UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR, BUCURETI

UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR, BUCURETIFACULTATEA DE MEDICIN VETERINAR, BUCURETI

TEZA DE DOCTORATCERCETRI ETIOPATOGENICE PRIVIND UNELEOLIGODISMINERALOZE (N CUPRU,MANGAN I ZINC)LA PASARI

-R E Z U M A T -

Indrumtor tiinific: Prof.univ.dr.

HOREA BARZA

DOCTORAND,

IONITA CARMEN

Dr. medic veterinar1999CUPRINSINTRODUCERE3PARTEA I - STUDIU BIBLIOGRAFICl.HIPOCUPROZE71.1. Rolul cuprului n organism71.2. Carena n cupru la psri91.3. Interrelaiile cuprului102.HIPOMANGANOZE122.1. Rolul manganului n organism122.2 Carena n mangan la psri132.3. Interrelaiile manganului143.HIPOZINCOZE153.1. Rolul zincului n organism153.2. Carena n zinc la psri163.3. Interrelaiile zincului174.POLICARENE (CARENE MULTIPLE)19PARTEA A II-A - CERCETRI PERSONALE5.CERCETRI PERSONALE225.1.Experimentul 1225.1.1. Material i metoda de lucru225.1.2. Rezultate i discuii.275.1.3. Concluzii pariale305.2.Experimentul 240Cerine nutriionale i urmrile acestora datorit folosirii n reeta de furajarea puilor de carne, a grului n proporie de 45 %405.2.1. Material i metoda de lucru405.2.2. Rezultate i discuii415.2.3. Modificri histologice a unor organe limfoide, aprute n sindromul nutriional-carenial435.2.4. Concluzii436.DOZAREA CUPRULUI, MANGANULUI I ZINCULUI SERIC546.1. Probele pentru examenele fizico-chimice556.2. Biochimia dozrii cuprului, manganului i zincului seric56CONCLUZII59BIBLIOGRAFIE......................62

INTRODUCEREAvicultura este una din ramurile zootehniei care asigur, ritmic i rapid, produse alimentare de natur animal pentru consumul uman.

Carnea de pasre este un produs cu valoare nutritiv ridicat i igienico-dietetic special, iar oul, un aliment complet, cu valoare nutritiv deosebit.

Intre particularitile de specie se impun, viaa economic scurt, mai ales la rasele de carne (n special la hibridul broiler) apoi ritmul rapid de cretere, deci metabolismul intens. Acestea impun, ns, cerine nutriionale deosebite, att cantitative, ct i calitative, a cror lips de acoperire duce la dereglri metabolice relativ rapid, cu risc de modificri organice ireversibile.

Atari dereglri metabolice - presupunnd iniial doar leziuni biochimice". Impieteaz asupra dezvoltrii corporale i a sntii, determinnd morbiditate i mortalitate, care uneori pot compromite efective avicole ntregi mcar din punct de vedere economic.

Din cauza particularitilor fiziologice, psrile sunt extrem de sensibile la dezechilibrele nutritive. Faptul este valabil pentru asigurarea sntii metabolice. Alturi de oligominerale i vitamine, ntre micronutrieni se situeaz aminoacizii eseniali, unii acizi grai etc.

Oligoelementele au rol de activatori sau chiar de componeni ai altor micronutrieni i mai cu seam intr n structura a numeroase enzime chiar a hormonilor tiroidieni iodai, fapt care explic rolul lor biologic foarte important n relaia sol - plant - animal.

Creterea intensiv a psrilor i n special a puilor de carne se asociaz cu serioase tulburri nutriional-metabolice, ca urmare a administrrii unor raii furajere neechilibrate. Nerespectarea ntocmai a tehnologiei de alimentaie genereaz ceea ce sugestiv s-au numit tehnopatii , care pot avea un caracter de mas sau se pot asocia cu bolile infecto-contagioase i parazitare.

Are loc astfel o potenare reciproc ntre tehnopatii i bolile specifice", soldate cu pagube economice considerabile.In cadrul tehnopatiilor, dismineralozele se traduc prin ntrzierea sau oprirea creterii, deformri de aplomb i corporale (torace, bazin, coloan, craniu), tulburri de reproducie, scderea produciei de ou, alturi de perturbri ale reactivitii generale i imunologice, cu mare inciden a patologiei condiionate (infecii, parazitoze), cu care se complic frecvent. De asemenea, se impune necesitatea prevenirii sau a depistrii precoce a factorilor de risc sau mcar a dismineralozelor, prin analiza de laborator a nutreurilor, ct i prin supravegherea metabolic, epidemiologic etc, cu toate deficienele i impedimentele tehnice i economice de investigaie a patologiei nutriional -metabolice la psri: costul examenelor de laborator, insuficiena sau variabilitatea mare a valorilor de referin, n funcie de vrst, de tipul exploatrii, de agresiunile ambientale (fizice, de grup) sau ali factori stresanti, fa de care pasrile sunt deosebit de sensibile.

Dintre oligoelemente, Cu, Mn i Zn, au un rol biologic important, att plastic, ct i n reactivitatea general a organismului, prin care se asigur sntatea i exprimarea potenialului productiv al psrilor. Acest fapt motiveaz, din plin, subiectul lucrrii de licen, viznd contribuii la cunoaterea implicaiei carenei celor trei oligoelemente, n condiiile de exploatare din ara noastr i n corelaie cu ali factori metabolici cu care oligomineralele se interfereaz n planul lucrrii s-au inclus investigaii de teren (epidemiologice. clinice i morfopatologice), ca i determinribiochimice sau examene histologice ale unor organe implicate n reactivitatea general, ndeosebi n rspunsul imun (timus, bursa Fabricius, diverticul Meckel, splina i glanda Harder).

Am avut n vedere i faptul c, n condiii naturale nu se ntlnesc dect cu totul excepional manifestrile unei carene pure (unice), obinuite fiind policarenele, datorit interrelaiilor i interaciunilor complexe dintre oligominerale i ceilali nutrieni ca i cu solicitri de alt natur. Datorit etiologiei polifactoriale i patogenezei complexe, manifestrile clinice ale tulburrilor nutriional - metabolice, n general, i ale dismineralozelor, n special, sunt de obicei necaracteristice, de ordin general, ca: reducerea apetitului, pica, nerealizarea sporului n greutate, tulburri de reproducie, locomotorii i nervoase.

Din atari motive pe de o parte s-a impus asistena de laborator, pentru precizarea strilor dismetabolice n cauz, iar pe de alt parte, am conceput dou modele experimentale, prin care am cutat s reproducem tulburarea sau boala carenial, spre a putea garanta factorii de referin ceri n interpretare.

PARTEA I

STUDIUL BIBLIOGRAFIC

1. HIPOCUPROZEDintre oligoelementele a cror intervenie n metabolism a fost dovedit de muli ani, cuprul ocup un loc central, dei mecanismele prin care acioneaz nu sunt complet lmurite, n intimitatea lor, nici n prezent.

Primele indicii privind rolul esenial al acestui element pentru nutriie le-au prezentat Hart i col., (1982) n urma unor studii asupra anemiei la obolani, provocat de lapte. Cercetrile urmtoare au confirmat acest aspect i au evideniat rolul biologic al cuprului i la alte animale.

In snge, n majoritate, cuprul circulant se afl sub form de complexe cupro - proteice, fraciunea ionic fiind extrem de redus. n eritrocite s-a izolat eritrocupreina, care conine 0,3 % cupru.

Captarea cuprului de ctre eritrocite este dependent de concentraia plasmatic. Cea mai mare parte a cuprului plasmatic se gsete sub form de ceruloplasmina, sinteza acesteia avnd loc n ficat; poate fi antagonizat i inhibat de argint, cadmiu, molibden, zinc, seleniu etc.

1.1. Rolul cuprului n organismCuprul intr n structura a numeroase enzime, care au rolul de a transforma superoxidul n oxigen i peroxid, denumite superoxid dismutaze, ca hemocuprein, hepatocuprein, cerebrocuprein, eritrozincuprein, citocuprein. Aceste enzime au permis adaptarea organismelor la aerobioz i le protejeaz de efectele toxice ale oxigenului.

Principalele roluri ale cuprului sunt:

Rolul cuprului n hematopoezUna din cele mai nsemnate funcii ale cuprului este intervenia n hemoglobinoformare i eritroformare. Un nivel de cupru plasmatic de 0,10 -0,20 mg/l la porc este considerat limita minim pentru o hematopoez normal. Chiar aceste nivele, meninute timp ndelungat, duc ca i cele mai sczute dect acestea, la anemii cu sfrit letal. Unii autori constat c, n cazul carenei n cupru, se instaleaz anemia i scderea activitii ceruloplasminei plasmatice iar coaja oulor difer ca form i mrime, n membranele cojii existnd mult lizin, ntruct cuprul, acionnd probabil similar ca n esutul conjunctiv, duce la acumularea lizinei n membranele cojii.

Tipul anemiei cupriprive este diferit, n funcie de specie: la obolani, iepuri i porci, anemia este hipocrom, microcitar, greu de deosebit de anemia feripriv; la bovine i ovine, anemia este hipocrom macrocitar; la pui i la cini este normocrom i normocitar. Rolul cuprului n stabilizarea proteinelor esutului conjunctiv i n meninerea integritii pereilor vasculariIn vasele sangvine, la animalele carenate, mai ales la pui, exist un deficit de elastin, care poate fi att de sever nct s duc la rupturi vasculare. Deficitul de cupru este corelat i cu modificri osoase de tip scorbutic sau osteoporotic, precum i cu ntrzierea calcificrii oaselor la tineret. Cuprul este esenial i pentru mielinizare, datorit faptului c, prin citocromoxidaz, el stimuleaz sinteza de fosfolipide i de alte lipide mielinice.

Cuprul mai are rol n manifestarea simului gustuluiAcest lucru fiind posibil datorit ncorporrii lui ntr-o cuproprotein care acioneaz la nivelul papilelor gustative i determin senzaia de gust. Cuprul are rol n fertilitateCarena de cupru determin subestrul la vaci, scderea ouatului i reducerea procesului de ecloziune pn la zero la psri. Cuprul stimuleaz sporul de cretere la purcei i la puii broiler Cuprul este implicat n integritatea miocarduluiDeficitul de cupru determin la bovine alterri miocardice mergnd pn la fibroza miocardic, iar la psri i obolani provoac hipertrofie cardiac.Exist date care sugereaz c suficiena de cupru este important pentru imunogenez, stimulnd formarea anticorpilor; pe de alt parte cuprul stimuleaz efectul anticarcinogen al unor citostatice cunoscute. Cuprul din snge mpiedic coagularea, prin transformarea calciului ntr-o form dializabil.

Cuprul are n organism efect bactericid i fungicid.1.2. Carena n cupru la psriIncidena crescut a carenei de cupru se ntlnete la animalele de pe pune, fiind sub influena condiiilor legate de sol i clim. Carena de cupru a fost demonstrat experimental la porci i psri, folosindu-se raii preparate special, pentru c raiile obinuite la aceste specii conin cantiti suficiente de cupru.

Cuprul are aciune biocatalitic esenial la animale, intervenind n metabolismul hemoglobinei; el favorizeaz nglobarea fierului n hemoglobina i prin aceasta geneza i maturarea eritrocitelor.

Strile de deficit n cupru acioneaz asupra eritropoiezei prin reducerea reabsorbtiei intestinale i a mobilizrii tisulare a fierului mineral ce intr n structura hemoglobinei.

Ca urmare a carenei n cupru, la pui se constat anemie normocrom i normocitar, semnele acesteia constnd n reducerea normoblatilor maturi i apariia unui numr mare de forme imature, expresie a perturbrii maturrii eritrocitelor.

La psri, cuprul influeneaz structura arterelor; puii carenai prezint o aort mai voluminoas, bogat n hexamin i hidroxiprolin, cu scderea procentului de elastin i creterea cantitii de azot.

Rezerva de cupru la pui scade de la 5,2 mg /100 SU hepatic la ecloziune la 0,71 -1,55 mg la vrsta de 30 de zile, demonstrndu-se astfel c puii nu fac stocaj de cupru n ficat (Beck, 1962).

Un alt fenomen ntlnit n insuficiena de cupru este acela al deformrilor osoase, independente de subierea corticalei, ngroarea cartilajelor de cretere, reducerea trabeculelor osoase i aspecte de osteoporoz de grad mijiociu.

1.3. Interrelaiile cupruluiIn condiii naturale, ele sunt de cele mai multe ori multiple i pot fi investigate numai printr-o analiz atent a tuturor factorilor implicai: astfel Fe i Cu sunt eseniali n hemoglobinogenez, n general n hematopoez;

excesul de Zn diminueaz depozitul hepatic de Cu i reduce activitatea citocromoxidazei concomitent cu creterea Cu plasmatic, pe seama celui metabolizat n ficat;

corelaia dintre Cu i Co este cunoscut n boala de coast" la bovine;

calciu n exces inhib absorbia Cu prin creterea pH-ului mediului digestiv;

depozitul hepatic de Cu constituie o rezerv considerabil i un sistem de neutralizare a Cu n exces;

antagonitii Cu sunt molibdenul, sulful, cadmiul, zincul, fierul, cobaltul, plumbul, tiocianaii, sulfaii;

antagonismul dintre argint i cupru; Hill i Matrone (1964) observ c administrarea de Ag agraveaz carena n Cu la pui dar nu o provoac.

De asemenea, dintre toi antagonitii Cu-lui, Ag produce cea mai sever depresiune a ceruloplasmei; relaiile dintre Cu i vitamine explic de ce vitamina A crete concentraia hepatic a Cu i scade pe cea intestinal, vitamina D deplaseaz Cu din ficat n oase, iar vitamina C n raie accentueaz la psri efectele carenei n Cu.Cuprul se afl n relaii de antagonism cu sulfaii, cu manganul n exces, cu cadmiul precum i cu alte minerale cum ar fi nichelul, plumbul i mercurul. De fapt, manganul n exces determin i anemie cupripriv, formarea de complexe Cu - Mn insolubile, blocheaz enzimele cuprice i limiteaz stocajul hepatic de cupru.

2. HIPOMANGANOZEn general, manganul este apreciat ca un element constant n esuturile plantelor i animalelor. Ca element esenial pentru animale, el a fost identificat pentru prima oar de ctre Kremmerer i col. (1931), Wodel i col. (1931), Orent i Mc.Columm (1931), artndu-se influena lui pentru cretere i fertilitate la oareci i obolani. Mai trziu, Vilgues i col. (1936, 1937) trateaz perozisul cu suplimente de mangan, artnd c insuficiena de mangan este cauza perozisului.

2.1. Rolul manganului n organismSe tie c manganul intervine ntr-o serie de funcii cum sunt: osificarea, reproducia, metabolismul i funcionarea sistemului nervos central.

Un rol important al manganului l constituie stimularea sintezei mucopolizaharidelor. Prin aceasta manganul este esenial n dezvoltarea scheletului, stimulnd condrogeneza prin activarea glicozil - transferazei.

n caren, lungimea, densitatea, rezistena i coninutul de cenu al oaselor sunt reduse, iar maturarea scheletului este ntrziat datorit inhibrii osteogenezei encondrale.

Prin marea lui concentraie din mitocondrii, manganul are funcii n reglarea fosforilrii oxidative prin enzimele mito-condriale.

Manganul activeaz un numr nsemnat de enzime: choli-nesteraza, fosfoglucomutaza, adenozintrifosfataza, arginaza, fosfataze, peroxidaze, peptidaze, intervine i n metabolismul tiaminei.

De asemenea, manganul particip la sinteza cojii oulor, stimuleaz producia de ou i procentul de ecloziune. Manganul este esenial pentru sinteza condroitinsulfatului, un component al glicozaminoglicanilor din matricea organic osoas din care este constituit i membrana otoliilor, n caz de deficien provoac ataxia neonatal.

Pe de alt parte, manganul este un component al ctorva enzime implicate n metabolismul glucidic, lipidic i protidic, n plus, activeaz glicoziltransferazele i deoxiribonucleaza, peptidaza, fosfoglucomutaza, enolaza etc.

2.2 Carena n mangan la psriCarena n mangan a fost produs experimental la oareci, obolani, iepuri de cas, porci, psri, dar nu la oi i capre. n general, cnd se vorbete de carena n mangan se face referire la psri, fiindc cerinele n mangan la psri sunt mult mai mari dect la mamifere.

La psri, carena n mangan este cu att mai frecvent, cu ct raiile sunt mai bogate n porumb, ori atunci cnd cresc cantitile de calciu i fosfor n hran. Acelai efect, dar ceva mai redus, l au i alte cereale: orzul, sorgul, meiul, spre deosebire de gru i ovz care sunt mai bogate n mangan (Mihai, D., i Martin, V., 1979).

Nici folosirea concentratelor proteice vegetale ori animale, care au suficient mangan nu poate preveni apariia carenei la psri, dac n raia lor este inclus porumbul n cantiti obinuite. In schimb, raiile bogate n gru i ovz, pot favoriza carena n mangan la psri numai n cazul unui exces de calciu i fosfor. Coninutul crescut n calciu, fosfor sau / i fier determin o cretere a necesarului de mangan. Raiile care, n condiiile unui aport normal de calciu, fosfor, fier, nu determin carena n mangan, n cazul unui exces n aceste elemente duc la apariia carenei. Excesul de calciu i fosfor reduce la psri coeficientul de utilizare a manganului la nivelul

intestinului.

Principalele manifestri ale carenei se refer la tulburri de cretere, reproducie i osificaie.

La pui, exist cel puin dou sisteme enzimatice care par a fi zonele critice ale funciei manganului:

un sistem polimeraza, responsabil de formarea polizaharidelor;

un sistem galactozil - transferaza, cu rol de cuplare al lanului polizaharidic la protein.

Aceste implicaii elucideaz corelaia manganului cu dezvoltarea scheletului, dar i cu formarea cojii oulor la ginile outoare.

2.3. Interrelaiile manganuluiExist interrelaii i interaciuni multiple ntre mangan i colin, n sensul c ambele reduc, n caz de suplimentare, grsimea hepatic i osoas;

Deficitul de mangan coroborat cu excesul de fosfor determin ponta de ou moi, dar numai la nceputul perioadei de ouat, coaja normalizndu-se dup cca. 3 luni; la psri, necesarul de mangan este mult mai mare ca la alte specii (30 50 ppm), deoarece absorbia este mult mai rapid. Organismul tolereaz n general doze foarte mari de mangan fr a se produce tulburri importante.Excesul de calciu mpreun cu fosfor reduce absorbia manganului i au aciune antagonic cu acesta; fierul i magneziul au aciune sinergic cu manganul.3. HIPOZINCOZEPrezena zincului n organismul animal a fost artat de mult vreme (CI., Bertrand, Bellamy, R.Vladescu). Zincul face parte din compoziia a numeroase enzime i, n plus, activeaz altele, cel puin tot att de numeroase. Zincul este cofactor al multor enzime eseniale: lactat dehidrogenaza, fosfataza alcalin, anhidraza carbonic etc.

3.1. Rolul zincului n organismZincul este un component al multor metal - enzime i al insulinei. Din aceste considerente, zincul joac un rol important n metabolismul proteinelor, glucidelor i lipidelor. Exemple de enzime n care zincul este prezent pot fi : anhidraza carbonic, fosfataza alcalin, carboxipeptidaza A i B pancreatic, dehidrogenazele etc. Alte enzime sunt activate de zinc: timidinchinaza, arginaza, o parte din proteaze, existnd peste 30 de enzime dependente de zinc.

Zincul stimuleaz apetitul, consumul hranei i creterea prin mecanisme incomplet elucidate, dintre care trebuie amintite ameliorarea digestiei i stimularea sintezei proteinelor.

Importana zincului n metabolismul proteic rezid n faptul c el stimuleaz sinteza de ADN din ficat, piele i creier i condiioneaz sinteza de ARN din ficat i pancreas, carena n zinc determin reducerea sintezei de colagen muscular i cutanat pn la 30 %. Faptul c efectele amintite se exercit prin intermediul timidinchinazei a permis formularea ipotezei c scderea activitii acesteia ar fi cel mai precoce eveniment metabolic" n carena de zinc.

Alopecia care nsoete paracheratoza pielii este corelat i cu scderea concentraiei de metionin, fenilalanin i tirozin.

Zincul este necesar nu numai n creterea prului, a lnii, i a penelor. La psrile carenate, ca urmare a degenerrii foliculilor plumiferi, penele nu cresc, sunt fragile, destrmate, cu aspect de pene arse ".Fr a minimaliza implicaiile zincului n celelalte structuri ale organismului, trebuie menionat c deficitul de zinc provoac cele mai evidente alterri ale epidermei i fanerelor, la toate speciile. Pielea, limba, mucoasa bucal, esofagul i stomacul n zona cardiei prezint paracheratoz, dat fiind faptul c, n carena de zinc pe lng blocarea sintezei de ADN cutanat are loc i o ncorporare mai redus de aminoacizi n piele, cum ar fi: L-glicina, DL-metionina i cistina.

Tot la nivelul pielii, carena de zinc implic vindecarea ntrziat a plgilor ca urmare a lipsei de migrare epidermal, zincul avnd un rol catabolic n vindecarea plgilor.

Zincul condiioneaz i creterea oaselor; n caren se constat scurtarea i ngroarea oaselor, mai ales a epifizelor.

Zincul are efecte asupra metabolismul glucidic, ntruct, n carena de zinc are loc, reducerea eliberrii de insulina imunoreactiv.

Unul dintre cele mai importante roluri privete implicaia zincului n reproducie, att n organogenez ct i n celelalte faze embriofetale, pn la parturiie.

3.2. Carena n zinc la psri

Zincul s-a dovedit a fi un element necesar la psri; n general, la acestea, carena n zinc este condiionat de antagoniti.

Exist, ns unele particulariti, incomplet cunoscute ca mecanism, cum ar fi agravarea deficitului de zinc prin excesul de arginin (2 - 4 % din raie) i dimpotriv reducerea printr-o serie de substane antiinflamatoare, precum i de ctre unii aminoacizi.cCarena de zinc a fost reprodus experimental cu raii purificate care aveau 14 mg zinc/kg SU. Carena este accentuat de acidul fitic din cereale i de excesul de calciu.Consecinele carenei, cum ar fi: ntrzierea n cretere, tulburri de comportament, tulburri de reproducie, imaturitate sexual, paracheratoza (comun mai multor specii) sunt departe de a fi specifice deficitului de zinc.Din aceste motive, ca i datorit numeroilor factori care impieteaz asupra statusului zincului, inclusiv a distribuiei sale tisulare, diagnosticul carenei de zinc este foarte anevoios, necesitnd examene de laborator.

Carena de zinc, adesea secundar, nu este consecutiv unui aport insuficient.Zincul este prezent n concentraii adecvate n toate substraturile, dar adesea este legat sub form de chelate, care i reduc disponibilitatea biologic.3.3. Interrelatiile zinculuiPentru zinc a fost menionat efectul antagonist al calciului, cadmiului i cuprului n exces, al proteinelor vegetale, al fitailor, al EDTA-ului i fierului. Interrelatiile zincului sunt:

.carena matern de magneziu provoac scderea zincului fetal;

carena de proteine agraveaz carena de zinc;

carena n vitamina D i C evolueaz solidar cu cea de zinc;

nichelul i cobaltul reduc zincul plasmatic, dar cresc hemoglobina;

cobaltul, n raie cu exces de calciu este capabil s previn carena de zinc;

fierul crete concentraia hepatic de zinc, pe cnd, cobaltul o reduce;

zincul reduce efectul excesului de cadmiu i cupru i intensific toxicitatea plumbului;

la psri, carena n fier inhib absorbia zincului, cobaltului i fosforului;

cadmiul inhib transferul zincului din peretele intestinal, spre seroas, dar i n alte sectoare.

La psri, carena n zinc este condiionat de unii antagoniti, ca anumii aminoacizi care pot influena carena de zinc.

cisteina, n proporie de 0,5%, ntr-o raie carenat, bazat pe proteine din soia, produce toate formele carenei similar unor chelatani, ameliornd disponibilitatea zincului;

arginina, 2% n hrana puilor cu raie de zinc normal agraveaz deformrile osoase, sporul de cretere, alterrile penajului;

cadmiul, cuprul, manganul inhib efectul zincului n vindecarea plgilor;

carena de zinc reduce eliberarea insulinei imunoreactive;

calciul n exces duce la carena secundar de zinc.

In general, interrelaiile metabolice multiple dintre microelementele minerale cu ali nutrieni sau modulatori explic, pe de o parte, statusul energetic, plastic i nutriional, corespunztor, iar, n alte cazuri multe dintre strile careniale sau toxicozele nutriionale, ndeosebi latente sau cronice.

4. POLICARENE (CARENE MULTIPLE)

Tulburrile complexe determin o serie de boli nutriionale n care dismetabolismul indus este complex, att n privina etiologiei ct i cea a patogenezei.

Peroza (perozis, boala jaretelor, moliciunea picioarelor) este o osteocondroz nutriional polifactorial a psrilor, caracterizat prin ngroarea jaretelor, deplasarea tendonului lui Achile, torsiunea tibiei, scurtarea i ngroarea oaselor lungi. Boala apare la puii de gin i curc, mai ales la vrsta de 6-10 sptmni.

Etiologia perozei este incomplet clarificat, fiind vorba despre o policaren n mangan, colin, inozitol, niacin, acid folic, biotin, riboflavin, vitamina E, seleniu, devierea raportului fosfo-calcic, exces de porumb i de proteine. Cauzal, domin carena n mangan. Carena sau policaren poate fi primar (de aport), cum este cazul dup consumul exagerat de porumb care este un nutre srac n mangan. Carena secundar este consecina administrrii unor raii bogate n calciu sau fosfor, cu raport fosfo-calcic deviat, bogate n magneziu, fier sau proteine. Policaren nutriional duce la inhibarea activitii fosfatazei alcaline sangvine i din oase, rezultnd tulburri de osificare: astfel, osificarea periostal se desfoar normal, dar este perturbat cea a cartilajului de conjugare. Aceast scdere a fosfatazei alcaline nu este singura cale de intervenie asupra procesului de osificaie, dar, n orice caz, este foarte important. O alt expresie a tulburrilor complexe de metabolism, cunoscut i la psri, este hipo-trepsia, care reprezint un sindrom embrio-fetal al perinatalilor i al tineretului animal, caracterizat prin subdezvoltare statu-ral i/sau ponderent, hiporeactivitate adaptativ i frecvent de nutriie. Deficienele nutriionale incluse n etiologia hipotrepsiei vizeaz aminoacizii eseniali, vitaminele (A, D, E, C i complexul B), colina, oligomineralele (Mn) i macro-mineralele (Ca i P), nutre combinat cu granulaie mare sau coninut celulozic depit, schimbarea raiei furajere.

In conceptul actual, hipotrepsia tineretului animal este considerat drept o boal de adaptare, n care factorii etiologici, ndeplinind rol de agresori, declaneaz din partea animalului reacii de adaptare funcional, metabolic i morfologic.

Oligomineralele, sunt astzi cunoscute n bun msur, omul reuind s le manevreze n aa fel nct s obin o sporire substanial a resurselor sale alimentare i chiar s clarifice amnuntele unor fenomene biologice, a cror nelegere i slujete n aprarea propriei sale snti.

PARTEA a II- a

CERCETRI PERSONALE

5. CERCETRI PERSONALEScopul cercetrii experimentale de fa, este de a aprecia incidena unor oligodismineraloze n cupru, mangan i zinc la puii de carne i interrelaiile care apar ntre acestea i unele macrominerale, n condiiile creterii intensive. In felul acesta am considerat c se evideniaz principalele aspecte epizootologice i manifestri clinice, histopatologice i biochimice, n funcie de tehnologia de cretere.

Deoarece, n condiiile de teren, policarenele i n special, oligodismineralozele sunt foarte greu de investigat clinic i paraclinic, am ncercat n lucrarea de fa ca, prin dou modele experimentale, s aducem cteva contribuii la metodologia de diagnostic a strilor patologice de caren, ca i a msurilor curativo-profilactice aferente la psri - i anume la puii de carne.

5.1. Experimentul 1

Reproducerea experimental a oligodismineralozelor n cupru, mangan i zinc la puii de carne.5.1.1. Material i metoda de lucruIn vederea reproducerii experimentale a oligodismi-neralozelor n cupru, mangan i zinc, am introdus n experiment 160 pui de carne, pe care i-am mprit n 8 loturi. Datorit multiplelor interrelaii care exist ntre macro-minerale i oligominerale, am realizat loturi carentate n macrominerale i n oligominerale.

Modul n care s-au constituit loturile experimentale i carenarea furajelor pe loturi este redat n tabelul 1

Tabelul 1.Protocolul experimentului 1LotulCarenat in:Modul de realizare a carenei fat de reeta furajer

ICalciuS-a redus carbonatul de calciu cu 50%

IIFosforS-a redus cu 50% fosfatul dicalcic

IIIMagneziuS-a redus cu 50% Magneziu

IVMartora loturile I, II, III carenate in macrominerale.

VCupruAm redus sulfatul de cupru cu 50% i am suplimentat vitamina C cu 0,1%

VIManganAm eliminat din raie manganul, am redus colina cu50% i am suplimentat cu 50% carbonatul de calciusi fosfatul dicalcic

VIIZincAm eliminat total zincul din raie

VIIIMartor pentru loturile V, VI, VII carenate in oligominerale

Puii au fost preluai la vrsta de 1 zi (1 aprilie 2004) i au fost inui sub observaie pn la 12 mai 2004, deci 42 de zile. n perioada 0-4 sptmni, puii au fost hrnii dup reeta furajer 21-1 S, apoi, pan la 42 de zile dup reeta furajer 21-3 S. n continuare sunt prezentate reetele furajere cu care au fost hrnii puii pe parcursul celor 42 de zile.

Puii au fost introdui cte 20 in cuc. Condiiile de microclimat, sistemul de adpare i cel de evacuare a dejeciilor au fost racordate la sistemul halei n care s-a efectuat experimentul; microclimatul a fost corespunztor normelor n vigoare i identic pentru toi puii, adpare la picurtoare i evacuarea mecanic a dejeciilor. La nceputul experimentului, i pe parcurs, respectiv la 30 zile i la 40 zile puii au fost cntrii, iar rezultatele obinute s-au nscris n limitele normale, aa cum reiese din tabelul 2.

Tabelul 2.Greutatea puilor pe loturi, in diverse faze ale experimentuluiLotulGreutatea medie a puilor (kg)

nainte de carentareVrsta 30 zileVrsta 40 zile

I0.3251.0301.120

II0.3121.0801.115

III0.3451.0701.170

IV0.3501.1801.350

V0.3001.0701.240

VI0.3051.0601.240

VII0.3251.1001.250

VIII0.3551.2001.365

Puii au fost examinai zilnic din punct de vedere clinic, iar la vrsta de 30 zile i 40 zile au fost sacrificai n vederea efecturii examenelor de laborator.5.1.2. Rezultate i discuiiAspectele clinice constatate pe parcursul experimentului au fost: lipsa de vioiciune a puilor, cu totul nenatural pentru vrsta lor; la 7-10 zile dup administrarea furajului carenat, au aprut dificulti n deplasare, ca urmare puii stau mai mult pe jarete. Uneori, nu se deplaseaz nici la frontul de furajare, lucru ce explic slbirea evident a unor exemplare i dezvoltarea subponderal la unii pui din experiment. Tulburrile locomotorii s-au exprimat prin: discondroplazie tibial, condrodistrofie, necroza capului femural, picioare rsucite sau arcuite i rahitism subclinic. Semnele caracteristice s-au ntlnit i la palpaia oaselor lungi i a ciocului, care prezentau consisten elastic, aa numitele oase de cauciuc" i justificnd denumirea de boala oaselor moi" acordat de autorii de limb englez rahitismului. Epifizele articulare erau deformate iar n cazurile avansate de inaniie, carena sternal aprea deformat, sub forma literei S" cu ncurbarea coloanei vertebrale n zona sacral i coccigien. Modificrile osoase au i consecine nefaste, ndeosebi asupra volumului toracelui, respiraiei i circulaiei. In general, deformrile osteoarticulare s-au dovedit a fi ireversibile i la muli pui au fost o surs de dificultate motorie determinnd alimentaie i adpare dificil, pn la grad de seminfometare, slbire, apoi morbiditate prin complicaii de tipul celor din hipotrepsie.

Aspectele morfopatologice de pe aparatul osteoarticular au fost completate uneori i cu afectarea altor organe. Astfel, au fost semnificative leziunile localizate la nivelul rinichilor, ntlnindu-se nefrit interstiial prin proliferarea predominant conjunctiv. Consecina fiziopatologic este scleroza renal cu insuficien renal cronic. S-au mai observat afeciuni ale pancreasului (pancreatit edematogen cu importante procese de liz tisular), leziuni ale epiteliului cilindric respirator n sensul unei laringotraheite ulcerative, modificri ale musculaturii pectorale, membrelor, miocardului i stomacului. Acestea sunt modificri diatezice de edem i de infiltraie localizate la cap, zona cervical, subtoracal, sub aripi, la nivelul abdomenului i al membrelor. De asemenea, au fost evidente leziuni de hepatit seroas cu caracter difuz, cu dilatarea accentuat a spaiilor Disse, izolarea i delimitarea net a hepatocitelor, enterit cataral cu zone hemoragice.

La nivelul diafizelor osoase s-au evideniat leziuni de condroosteofibroz, avnd drept consecin o puternic fibrozare a esutului cartilaginos i osos. In general, majoritatea cadavrelor au fost slbite" fa de normal, cu penele czute, cu infiltraii subcutanate. Au existat i exemplare cu o conformaie robust" la care modificrile morfopatologice au fost cele semnalate mai sus.

n vederea precizrii diagnosticului i instituirii unui tratament, toate aceste aspecte morfoclinice au impus explorarea biochimic.

Puii i mreau baza de susinere, evitau deplasarea, stteau pe jarete, fapt ce a dus la ngroarea articulaiei jaretelor i colorarea ei n rou-albstrui. Puii prezentau chiopturi cu modificri evidente ale poziiei.

Aceste ultime aspecte clinice, au fost ntlnite n special la lotul VI, carenat n mangan, i se nscriu n sindromul de perozis (Fig. 1).

La lotul VII, carenat n zinc pe lng manifestrile clinice enumerate mai sus, penele au avut aspect de pene arse", destrmate nsoite i de ntrzierea schimbrii pufului infantil (Fig. 2).

n urma examenului necropsic efectuat la puii din acest lot s-a constatat i scurtarea i ngroarea oaselor lungi (Fig. 3).

La lotul V, carenat n cupru, manifestrile clinice au fost mai terse: nesiguran n mers, pn la fals astazie. Morfopatologic s-a observat cardiomegalie de cord rotund", cordul avnd un aspect globulos; de fapt consecinele cardio-vasculare ale deficitului de cupru la puii de carne au fost conforme cu datele din literatur (Fig.4).

La loturile carentate n macrominerale (lotul I, II i III), aspectele clinice se ncadreaz n sindroamele de rahitism, hipotrepsie dar i perozis, explicate prin interrelaiile care exist ntre macrominerale i oligominerale (Fig. 4).

Loturile martor (IV i VIII) nu au prezentat manifestri clinice i nici morfopatologice.Rezultatele determinrilor paraclinice au fost actualizate i sunt prezentate pe categorii de vrst astfel: n tabelul 3 este redat variaia unor parametri mineralo-proteici la probele de ser sangvin a puilor de carne de diverse vrste.n cazul dozrii calciului se constat c valorile obinute la loturile carentate n acest macroelement sunt sczute semnificativ, iar la loturile carentate n oligoelemente scderea este de asemenea vizibil; la loturile martor valorile obinute se ncadreaz n limite normale.In urma dozrii proteinei fa de valorile normale se constat o grav hipoproteinemie, inclusiv la loturile martor, evideniind aport insuficient sau dezechilibrat n aminoacizi. Acidul uric, sodiul i magneziul la toate loturile, se ncadreaz n limite normale.La probele recoltate din esut proaspt (os), rezultatele obinute sunt redate n tabelul 4. Se observ c, la determinarea cenuii, a calciului, fosforului i a raportului Ca/P valorile obinute, att la loturile carentate n macroelemente, ct i la cele carenate n microelemente sunt sczute semnificativ fa de cele normale; valorile celor dou loturi martor se ncadreaz n limite normale. Acest lucru este concordant cu importana pe care o au n osteogenez nu numai compuii fosfo-calcici ci i cei cupro-mangano-zincai.

La examenul probelor din cellalt esut proaspt (ficat), rezultatele sunt prezentate n tabelul 5.

Dozarea cuprului evideniaz, c la loturile carenate n oligoelemente valorile sunt sczute semnificativ fa de cele normale, fapt evideniat chiar i la loturile martor.

Valorile obinute la dozarea manganului sunt sub limitele normale, cea mai sczut valoare nregistrndu-se la lotul carentat n mangan.

Dozarea zincului, mbrac aceleai aspecte respectiv valori semnificativ sczute la lotul carentat n zinc, se poate spune chiar scderi severe", iar la restul loturilor inclusiv la cele martor se situeaz sub normal.

n final, putem spune c policarenele" n oligominerale, investigate de noi n mod experimental sunt primare".

5.1.3. Concluzii parialeObservaiile epidemiologice, morfoclinice i biochimice efectuate la cei 160 pui de carne, cu policarene provocate experimental au condus la urmtoarele concluzii:

cele mai frecvente manifestri ale carenelor reproduse experimental se nscriu n sindroamele de: rahitism, hipotrepsie i perozis.

la loturile carenate n macrominerale (I, II, III), toi parametrii metabolici minerali i la probele din esut proaspt (os, ficat) au fost sczui fa de valorile normale.

la toate loturile, inclusiv la loturile martor (IV, VIII) s-a nregistrat o grav hipoproteinemie, fapt ce explic i deformrile osteoporotice care apar ulterior (lipsa suportului oseinic de susinere").

la loturile carenate n oligoelemente (V, VI, VII), toi indicii obinui denot existena unor policarene.

n urma carenelor minerale reproduse experimental s-au observat simptome n principal conformaionale i locomotorii care concord cu datele din literatur, deoarece semnele clinice i leziunile care sunt tipice acestor carene apar mult mai trziu, astfel nct ele trebuie privite ca manifestri finale ale unei carene acute.

La unele exemplare, n jurul vrstei de 4 sptmni s-a produs ngroarea i tumefierea articulaiei genunchiului, rsucirea i curbarea tibiei sau deplasarea tendonului lui Achile i modificri de aplomb consecutive, patognomonice pentru peroz.

5.2. Experimentul 2Cerine nutriionale i urmrile acestora datorit folosirii n reeta de furajare a puilor de carne, a grului n proporie de 45 %.5.2.1. Material i metoda de lucruAm cercetat un episod carenial care a avut loc n luna octombrie a anului 2004, la unitatea Avicola C" (unitate particular), cu un efectiv de 14.000 pui carne, n perioada de cretere. Puii erau hibrizi comerciali: Ross 208 i Robro. Condiiile de microclimat au fost corespunztoare normativelor n vigoare.

In prima sptmn de via (puii au fost introdui n unitate, pe data de 10.10.2004), deci de la 0 - 7 zile (pn la 17.10.2004) s-a folosit o reet furajer cu urmtoarele componente: porumb 55 %; gru 10%; concentrat PVM (proteino-vitamino-mineral) 10 %; monenzin 0,1 % i rot de soia 24,9 %. Nutreul corespunztor reetei a fost fabricat n unitatea respectiv.

Dup primele 7 zile de via, s-a modificat receptura de furajare, introducndu-se gru n proporie de 45 % (producie 2003) i enzime care ajut la mrirea digestibilitii acestuia n proporie de 0,1 %. In rest reeta coninea: porumb 20%, monenzin 0,1 % i rot de soia 24,8 %.

Am menionat la componentele de baz, respectiv gru i porumb, anul producerii deoarece 2003 a fost un an ploios n special n timpul recoltrii, iar grul a fost de calitate inferioar, cu umiditate mare ceea ce a influenat posibilitile de depozitare, inclusiv grefarea unor specii de mucegaiuri (Fusarium, Penicillium etc).

Pn la vrsta de 14 zile (24.10.2004), pierderile prin mortalitate au fost 1% din efectiv, cauzate de diverse greeli de ntreinere, ndeosebi de microclimat, deci, de diverse tehnopatii", fr s apar evidente semne clinice de caren.

5.2.2. Rezultate i discuiiPrimele semne clinice au aprut la vrsta de 16-17 zile, observndu-se mers legnat ca de ra" - acesta fiind un simptom precoce; ulterior fals ataxie, lips de vioiciune, dificulti n deplasare. Apoi au aprut tulburri de cretere i n formarea penajului, zbrlire, reducerea apetitului, lrgirea bazei de susinere, sprijin pe jarete, chiopturi sau modificri de poziie, respectiv decubit lateral sau dorsal, astenie, tulburri de comportament: fuga n diverse direcii la zgomote, ciugulirea penelor sau a crestelor i brbielor, pe lng o greutate corporal sczut.

Ca urmare, puii nu se mai puteau deplasa pentru a se hrni i a consuma ap, astfel c, au aprut inaniia i deshidratarea, iar mortalitatea a atins 20 % din efectiv. Drept consecin, puii au prezentat decubit prelungit, cu ridicare greoaie i chiopturi. Am mai observat: crustizarea pielii de pe picioare, penaj srac, incomplet schimbat.

Trebuie menionat c la vrsta cuprins ntre 14-17 zile, puii s-au aflat n tratament contra coccidiozei. Cnd semnele clinice s-au acutizat, s-a intervenit cu: Vitamm, Sebio-el i Liquivit-complex B, a cror compoziie este redat mai jos, timp de 7 zile astfel nct la vrsta de 26-27 zile s-a oprit evoluia clinic. Deci, am instituit un tratament pe baza unui diagnostic etiopatogenetic precoce, deoarece timpul a fost foarte scurt i nu a permis efectuarea unor examene paraclinice sau trimiterea la laborator a probelor de furaje. Am putut realiza doar cteva preparate histologice din splin, burs Fabricius, glanda Harder.

In perioada de evoluie a acestui episod" mortalitatea zilnic a fost de 2,5%, iar proporia puilor tarai a fost de 7,5 %. Am considerat i am denumit acest episod drept un sindrom nutriional-carenial".In continuare, sunt prezentate compoziiile chimice ale adjuvanilor mineralo-vitaminici folosii n tratament.SEBIO-EL conine: vitamina E 30 g, vitamina H 200 mg, selenit de sodiu 1,25 g, sulfat de mangan 20 g, suport lichid pn la 1000 g.VITAMM - compoziie pentru 1 kg produs: vitamina A 25.000.000 U.I., vitamina D3 200.000 U.T., vitamina E 8.000 mg, vitamina Bl 1600 mg, vitamina B2 2100 mg, vitamina B3 1500 mg, vitamina B12 11 mg, vitamina PP 15150 mg, acidul pantotenic 3000 mg, acid glutamic 11000 mg, lizin 6040 mg, leucin 3300 mg, acid aspartic 5500 mg, alanin 11000 mg, arginin 5280 mg, glicin 28600 mg, metionin 1980 mg, valin 2860 mg, izoleucin 1100 mg, prolin 18700 mg, fenil alanin 2200 mg, tirozin 540 mg, histidin 880 mg, treonin 880 mg, serin 1100, triptofnul 220 mg, cistin 110 mg, suport lichid pn la 1000 ml.LIQUIVITB COMPLEX compoziie pentru 1 kg produs: vitamina Bl 5000 mg, vitamina B2 5000 mg, vitamina B3 5000 mg, vitamina B12 40 mg, vitamina PP 10000 mg, acid pantotenic 10000 mg, colin 200000 mg, inozitol 10000 mg i aport de secvene de aminoacizi, suport apos pn la 1000 mg.5.2.3.Modificri histologice a unor organe limfoide, aprute n sindromul nutritional-carentialDe la puii n vrst de 20, 28 i 36 zile s-au recoltat splina, glanda Harder, bursa Fabricius, diverticul Meckel, timus din care s-au efectuat preparate histopatologice.Am ales aceste organe, la sugestia unor specialiti, deoarece au rol deosebit n reactivitatea imunologic a organismului i au fost destul de puin studiate n caz de oligodismineraloze. La puii de carne carenai, ncetinirea ritmului de cretere determin i modificri histologice ale acestor organe cu funcie imunologic dup cum urmeaz: Fig. 1-7.

Starea efectivului a devenit normal dup ce s-a redus proporia de gru din raia furajer de la 45 % la 20 %, porumbul din raie fiind n proporie de 45%, iar restul componentelor au rmas aceleai. Aceast modificare a reetei furajere a avut loc cnd puii aveau vrsta de 42 zile.

5.2.4. Concluzii partiale

Dei, nu am stabilit imediat, prin investigaii paraclinice, care dintre factori nutriionali au produs sindromul carenial, se pot trage urmtoarele concluzii pe baza constatrilor epizootologice, clinice i histopatologice:

folosirea n recepturile de furajare, a grului (cereal bogat n glucide - care blocheaz manganul), n proporie de peste 20-25% impune suplimentarea oligoelementelor, macroelementelor i vitaminelor din raie cu peste 20 % fa de necesarul fiziologic i productiv.

de regul aceste sindroame nutriional-careniale", apar n perioada n care puii ajung s realizeze un spor mediu zilnic de 14-15 g; ele pot fi demascate" (fiind marginale" subclinice) n urma unui stres de vaccinare, ceea ce s-a ntmplat de fapt pentru c n a13-azi de via puii au fost vaccinai contra bursitei infecioase, la aceasta se adaug faptul c au fost supui i tratamentului cu coccidiostatice. De subliniat acest aspect, foarte important, pentru c orice tratament cu antibiotice, chimioterapice, coccidiostatice, impun suplimentarea raiei cu premixuri mineralo-vitaminice.

ntruct, la noi n ar, sistemul de cretere cu structura de vrst diferit, impune aplicarea unor programe severe de terapie preventive i curative, cu antibiotice, chimioterapice precum i folosirea coccidiostaticelor n hran peste vrsta de 21 zile, chiar cu 7 zile nainte de abatorizare, se impune suplimentarea cu premix vitaminizant innd cont c, cerealele folosite n recepturile de furaje se aleg n funcie de pre i de sezon - este obligatoriu ca n premixurile sau nutreurile concentrate folosite pentru cretere, necesarul fiziologic i productiv de minerale i vitamine s fie mai mare cu cel puin 50 % fa de cerinele nutriionale menionate n literatura de specialitate.

n cazul n care, condiiile nu permit asemenea recepturi, este necesar o atenie deosebit, la perioada n care puii ncep s realizeze spor de cretere de 14-15 g/zi (depinde de hibridul folosit la cretere), privind coninutul n protein i energie din hran. Trebuie s se intervin cu produse ce conin macro- i oligo-elemente, vitamine i aminoacizi pentru a preveni sau traversa mai uor acest oc nutriional" i dezechilibru metabolic respectiv.

n ceea ce privesc leziunile histologice din organele cercetate se poate concluziona c:

- organele cel mai grav afectate sunt organele limfoide primare (bursa Fabricius, timus). n momentul ecloziunii ele sunt mature din punct de vedere structural i funcional, dar prin policarenele care au afectat puii, populaia celular care intr n structura lor este omogen i nu se observ o discret difereniere a unor categorii principale de celule implicate n imunitate (limfocite stimulate antigenic, limfoblaste, imunoblaste, plasmocite). Marea majoritate a celulelor observate sunt limfocite.

-pentru splin ca organ limfoid secundar se observ constant depopularea tecilor perielipsoidale, acestea sunt structuri de baz ale splinei, iar n situaia dat, locul limfociteleor este luat de neutrofile i macrofage.Ca urmare a imunosupresiei indus de policarene lipsesc centri germinativi, aceste structuri sunt clar elemente de stimulare antigenic. diverticulul Meckel, n general, este un organ puin reactiv, chiar i n situaia unor psri cu un status imun foarte bun - rspunsul su materializat prin prezena centrilor germinativi este sczut.

glanda Harder este practic mai puin afectat, singurul aspect care poate fi consemnat este lipsa nodulilor limfoizi; acest lucru se poate explica prin faptul c glanda Harder continu s funcioneze i n condiiile ablatiei bursale.

indiferent de vrsta luat n discuie, edemul este leziunea frecvent ntlnit alturi de grade diferite de depopulare.

6. DOZAREA CUPRULUI, MANGANULUI I ZINCULUI SERICBiochimia i biofizica - discipline de confluen ntre biologie i chimie sau fizic permit nelegerea fenomenelor biologice la nivel molecular i caracterizarea, din acest punct de vedere, att a proceselor fiziologice, ct i a celor patologice. In prezent, multe din strile patologice pot fi explicate prin modificrile proceselor metabolice sau prin apariia de metabolii noi, ce reprezint anomalii biochimice sau biofizice (53).

Depistnd asemenea perturbri, care sunt intim legate de esena procesului patologic, se poate stabili un diagnostic paraclinic. Acesta trebuie s devin unul dintre obiectivele investigaiei medicale, fundamentnd alegerea celor mai adecvate ci de prevenire i combatere a bolilor (52).

Se impune, astfel, necesitatea de a corobora i interpreta ntr-o concepie unitar date extrem de numeroase, privind tulburrile care stau la baza diverselor boli. Caracterul aplicativ al biochimiei i biofizicii este. astfel, bine condiionat i explic evoluia metodologiei experimentale i paraclinice, care reprezint un instrument absolut necesar complementar, pentru abordarea, investigarea i interpretarea la nivel molecular a proceselor specifice organismului n stri normale i patologice. Dezvoltarea n ultimul timp a unui numr impresionant de tehnici de laborator destinate stabilirii de parametri biochimici i biofizici aparinnd tuturor claselor de compui cu importan major n desfurarea proceselor metabolice din organismul animal, oblig pe cei interesai s utilizeze tehnici a cror valoare de diagnostic a fost confirmat(***).

Metodele pe care le vom prezenta sunt bazate pe principii clasice de analiz folosite n biochimia clinic accesibile laboratoarelor cu o dotare medie, fr tendina de a grei, cu condiia s se respecte ntocmai tehnica de lucru, i regulile generale ale cercetrii. Utilizarea acelorai tehnici va permite o uniformizare a metodologiei de lucru i de interpretare n domeniul diagnosticului veterinar.

6.1. Probele pentru examenelefzico-chimiceModul de prelevare a probelor biologice difer n funcie de specie i lichidul biologic de cercetat.Sngele este lichidul biologic cel mai utilizat n testele biologice.Prelevarea probelor de snge se face obinuit, prin puncia marilor vene, dup prealabila pregtire a locului de elecie (tundere, dezinfecie), i nainte ca animalul s-i consume tainul. La psri, prelevarea sngelui se face fie din vena subclavicular, fie prin puncie cardiac.Timpul scurs de la executarea stazei pn la prelevare nu trebuie s fie mai mare de dou minute, ntruct se produce hemoconcentratie local progresiv.Pentru recoltare se folosesc ace de unic folosin, iar recipientele n care se stocheaz sngele sunt eprubete a cror capacitate variaz n funcie de scopul urmrit. Pentru efectuarea numrtorilor hematologice sunt suficiente tuburile Wassermann cu anticoagulant, n timp ce pentru examenele din plasm i ser, se preteaz eprubete mai mari. Dintre anticoagulanii folosii amintim: oxalaii, citratul de sodiu, EDTA-ul (folosit pentru examenul morfologic al sngelui), i heparina care este anticoagulantul preferat pentru analizele biochimice ale sngelui.

Dac sngele se recolteaz n sering (seringi speciale cu anticoagulant), nainte de golirea acesteia, se scoate acul pentru a evita hemoliza sngelui, forat s treac prin ac, coninutul seringii fiind uor golit pe peretele tubului.

Tot pentru a evita hemoliza, transferul sngelui se va face n eprubete perfect curate i uscate, care vor fi nchise, deoarece evaporarea determin hemoconcentratii, constituind surse de erori. Hemoliza este una dintre modificrile sngelui dup prelevare, fcndu-l impropriu pentru examenul morfologic i biochimic.

Am observat, la psri, c uneori, chiar dac se respect toate condiiile pentru prevenirea hemolizei, aceasta poate totui s apar.

Pentru a preveni acest incovenient, noi recomandm umectarea n prealabil a pereilor eprubetei cu o soluie salin (ser fiziologic).

De asemenea, la psri, recomandm ca atunci cnd determinrile se fac n scop experimental sngerarea s se fac la alb ", deoarece pentru tot setul de determinri este necesar o cantitate mrit de ser, deci o cantitate mai mare de snge, care nu poate fi obinut la o simpl prelevare.

Sngele se individualizeaz, marcndu-1 numeric i nscriind pe tabelul anexat proveniena, specia, categoria de vrst sau starea fiziologic etc.

Pentru exprimarea serului probele vor fi meninute la temperatura camerei. Dup ce a avut loc coagularea, cheagul se decoleaz preferabil cu o baghet de sticl i se preleveaz serul recoltat.

6.2. Biochimia dozrii cuprului, manganului i zincului sericEste cunoscut c majoritatea constituenilor sangvini sau ai altor lichide biologice pot fi determinai cantitativ prin mai multe metode; n funcie de metoda de dozare utilizat rezultatele pot fi diferite. Am selecionat din multitudinea de metode, cele care au fost folosite n determinrile noastre.

Desigur, am inut cont de faptul c modificrile cantitative sau calitative ale constituenilor sangvini reprezint un revelator al strii de sntate deoarece ei reflect diverse leziuni, sau reacii de aprare din partea organismului.De asemenea, la interpretarea parametrilor hematologici am avut n vedere c legile homeostaziei limiteaz variaiile concentraiei diferiilor componeni, organismul apelnd iniial la rezervele interne, astfel c dup epuizarea acestora apar modificri ale unora dintre constantele " sangvine.

Intradevr, numeroase carene alimentare se repercuteaz asupra nivelurilor sangvine ntr-un timp mai mult sau mai puin ndelungat. De pild, furajarea carenat n cupru poate fi detectat n dou - trei luni, n cazul manganului mai tardiv, n timp ce zincemia reflect o stare momentan, deci a aportului de zinc prin nutre.

De aceea, considerm necesar c cele mai mici dereglri, fa de valorile normale, s fie luate n seam ns interpretate cu exigena cuvenit unor devieri reduse sau a cror reproductibilitate de grup nu este probat.

Mai considerm o coroborare a datelor biochimice cu cele citohematologiee, n scopul depistrii cu mai mult siguran a unor deficiene alimentare, reflectate aproape constant i pe citologia sangvin. Faptul este cu att mai necesar n cazul unor nutrieni ca Fe, Cu, Co, vitamina Bl2, E, C, sau acidul folie implicai prioritar n eritropoiez i hemoglobinogenez. Printre aceste carene n unul sau mai muli dintre nutrienii amintii se traduc nu numai prin variaii numerice, ci i prin modificri de form sau de mrime ale elementelor figurate sangvine.

De aici rezult c cele dou tipuri de investigaii, citemice i biochimice reuesc s se completeze sau pn la un punct s se confirme una pe cealalt.

Revenind la metodele de dozare pentru oligominerale, ce prezint interes n lucrarea noastr (Cu, Mn i Zn), toate laboratoarele lucreaz prin spectrofotometria de absorbie atomic (***).

Este o metod de determinare a concentraiei unui element chimic, prin msurarea absorbiei unei radiaii electromagnetice de o anumit lungime

de und, sub form de atomi uniform distribuii, ai elementelor din soluia care se cerceteaz. Drept mediu n care se elibereaz atomii din soluia de cercetat, se utilizeaz flacra produs de arderea unui carburant gazos, n care se pulverizeaz soluia pregtit din proba supus analizei.

Radiaia electromagnetic ce traverseaz modulul care conine proba este format de o surs special de radiaii denumit lampa cu catod scobit, catodul acestei lmpi fiind reprezentat de elementul ce trebuie determinat (Cu, Mn sau Zn).

CONCLUZII

n vederea elucidrii unor aspecte de etiopatogenez a oligodismineralozelor n Cu, Mn i Zn la psri, s-au efectuat cercetri de teren (epidemiologice, clinice, morfopatologice i experimentale) i de laborator (determinarea unor parametri metabolici, inclusiv a celor trei oligoelemente, examene histopatologice). Examenele clinice, au evideniat simptoame i sindroame de intensitate variabil, n funcie de lot, individ i vrst. Astfel, chiar dac nu s-au observat manifestri clinice caracteristice, ele au constat n: dezvoltare subponderal, deficiene conformaionale, reducerea apetitului, tulburri de comportament. Aceste semne au aprut n jurul vrstei de dou sptmni, s-au agravat treptat i s-au exprimat n final prin osteocondropatii i ndeosebi manifestri de hipotrepsie i perozis.

Modificrile anatomopatologice se suprapun n linii mari peste tabloul clinic. La puii de carne s-au constatat leziuni de nefrit interstiial, pancreatit edematogen, retinopatie distrofic, laringotraheit ulcerativ, modificri diatezice i de edem la nivelul muchilor scheletici i miocardului, hepatit seroas, enterit cataral, condroosteofibroz.

Carenele primare de aport insuficient prin raie au fost reprezentate de proteine, principii energetici, sruri minerale (inversare a raportului fosfo-calcic deficit n cele trei oligoelemente) i vitamine liposolubile.

1. In primul model s-au reprodus experimental carene n macrominerale (Ca, P, Mg) i n trei oligominerale (Cu, Mn, Zn). La loturile carenate n oligominerale, modificrile morfoclinice au fost similare cu cele din carena natural. Astfel, la lotul carenat n cupru, principala modificare morfoclinic a fost cardiomegalia, la cel carenat n mangan, evidente semne de peroz, iar la cel carenat n zinc simptomul frapant a fost cel de pene arse", la care se adaug ntrzierea schimbrii pufului infantil.

2.n cel de-al doilea model experimental, am introdus n raiaalimentar gru proaspt recoltat, n proporie de 45%, ce a determinat apariia la vrsta de 16-17 zile a tulburrilor de cretere i locomotorii.

Apariia i evoluia acestui sindrom a fost probabil influenat i de stresul consecutiv unor tratamente (cu coccidiostatice i antibiotice), precum i de vaccinarea contra bursitei infecioase. Evoluia sindromului a fost stopat prin suplimentarea raiei cu preparate mineralovitaminice i proteice.3.Determinarea parametrilor biochimici sangvini s-a fcut la broilerii din unitatea investigat epidemiologie ct i la loturile din primul experiment. Am determinat urmtorii parametrii: calciul, fosforul, cuprul, manganul, zincul, vitamina E, betacarotenul, acidul uric etc. Rezultatele obinute au artat c cele trei oligoelemente, care fac subiectul de studiu al lucrrii noastre, au fost sub limitele normale.

Se subliniaz faptul c semnificaia diagnostic a valorilor obinute la determinarea parametrilor biochimici denot carene primare ct i secundare, avnd n vedere c n condiii naturale tulburrile i manifestrile morfoclinice se datoresc unei cauzaliti polifactoriale.

4.Histopatologic se semnaleaz, n mod deosebit modificrile organelor limfoide primare (timus i bursa Fabricius) i secundare (splina, glanda Harder i diverticul Meckel) care influeneaz reactivitatea general a orga-nismului, ndeosebi pe cea imunologic, dup cum urmeaz:

In cazul carenelor, organele limfoide primare (timus i bursa Fabricius) sunt constant afectate, observndu-se edemul i depleia limfocitar;

Diferenierea care ar rezulta n cursul unei stimulri antigenice oarecare (antigene microbiene, din hran, medicamentoase) este absent; blastele limfoide i celulele secretoare de anticorpi nu sunt dect sporadic ntlnite;

In organele limfoide secundare (splin) s-a observat lipsa centrilor germinativi i depletia drastic a tecilor perielipsoidale;

Glanda Harder pstreaz individualitatea fa de organele limfoide primare (bursa Fabricius i timus) datorit prezenei plasmocitelor n numr relativ mare.

PAGE