LP 6

Dozarea ureei, creatininei si acidului uric / 2 ore

Dozarea ureei

Introducere

Ureea reprezinta produsul de excretie al amoniacului din organism.Amoniacul rezultat din catabolismul aminoacizilor este transformat

la nivelul ficatului in uree prin procesul de ureogeneza.

Ureea impreuna cu AA, creatinina, acid uric, polipeptide, reprezinta azotul neproteic total care nu este continut de proteine.

Metoda de dozare enzimatica cu ureaza Principiul metodei

Ureea este transformată in amoniac și dioxid de carbon sub actiunea ureazei.

Ionii de amoniu in mediu alcalin reactioneaza cu hipocloritul si salicilatul de sodiu formand un compus colorat in verde.Intensitatea culorii este direct proportionala cu concentratia ureei.

Tehnica de lucru

-se pregatesc 3 eprubete: martor (M), probă (P), standard (S);- se pipetează în eprubete conform tabelului:

Reactivi M S PR 1 (urează) 1 ml 1 ml 1 mlapă distilată 10 μlstandard 10 μlprobă 10 μlse agită și se incubează timp de 5 min la 37 grd CR 2 (hipoclorit, NaOH) 1 ml 1ml 1 ml

Se agită și se incubează 5 min la 37 grd CSe citesc extincțiile probei – Ep și standardului – Es față de martor la λ=578 nm.

CalculConcentrația probei = Ep / Es x Cs

mg uree / 100 ml ser = Ep / Es x Cs

undeCs = 50 mg/dl

Valori normale

Sange: 20 – 40 mg%

Urina 24 - 30 g/24 h

Variatii fiziologice

Varsta >60 ani – 50 mg%

La consumatori de carne – val. aproape de lim sup.

In ultimul trim de sarcina – val scazute – fatul consuma aa

Interpretarea variației valorilor

Valorile serice ale ureei sunt dependente de 3 factori: catabolismul proteic (aduse prin aport alimentar sau produse de catre organism), diureza (eliminare urinara), si capacitatea functionala renala.

Din acest motiv se cere ca rezultatele acestui test sa fie corelate cu rezultatele altor teste cum ar fi testarea creatinemiei si a acidului uric sanguin.

Variatii patologiceValori crescute

Cauze renale – glomerulonefrite, nefropatii tubulare, TBC renala, tumori renale, insuficienta renala acuta si cronica

Cauze extrarenale – hipercatabolism proteic, stari de toxicoza si soc datorate hemoragiilor, arsurilor, traumatismelor.

Valori scazuteInsuficienta hepatica grava

ACID URIC

Definitie

Acid organic care se gaseste in sange si urina, rezultand din arderea proteinelor. Este produsul final al degradarii purinelor libere: adenina, hipoxantina, guanina.

Patologia lui este in primul rand dominata de gută, boală specifică omului. Nivelul acidului uric in sange se numeste uricemie.

Acidul uric este produs prin degradarea unor substante chimice numite purine urinare, provenite din acidul dezoxiribonucleic (DNA) si intra in circulatia sangelui prin alimentatie sau prin distrugerea celulelor in organism. O mare parte din acidul uric este depozitat in urina de catre rinichi, restul fiind excretat prin fecale.

Daca o cantitate de acid este produsa in excces sau nu e indeajuns pentru a fi excretata, se acumuleaza, ducand la aparitia gutei - o inflamatie la nivelul articulatiilor.

Cele mai frecvente cauze pentru acumularea acidului uric sunt date fie de o tendinta genetica de a-l produce in exces, fie o disfunctionalitate la nivelul rinichilor.

Dozarea acidului uric cu uricazaPrincipiul metodei

Acidul uric este transformat in alantoină si apă oxigenată sub acțiunea uricazei.

Apa oxigenata sub actiunea peroxidazei si a unor compuși colorați formeaza un derivat de chinonă roșu violet.

Intensitatea culorii este direct proporțională cu concentrația de acid uric.

Tehnica de lucru

-se pregatesc 3 eprubete: martor (M), standard (S), probă (P)- se pipetează în eprubete conform tabelului:

Reactivi M S PR 1 + R 2 1 ml 1 ml 1 mlapă distilată 20 μlstandard 20 μlprobă 20 μl

Se agită și se incubează 5 min la 37 grd C

Se citesc extincțiile probei – Ep și standardului – Es față de martor la λ=520 nm.

CalculConcentrația probei = Ep / Es x Cs

mg acid uric / 100 ml ser = Ep / Es x Cs

undeCs acid uric = 60 mg/dl

Valori normale

In sange:       2,5 – 6,5 mg/100 ml ser la adulți; 1 - 3 mg/100 ml ser la copii;  

In urina:         0,25 - 0,8 g/urina 24 h la adulți; La copii sub 1 an, valoarea acidului uric este pana la 25

mg/kg corp/24h.

Variații fiziologice

Valoarea acidului uric variază in funcție de alimentatie, sex, varsta, factori genetici, diferite stari fiziologice (effort fizic, menopauza).

Alimentatia bogata in purine determina cresterea acidului uric in timp ce alimentatia saraca in purine produce o scadere pana la 0,8 mg / 100 ml sange.

La copii, acidul uric este mai scazut decat la adulti, la barbati valoarea lui este mai crescuta decat la femei, dar e relativ constant de-alungul vietii.

La femei, uricemia este mai mica inaintea menopauzei si mai mare dupa aceasta, cand poate atinge valorile prezente la barbati.

Variații patologiceValorile crescute se intalnesc in urmatoarele cazuri patologice:

Guta Insuficienta renala cronica Leucemie Boli infectioase Poliglobulie

Procese insotite de degradari tisulare precum si dupa radioterapie Tratamente cu medicamente antimicotice si antimetabolice Terapie cu ACTH sau hidrocortizon Toxicoza gravidica Intoxicatiile cu plumb si mercur   

Scăderi patologice: 

Valorile scazute ale uricemiei sunt mentionate in boala Wilson, dupa administrare de medicamente uricozurice in sindromul Tony-Debre-Fanconi, leziuni renale, afectiuni hepatice severe

DOZAREA CREATININEI: Principiul metodei, valori normale, variaţii patologice.

Creatinina este cel mai constant constituient azotat din sange, deoarece nu este influentat de regimul alimentar, efort fizic, etc. Variaza doar in functie de eliminarea sa renala.

Sinteza creatininei are loc in ficat si rinichi. Creatinina, ca si ureea, este eliminata prin urina. Ambele substante se gasesc in concentratii fiziologice constante in sange, care le transporta.

Concentratia de creatinina in urina poate fi utilizata ca valoare de referinta pentru excretia unor analiti (albumina, alfa-amilaza).

Determinarea creatininei prin metoda Jaffe

Principiul metodei

Creatinina reduce acidul picric, in mediu puternic alcalin, la acid picramic de culoare galben-portocalie, fotocolorimetrabil.

Intensitatea culorii este direct proportionala cu concentratia de creatinina.

Tehnica de lucru - se pregatesc 3 eprubete: martor (M), standard (S), probă (P)- se pipetează în eprubete conform tabelului:

Reactivi M S Papă distilată 0,5 ml - -standard - 0,5 ml -probă - - 0,5 ml

solutie acid picric 1,5 ml 1,5 ml 1,5 mlsolutie NaOH 10% 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml

Se agită și după 20 min se citesc extincțiile probei – Ep și standardului – Es față de martor la λ=530 nm.

CalculConcentrația probei = Ep / Es x Cs

mg creatinină / 100 ml ser = Ep / Es x Cs

undeCs creatinină = 1 mg/dl

Valori normale

In sange: La adulti: 0,5-1,2 mg creatinina la 100 ml La copii: 1,2 mg creatinina la 100 ml

In urina: 1,0 - 1,5 g creatinina / 24h

Variații patologice

Valorile crescute ale creatininei sunt prezente in ser si in urina.

In ser, creatinina are un nivel ridicat in: insuficienta renala cronica distrofia musculara progresiva eclampsie acromegalie

In urina: acromegalie diabet hipotiroidism

Creșteri ale creatininei mai pot aparea in : afectiuni extrarenale cu diaree, varsaturi, transpiratii profuze postoperator in interventii de urgenta șoc, politraumatisme dezordini metabolice, diabet zaharat, hiperuricemie mielom

sarcina tratamente cu droguri toxice renal

Scaderi patologiceHipocreatinemia se intalneste in:

insuficienta renala cronica afectiui musculare hipertiroidism