu concentraţia mai mică cc înseamnă sensibilitate intermediară, daca exista înseamnă sensibilitate intermediară, daca exista creştere în ambele godeuri (creştere în ambele godeuri (cc şi şi CC) semnifică ) semnifică rezistenţă la respectivul agent antimicrobian. rezistenţă la respectivul agent antimicrobian.

E-Test E-Test

E -Testul imbina acuratetea testarii cantitative si E -Testul imbina acuratetea testarii cantitative si simplitatea testarii difuzimetrice cu mare economie de simplitatea testarii difuzimetrice cu mare economie de timp . timp .

Pe suprafata unei langhete/bandelete de 5 mm/50 mm Pe suprafata unei langhete/bandelete de 5 mm/50 mm din plastic inert, neporos, este fixat un gradient din plastic inert, neporos, este fixat un gradient exponential de antibiotic , desicat si stabilizat, cu 15 exponential de antibiotic , desicat si stabilizat, cu 15 dilutii intre 0,016 si 256 µg/ml sau 0,002 si 32 µg/ml, iar dilutii intre 0,016 si 256 µg/ml sau 0,002 si 32 µg/ml, iar pe cealalta suprafata este marcata scala de lectura in pe cealalta suprafata este marcata scala de lectura in µg/ml corespunzatoare CMI . µg/ml corespunzatoare CMI .

E-TestE-Test

Pe suprafata unei placi cu mediu agarizat Pe suprafata unei placi cu mediu agarizat preinsamintata cu tulpina testata in conditii preinsamintata cu tulpina testata in conditii standardizate sint depuse radiar standardizate sint depuse radiar

langhetele/bandeletele cu antibiotic.langhetele/bandeletele cu antibiotic. Dupa incubare corespunzatoare, CMI este Dupa incubare corespunzatoare, CMI este

indicata de intersectia dintre zona eliptica de indicata de intersectia dintre zona eliptica de inhibitie a culturii si scala de gradiente a inhibitie a culturii si scala de gradiente a langhetei langhetei

E-TestE-Test Desi scump, testul este fiabil, reproductibil si permite Desi scump, testul este fiabil, reproductibil si permite

determinarea concomitenta, pe aceeasi placa, a CMI ale determinarea concomitenta, pe aceeasi placa, a CMI ale mai multor antibiotice pentru bacterii aerobe sau mai multor antibiotice pentru bacterii aerobe sau anaerobe, supravegherea pacientilor pe parcursul anaerobe, supravegherea pacientilor pe parcursul terapiei antimicrobiene pentru a surprinde selectarea de terapiei antimicrobiene pentru a surprinde selectarea de clone rezistente ( ex. fata de ampicilina in meningitele clone rezistente ( ex. fata de ampicilina in meningitele determinate de H. influenzae, testarea pneumococilor determinate de H. influenzae, testarea pneumococilor fata de fata de ββ-lactamine, a enterococilor fata de -lactamine, a enterococilor fata de aminoglicozide cu depistarea rezistentei cu nivel inalt, a aminoglicozide cu depistarea rezistentei cu nivel inalt, a enterobacteriaceelor producatoare de enterobacteriaceelor producatoare de ββ-lactamaze cu -lactamaze cu spectru extins ). spectru extins ).

Metoda dilutiilor in medii Metoda dilutiilor in medii lichidelichide

Aceasta urmareste determinarea limitei de Aceasta urmareste determinarea limitei de sensibilitate a germenului fata de substanta sensibilitate a germenului fata de substanta data, indicind concentratia de chimioterapice sau data, indicind concentratia de chimioterapice sau antibiotice necesara pentru inhibarea dezvoltarii antibiotice necesara pentru inhibarea dezvoltarii sale. In acest fel se determina ceea ce se sale. In acest fel se determina ceea ce se cunoaste sub denumirea de concentratie minima cunoaste sub denumirea de concentratie minima inhibitorie ( CMI ). inhibitorie ( CMI ).


In dilutii crescinde de chimioterapice si In dilutii crescinde de chimioterapice si antibiotice facute direct din mediul de cultura antibiotice facute direct din mediul de cultura lichid se insaminteaza cantitati egale din cultura lichid se insaminteaza cantitati egale din cultura de cercetat, stabilindu-se dilutia maxima a de cercetat, stabilindu-se dilutia maxima a substantelor in prezenta careia tulpina este substantelor in prezenta careia tulpina este inhibata.inhibata.

Pentru fiecare antibiotic se fac dilutii de pornire. Pentru fiecare antibiotic se fac dilutii de pornire.


Concentratia initiala pentru penicilina este Concentratia initiala pentru penicilina este 100 UI/ml; cea pentru streptomicina de 100 UI/ml; cea pentru streptomicina de 100 µg/ml, pentru cloramfenicol 50 µg/ml, 100 µg/ml, pentru cloramfenicol 50 µg/ml, etc. Mediul de cultura utilizat este bulionul etc. Mediul de cultura utilizat este bulionul glucozat 2% preparat fara peptona daca glucozat 2% preparat fara peptona daca se testeaza actiunea sulfamidelor.se testeaza actiunea sulfamidelor.


Microorganismul testat se cultiva in bulion Microorganismul testat se cultiva in bulion glucozat, iar din cultura de 18-20 ore se face o glucozat, iar din cultura de 18-20 ore se face o dilutie de 1/100, care se insaminteaza in cantitati dilutie de 1/100, care se insaminteaza in cantitati egale ( cite o picatura ) in toate dilutiile de egale ( cite o picatura ) in toate dilutiile de antibiotic. antibiotic.

Pentru dilutii se utilizeaza 10 tuburi, fiecare se Pentru dilutii se utilizeaza 10 tuburi, fiecare se repartizeaza cite 1 ml bulion glucozat. repartizeaza cite 1 ml bulion glucozat.


In primul tub se adauga 1 ml din solutia de antibiotic. In primul tub se adauga 1 ml din solutia de antibiotic. Dupa omogenizare se trece 1 ml in al doilea tub si asa Dupa omogenizare se trece 1 ml in al doilea tub si asa mai departe pina la tubul 9 de unde se indeparteaza 1 ml mai departe pina la tubul 9 de unde se indeparteaza 1 ml de solutie. Se insaminteaza tuburile cu cite o picatura din de solutie. Se insaminteaza tuburile cu cite o picatura din cultura testata. Tubul 10 este proba martor care serveste cultura testata. Tubul 10 este proba martor care serveste pentru controlul dezvoltarii tulpinii in mediul utilizat .pentru controlul dezvoltarii tulpinii in mediul utilizat .

Citirea se face dupa o incubare la 37° C , timp de 18-20 Citirea se face dupa o incubare la 37° C , timp de 18-20 ore.ore.

Citire si interpretareCitire si interpretare

Ultimul tub limpede indica limita sensibilitatii Ultimul tub limpede indica limita sensibilitatii germenului, fata de substante sau germenului, fata de substante sau concentratia concentratia minimaminima inhibitorie activainhibitorie activa ( CMI). Adaugind la ( CMI). Adaugind la mediu un indicator de ph ( rosu fenol ) se poate mediu un indicator de ph ( rosu fenol ) se poate reduce timpul de citire a rezultatelor la 3-6 ore reduce timpul de citire a rezultatelor la 3-6 ore intrucit virarea culorii mediului in urma modificarii intrucit virarea culorii mediului in urma modificarii ph-ului datorita dezvoltarii microbiene ( ph acid ) ph-ului datorita dezvoltarii microbiene ( ph acid ) apare mai rapid decit tulburarea lui. apare mai rapid decit tulburarea lui.

Citire si interpretareCitire si interpretareDilutia din ultima eprubeta in care nu exista crestere bacteriana (mediul este Dilutia din ultima eprubeta in care nu exista crestere bacteriana (mediul este limpede) reprezinta valoarea CMI.limpede) reprezinta valoarea CMI.

½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512

•Metoda dilutiilor succesive in mediu lichid

DiscutiiDiscutii

Metoda dilutiilor in medii lichide este Metoda dilutiilor in medii lichide este tehnica cea mai precisa de determinare a tehnica cea mai precisa de determinare a sensibilitatii microorganismelor la sensibilitatii microorganismelor la antibiotice si chimioterapice si in plus antibiotice si chimioterapice si in plus permite determinarea concentratiilor permite determinarea concentratiilor bacteriostatice si bactericide ale bacteriostatice si bactericide ale substantelor testate. substantelor testate.

DiscutiiDiscutii

Dozarea chimioterapicelor si antibioticelor din umorile Dozarea chimioterapicelor si antibioticelor din umorile organismului este necesara pentru evaluarea in vivo a organismului este necesara pentru evaluarea in vivo a eficientei unui tratament cu chimioterapice sau eficientei unui tratament cu chimioterapice sau antibiotice. antibiotice.

Astfel se poate stabili daca concentratia substantei se Astfel se poate stabili daca concentratia substantei se mentine in umorile organismului la un nivel activ, permite mentine in umorile organismului la un nivel activ, permite controlul modului si ritmului de administrare , ajuta la controlul modului si ritmului de administrare , ajuta la aprecierea corespondentei intre eficacitatea in vivo si in aprecierea corespondentei intre eficacitatea in vivo si in vitro a substantei utilizate, etc. vitro a substantei utilizate, etc.

DiscutiiDiscutii

Aprecierea efectului bactericid prin metoda Aprecierea efectului bactericid prin metoda dilutiilor se realizeaza astfeldilutiilor se realizeaza astfel: din ultimele 2 : din ultimele 2 eprubete in care dezvoltarea a fost inhibata, se eprubete in care dezvoltarea a fost inhibata, se insaminteaza cu uninsaminteaza cu un inocul mic,inocul mic, tuburi cu mediu tuburi cu mediu similar, dar fara antibiotic.similar, dar fara antibiotic.

Lipsa dezvoltarii bacteriene in aceste tuburi Lipsa dezvoltarii bacteriene in aceste tuburi indica efectul bactericid al antibioticului testat. indica efectul bactericid al antibioticului testat.

ConcluziiConcluzii

Antibiograma Antibiograma este una dintre cele mai este una dintre cele mai utile determinari de laborator care aduce utile determinari de laborator care aduce informatii pretioase privind atitudinea informatii pretioase privind atitudinea medicului in terapia cu antibiotice. medicului in terapia cu antibiotice.

ConcluziiConcluzii

Antibiogramele se vor repeta ori de cite ori Antibiogramele se vor repeta ori de cite ori o dicteaza evolutia clinica dupa o dicteaza evolutia clinica dupa tratamentul cu antibiotice si eventual se tratamentul cu antibiotice si eventual se vor utiliza asociatii de antibiotice pentru a vor utiliza asociatii de antibiotice pentru a obtine un efect terapeutic mai promt si obtine un efect terapeutic mai promt si prevenirea instalarii rezistentei bacteriei la prevenirea instalarii rezistentei bacteriei la antibiotice si chimioterapice. antibiotice si chimioterapice.

antibiotic e

Documents