transferul genelor prin intermediul vectorilor biologici toma rodica

Upload: rodikush-toma

Post on 04-Jun-2018

234 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    1/16

    UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR

    Toma Rodica Elena

    Bucureti, 2013

    Transferul genelor prin intermediulvectorilor biologici

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    2/16

    Transferul genelor prin intermediul vectorilor biologici se

    realizeaza prin:

    sistemul Agrobacter ium;

    infiltrarea sub vacuum;

    virusurile.

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    3/16

    Transformarea mediat de

    Agrobacterium

    Agrobacterium tumefaciens

    http://www.ppws.vt.edu/~sforza/prokaryote/agrobacterium1.jpg
  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    4/16

    Evenimentele n care sunt

    implicate bacteriile

    Perceperea semnalelor moleculare emise de

    celulele rnite

    Inducerea expresiei genelor de virulen

    Procesarea catenei T de la nivelul plasmidei Ti

    Exportul catenei T i al proteinelor de virulen

    (VIR) n celulele vegetale

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    5/16

    Ataarea bacteriilor

    Transferul catenei T i al

    proteinelor VIR

    Transportul i

    direcionarea complexului

    T, prin citoplasm, spre

    nucleu

    Integrarea ADN T n

    nucleu

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    6/16

    Imersia materialului vegetal ntr-o suspensie

    bacterian

    Cocultura pe medii artificiale in vitro

    Transferul pe medii cu antibiotice pentrueliminarea bacteriilor i selecia celulelor

    transformate

    Metoda

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    7/16

    Transformarea mediat de Agrobacterium

    asistat de sonicare(SAAT)

    Durata sonicrii este

    controlat de un timer

    (cronometru) digital

    electronic

    Poate fi folosit orice timer

    atta timp ct poate fi

    programat la 0.1

    secunde.

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    8/16

    Factorii care favorizeaz transformarea

    Virulena tulpinilor bacteriene

    Virulena poate fi stimulat prin utilizarea

    acetosiringonei, a unor compui nrudii sau prin

    rnirea prealabil a esuturilor vegetale ce trebuie

    inoculate (ultrasunete, infiltrare, sonicare)

    Sensibilitatea esutului vegetal la inoculareGenotipul plantei

    La monocotiledonate au fost folosite plasmide

    supervirulente cu mai multe copii ale genelor VIR

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    9/16

    Transformare in planta

    LaArabidopsis,pentru transformarea

    eficient cuAgrobacterium a fost folosit

    infiltrarea vacuumi imersia floral

    Factorii cei mai importani au fost

    sntatea plantelor i stadiul de dezvoltare

    al florilor

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    10/16

    Florile plantelor de Arabidopsissntoase au fost introdusentr-o suspensie de bacteriiconinut ntr-o pung deplastic.

    Prin presarea uoar a prilorlaterale ale pungii cu o mn,bacteria a fost distribuit petoat planta, inclusiv pe lstariiflorali foarte tineri

    Plantele au fost scoase dinpung dup zece secunde ipstrate n condiii deiluminare redus i umiditatemare.

    Plantele deArabidopsis folosite

    pentru transformare prin imersia

    florilor

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    11/16

    Seminele recoltate lamaturitate au fost semnate,iar plantele transgenice au fostselecionate prin stropire cuerbicidul BASTA 0.1%

    Plantele au fost stropite la osptmn dup rsrire i,apoi, la interval de dou zile,de nc patru ori

    Plantele transgenice aucontinuat creterea dupaplicarea erbicidului n timp ceplantele netransformate aumurit dup dou sptmni

    Plantele care supravieuiesc dup

    dou sptmni de selecie cu

    BASTA

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    12/16

    Organogeneza PMG de cpun in Bioreactoare cu Imersie Temporar.A: Vasul TIB (RITA, Cirad, France) are dou compartimente .npartea inferioar se afl mediul, iarn partea superioar, pe un suportde polysulfone foam, este amplasat materialul vegetal B:Bioreactoarelen camera de cultur conectate la sistemul automat de

    introducere a aerului sub presiune Aerul sub presiunempingemediul imersionnd materialul vegetal. Presiunea se scade printr-unalt filtru din capacul containerului, simultan aerisindu-seicontainerul.

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    13/16

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    14/16

    Transformarea mediat de virusuri

    Utilizarea vectorilor virali pentru transformarea

    plantelor, n ciuda numeroaselor eforturi

    experimentale, nu a adus rezultate

    spectaculoase. Dei, n 1984 a fost posibiltransferul unei gene de rezistena la antibiotic cu

    ajutorul unui virus ADN (Brisson i colab., 1984),

    cercetrile ulterioare au demonstrat c genomul

    viral nu poate accepta i transfera fragmentemai lungi de ADN strin.

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    15/16

    Descoperirea faptului c virusurile ARN pot genera

    ADNc prin transcripie invers a generat sperena c,mult mai numeroasele virusuri ARN ar putea fi utilizateca vectori de gene pentru celula vegetal. Din pcate,ns, s-au ntmpinat alte dificulti. ADNc viral nu se

    integreaz n genomul vegetal iar meristemele,

    principala surs de celule totipotente, nu sunt infectatede virusuri. De aceea, vectorii virali sunt mai rar utilizain experimentele de transformare genetic a plantelor.

  • 8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica

    16/16

    Va multumesc!