1

STERILIZAREA I DEZINFECIA Sterilizarea - este un procedeu de ndeprtare sau distrugere a microorganismelor vii de pe suprafaa i din interiorul unor obiecte, folosind ndeosebi metode fizice. Dezinfecia - se refer la distrugerea unor grupe de microorganisme, mai ales a celor patogene, prin metode chimice, de pe suprafee, acolo unde nu se poate aplica sterilizarea prin cldur. Asepsia - reprezint ansamblul de msuri i mijloace prin care este prevenit contaminarea cu microorganisme a unor materiale, dar i a organismelor vii, n primul rnd a omului. Antisepsia - nseamn ndeprtarea microorganismelor de pe tegumente folosind antiseptice. Antisepticele i dezinfectantele sunt ageni chimici care nu au o int precis de aciune n celula bacterian (spre deosebire de antibiotice, care au o int de aciune precis, de exemplu peretele celular sau membrana citoplasmatic sau sinteza proteic etc.) i nu se supun principiului toxicitii selective. Antisepticele i dezinfectantele sunt toxice pentru bacterii, dar i n organismul uman. Dezinfectantele se utilizeaz pentru mediul nconjurtor (obiecte, suprafee inerte), iar antisepticele se aplic pe esuturi vii: pe suprafeele externe ale corpului uman (tegumente i mucoase). Pot fi utilizate ca antiseptice: alcoolul sanitar, tinctura de iod, apa oxigenat etc., iar ca dezinfectante: Cloramina, formolul, diveri acizi, baze (soda caustic) etc.

1. STERILIZAREA Sterilizarea se realizeaz: A - prin metode fizice: I - prin cldur; II - cu radiaii ionizante; B - cu substane chimice. A. STERILIZAREA PRIN METODE FIZICE

I. STERILIZAREA PRIN CLDUR 1) Sterilizarea prin cldur uscat se poate face prin urmtoarele metode: a) nclzirea la incandescen se utilizeaz numai pentru ansa bacteriologic (Fig.1) i se menine tija metalic a acesteia n flacra becului de gaz (becul Bunsen) pn devine roie. Microorganismele sunt carbonizate. Nu se sterilizeaz obiecte din sticl i alte obiecte din metal.

Fig. 1. Sterilizarea prin nclzire la incandescen a ansei bacteriologice

b) Sterilizarea cu aer supranclzit are loc n cuptorul Pasteur sau cuptorul cu aer cald

sau Poupinel (Fig.2) i se efectueaz la 180C, timp de 1 or. Microorganismele sunt carbonizate. Metoda se aplic pentru obiecte din sticl i porelan, dar nu i pentru lichide

2

degradabile prin cldur i nici pentru obiecte din cauciuc sau obiecte cu armturi metalice, care se altereaz la temperatura de sterilizare utilizat.

Fig. 2. Cuptor Pasteur sau cuptor cu aer cald sau Poupinel

Controlul sterilizrii n Poupinel se face urmrind parametrii de sterilizare pe tot parcursul sterilizrii (temperatur, timp), iar dac temperatura a atins 180C, dopurile de vat i hrtia au o culoare glbuie (Fig.3). Dac temperatura n cursul sterilizrii a depit 200C dopurile de vat i hrtia sunt carbonizate (Fig.4) (gudroanele pot ptrunde n interiorul obiectelor avnd un efect antimicrobian), iar dac temperatura nu a atins 180oC hrtia i dopurile de vat rmn albe (Fig.4).

Fig. 3. Materiale sterilizate corect

3

Fig. 4. Materiale sterilizate incorect (hrtie alb, hrtie carbonizat)

Fig. 5. Material sterilizat corect n Poupinel (indicatorul aplicat pe balonul de sticl i-a

schimbat culoarea din verde n negru) 2) Sterilizarea prin cldur umed Sterilizarea prin vapori de ap sub presiune (autoclavarea) se realizeaz n autoclave cu gaz (modelele vechi), electrice (Fig.6), cu vid. Sunt distruse toate formele vegetative i toi sporii, la 121C (temperatura corespunde presiunii de 1 atmosfer), timp de 30 minute. La 2 atmosfere, temperatura vaporilor de ap atinge 134C i se indic pentru sterilizarea materialului infecios. Cldura umed sub presiune este mai penetrant dect cldura uscat i n acest caz temperatura de sterilizare este mai mic (121C fa de 180C la Poupinel). Se sterilizeaz: medii de cultur, material infecios, aparate de filtrat, casolete cu material chirurgical, halate, rufria de pat i corp ale pacienilor spitalizai,obiecte din sticl, porelan i cauciuc, fiind cea mai sigur metod de sterilizare i frecvent utilizat n laborator. Nu se sterilizeaz lichide alterabile peste 100C.

4

Fig. 6. Autoclav (electric)

Controlul sterilizrii la autoclav: 1 se urmresc timpul i presiunea din autoclav pe parcursul sterilizrii; 2 controlul sterilizrii prin teste chimice: a - se introduc n autoclav tubuoare de sticl cu substane chimice sub form de pulbere, care au puncte de topire n jur de 120C (de exemplu: acid benzoic: p.t=121C, parachinon: p.t=116C, sulf: p.t=118C); dac sterilizarea a fost efectuat corect adic s-au atins temperaturile de topire, substanele se topesc i se solidific (n bloc); b se pot utiliza stripuri cu indicatori chimici, a cror culoare se modific la temperaturile atinse n cursul sterilizrii. De exemplu se pot utiliza: BAG-ChemoStrip la care culoarea se modific din violet n verde la temperatura de 121C (Fig.7) i la temperatura de 134C (Fig.8) i ProChem SSI la care bulinele albe devin negre dup o sterilizare corect la temperaturi de 132-135oC (Fig.9).

5

Fig. 7. Controlul chimic al sterilizrii la autoclav la temperatura de 121C (test iniial de

culoare violet sus i test dup sterilizare corect de culoare verde jos)

Fig. 8. Controlul chimic al sterilizrii la autoclav la temperaturi de 134C (test iniial de

culoare violet sus i test dup sterilizare corect de culoare verde jos)

Fig. 9. Controlul chimic al sterilizrii la autoclav la temperaturi de 132-135C (test

ProChem SSI cu indicator: iniial cu buline albe - sus i test cu buline negre dup sterilizare corect - jos)

6

3 controlul sterilizrii prin teste biologice: a - se folosesc fiole de Stearotest 120 (Fig.10) conine o suspensie sporulat de Bacillus stearotermophylus n mediu nutritiv i cu indicator de pH de culoare violet i aspect limpede (sporii sunt distrui n 20 minute). Fiolele se introduc n autoclav odat cu obiectele de sterilizat i se recupereaz la terminarea autoclavrii. Meninerea nemodificat a aspectului denot o sterilizare corect; virajul n galben i o uoar opalescen indic o sterilizare incomplet (au rmas spori; pH-ul se modific prin multiplicarea bacteriei i culoarea devine galben) (Fig.10.a).

Fig. 10.a. Test biologic: Fiole de Stearotest 120

(culoare violet i aspect limpede: sterilizare corect; culoare galben i mediu opalescent: sterilizare incorect)

b - strip cu spori de Geobacillus stearotermophylus (testul se introduce n autoclav mpreun cu materialele de sterilizat; dup sterilizare se nsmneaz stripul pe mediul de cultur bulion trypticase soya i se incubeaz la 55-60C, timp de 7 zile; dac bacteria nu se dezvolt, sterilizarea a fost efectuat corect) (Fig.10.b).

Fig. 10.b. Test biologic: strip cu spori de

Geobacillus stearotermophylus

7

II. STERILIZAREA CU RADIAII IONIZANTE Razele gamma sunt penetrante i de asemenea sunt microbicide (ionizarea compuilor

celulari prin expulzarea elecronilor); o doz de 2,5 Mrad este considerat ca sigur sterilizant. Aceste raze pot fi obinute dintr-o surs radioactiv de Cobalt 60 sau de Cesiu 137.

Sterilizarea se face la rece, n ambalaje, materialul sterilizat nu este radioactiv (razele gamma nu las urme radioactive). Se sterilizeaz instrumentar medical confecionat din material degradabil termic (Fig.11), precum i produse medicamentoase.

Fig. 11. Materiale sterilizate cu raze gamma

B. STERILIZAREA CU SUBSTANE CHIMICE

Substanele folosite pot fi: glutaraldehid 2%, peroxid de hidrogen stabilizat (6%), acid peracetic (concentraii diferite). Timpul de contact al substanei cu substratul tratat difer n funcie de produs. Vor trebui respectate recomandrile productorului privitoare la condiiile de lucru, att pentru o sterilizare corect ct i pentru evitarea accidentelor.

Sterilizarea cu oxid de etilen se efectueaz ntr-o etuv special i are o aciune bactericid puternic (distruge forme vegetative ale microorganismelor, spori). Metoda se folosete numai atunci cnd nu exist un alt mijloc de sterilizare adecvat. Metoda este delicat, iar erorile de procedur pot s conduc fie la o sterilizare ineficient, fie la accidente (toxice), la personalul care realizeaz sterilizarea sau la pacienii la care se utilizeaz materialul astfel sterilizat. Oxidul de etilen este toxic prin: inhalare, contact, pe cale parenteral, prin reacie cu diferii compui chimici (cu policlorura de vinil elibereaz etilenclorhidrin). Oxidul de etilen este inflamabil, de aceea, amestecat cu hidrocarbur halogenat: Freon sau cu dioxid de carbon (CO2) (de exemplu: 10% oxid de etilen i 90% Freon - F 12 sau CO2) i pierde aceast capacitate. Oxidul de etilen este un gaz incolor, cu mare penetrabilitate (penetreaz materiale din plastic, din cauciuc, materiale textile, hrtie, lemn). Se poate steriliza: instrumentar chirurgical din

8

metal sau din cauciuc, catetere, tuburi, ace, material pentru sutur. Dup sterilizare, materialul trebuie supus tratamentului de desorbie. Parametrii de sterilizare pot fi: - temperatura de 37C, presiune subatmosferic, timp de 180 minute; - temperatura de 55C, presiune subatmosferic, timp de 60 minute.

2. DEZINFECIA

Dezinfecia se realizeaz: A - prin metode fizice: I - prin cldur; II filtrarea; III - cu raze ultraviolete. B - cu substane chimice. A. DEZINFECIA PRIN METODE FIZICE I. DEZINFECIA PRIN CLDUR a) Dezinfecia prin cldur uscat:

Flambarea (Fig.9) nseamn trecerea rapid i repetat a obiectelor sau a unor pri ale obiectelor prin flacra becului de gaz (pipete gradate, pipeta Pasteur, orificiile baloanelor i eprubetelor). Dup ce se flambeaz pipeta Pasteur, aceasta se rcete suflnd aer cald pe faa dorsal a minii. Flambarea se aplic nainte de utilizarea unor obiecte de sticl care iniial au fost sterilizate prin alte metode. Nu se aplic pentru obiecte din metal.

Fig. 12. Flambarea orificiilor eprubetelor

9

b) Dezinfecia prin cldur umed b.1. Fierberea (Fig.13) este o metod prin care se distrug forme vegetative, dar nu se

distrug toi sporii bacterieni (sporul bacilului tetanic rezist 1-3 ore dup fierbere) i toate virusurile (de exemplu: HBV). Se realizeaz la 100C, timp de 30 minute din momentul primului clocot. Se pot utiliza fierbtoare electrice sau cu gaz. Pentru a crete temperatura de fierbere se adaug n apa de fierbere o cantitate mic de carbonat de sodiu sau carbonat de calciu (2%) sau de Borax. Se sterilizeaz instrumente din metal (de exemplu: seringi, ace) care se utilizeaz imediat sau n cel mult 1-2 ore dup fierbere.

Fig. 13. Fierberea apei

b.2. Pasteurizarea este o metod imperfect deoarece sunt distruse numai formele

vegetative la temperaturi sub 100C (proteinele sunt coagulate). Astfel, se reduce numrul de microorganisme i sporii nu mai trec n forme vegetative. Produsele se nclzesc n baia de ap la 60-65C timp de 30 minute sau la 70-75C timp de 15 minute sau la 85-90C cteva secunde, apoi se rcesc brusc prin meninere la 4 oC. Metoda se utilizeaz pentru unele produse alimentare (lactate, alcoolice etc.).

b.3. Tindalizarea Produsele sunt nclzite n baia de ap (Fig.14) 1-3 ore/zi, la temperaturi de 60-100C,

timp de 3-8 zile consecutiv; ntre nclziri materialul este pstrat la temperatura camerei i dup ultima nclzire la 4C. Prin acest procedeu, sporii trec, ntre dou nclziri, n forme vegetative, care sunt distruse de o nou nclzire (proteinele sunt coagulate). Acest procedeu se aplic lichidelor care se altereaz la temperaturi mai mari de 100C (de exemplu: anumite medii de cultur).

10

Fig. 14. Baia de ap

b.4. Sterilizarea prin vapori cureni (n oala Koch sau n autoclave cu robinetul

deschis) este o metod prin care se distrug forme vegetative, nu i toi sporii i virusurile. Se sterilizeaz lichidele care sunt alterate termic la temperaturi de peste 100 oC.

II. FILTRAREA Este un procedeu prin care microorganismele se rein de ctre substanele poroase numite filtre (Fig.15 i Fig.16). Se poate efectua la temperatura ambiant i n maxim 20 minute pentru ca porii filtrului s nu se colmateze; la o presiune mrit sau sczut obinut prin pompa de vid sau trompa de ap; presiunea negativ crete pe durata filtrrii. Metoda se utilizeaz pentru lichide biologice, soluii injectabile alterabile termic; filtrele pot reine bacterii, toxine, virusuri. Exemple de filtre: 1) filtre Chamberland (bujii sau lumnri: L1- L13); L3-L13 rein bacteriile (Fig.15); sunt din porelan poros ars; debit redus. 2) filtre de sticl (discuri din sticl neutr poroas: G0-G5; G5 rein bacteriile). 3) filtre Seitz - din azbest i celuloz sau alte materiale fibroase; fixate n cupe metalice; se pot utiliza pentru filtrarea de soluii proteice, plasm, controlul bacteriologic al apei etc.

11

Fig. 15. Filtru de azbest fixat ntr-un

suport de sticl ataat la balonul Kitasato i filtru Chamberland (L3)

Fig. 16. Filtrare cu filtru ataat la sering

Unele filtre se introduc n cupe de porelan (Fig.17), de sticl sau de metal i se monteaz n baloane Kitasato.

Fig. 17. Suport de porelan pentru filtru

4) membranele filtrante (Fig.18) (discuri de acetat de celuloz, policlorur de vinil, nitrat de celuloz; fixate n armturi speciale din metal sau plastic sau sticl montate la baloane Kitasato); - au diametrul porilor de ordinul nm (10-4000 nm) i se pot separa virusuri; -se pot filtra produse medicamentoase.

12

Fig. 18. Membran filtrant

Controlul filtrrii se face prin nsmnri din materialul filtrat pe medii de cultur adecvate, iar dac dup 3-4 zile nu se dezvolt microorganisme filtratul este steril. III. DEZINFECIA CU RAZE ULTRAVIOLETE

Razele ultraviolete (UV) au lungime de und cuprins ntre 2500-2800 nm. Aceste raze au efect bactericid, dar nu i sporocid. Se utilizeaz pentru sterilizarea ncperilor de lucru, reducnd numrul de microorganisme. Exist lmpi de UV (Fig.19) (au un tub de cuar; emisia de radiaii se datoreaz descrcrii electrice ntre doi electrozi situai n atmosfer de vapori de mercur). Dezinfecia cu raze ultraviolete se indic pentru suprafee de lucru, aerul din boxele de lucru, sli de intervenii chirurgicale. Este o metod complementar msurilor de curenie i dezinfecie chimic.

Condiiile generale de eficacitate: sunt folosite lmpi fixe sau mobile cu tuburi de UV ntre 15-30W prevzute s funcioneze n prezena omului (radiaie indirect fr emisie de ozon); tuburile de UV trebuie s fie permeabile selectiv pentru radiaia cu putere bactericid maxim (2537 ); spaiul trebuie prealabil supus unei curenii maxime, temperatura mediului s fie ntre 15-30C i umiditatea de maximum 60%. Condiii speciale; 1- pentru suprafee sunt utilizate aparate cu radiaie direct, dezinfecia se face n absena omului, durata de expunere trebuie s fie corect (3-4 doze letale pe suprafaa tratat); 2 - pentru aer: numrul lmpilor se calculeaz n funcie de aerul de dezinfectat de ctre fiecare lamp (debitul de aer, volumul ncperii, viteza de schimb a aerului); nu este admis expunerea direct a persoanelor la radiaia lmpii de dezinfecie (pentru radiaia direct este obligator echipamentul de protecie: ochelari, masc, mnui de cauciuc); aparatele achiziionate vor fi nsoite de documentaia tehnic.

Fig. 19. Lampa cu raze ultraviolete

13

IV. DEZINFECIA CU SUBSTANE CHIMICE

Dezinfecia chimic clasificare 1 -de nivel nalt - distruge microorganismele, dar nu toi sporii; timp de contact: cel

puin 20 minute; substane utilizabile: glutaraldehida (2%), peroxidul de hidrogen stabilizat (6%), hipocloritul de sodiu (5,25%).

2 -de nivel mediu - distruge Mycobacterium tuberculosis (Bacilul Koch), bacterii, fungi, virusuri; nu distruge sporii bacterieni; timp de contact necesar: 10 minute; substane utilizabile: fenoli, iodofori, compui pe baz de clor, alcooli.

3 -de nivel sczut - distruge majoritatea formelor vegetative bacteriene, unele virusuri, unii fungi; nu distruge sporii bacterieni i Mycobacterium tuberculosis; timp de contact necesar: 10 minute; substane utilizabile: fenoli, iodofori, sruri cuaternare de amoniu, hipoclorit de sodiu (5,25%); alcooli 70-90.