histologie lp 1

39
HISTOLOGI HISTOLOGI E E Lucrare Lucrare practic practic ă ă 1 1

Upload: istrate-iuliana

Post on 12-Sep-2015

306 views

Category:

Documents


7 download

DESCRIPTION

histo

TRANSCRIPT

  • HISTOLOGIELucrare practic 1

  • HISTOLOGIAtiina care se ocup cu studiul structurii microscopice a celulelor, esuturilor i organelor

    Compartimente: Citologia Histologia general: studiul esuturilorHistologia special: studiul organelor: org. tubulo-cavitare, org. parenchimatoase

    Legturi: Biologia celular Histopatologia

  • HISTOLOGIARamuri: Histologia de diagnostic Obine continuu date privitoare la structura i funcia unui anumit esut sau organ

    Histologia de cercetare Evideniaz i studiaz: - o categorie celular / tisular nedescoperit nc - modul de comportament al celulelor i esuturilor n condiii fiziologice i patologice neexplorate

  • HISTOLOGIA

    ESUTURILEStructuri supracelulare alctuite din celule unite ntre ele printr-o substan intercelular Celulele ndeplinesc n organism aceeai funcie sau acelai grup de funcii.4 categorii de esuturi: epitelial, conjunctiv, muscular, nervosesuturile alctuiesc ORGANE

  • Metode de studiere a celulelor i esuturilor

    Metode utilizate n practica clinic

    Metode utilizate n cercetare

  • I. Metode utilizate n practica clinic

    Coloraia uzual Hematoxilin-eozinColoraiile specialeExamenul microscopic extemporaneuColoraiile imunohistochimice

  • Preparatul microscopicTotalitatea obiectelor pregtite pentru a fi examinate la aparate optice mritoare n vederea studierii structurii lor.Componentele: ObiectulSuportul: lamaLamela Sunt de 2 tipuri: extemporanee i permanente

  • Preparatul microscopic I. RecoltareaBiopsie NecropsieDe la animale

  • Preparatul microscopic RecoltareaExcizia Incizia Rezecia Puncia biopsie

  • Preparatul microscopicII. FixareaPiesa e introdus n fixatori care previn degradarea enzimatic (autoliza) i pstreaz intact structura tridimensional a esutului.

    Formaldehida

    Fixatorii acioneaz asupra proteinelor din esuturi prin 3 mecanisme: denaturare, coagulare i precipitare

  • Preparatul microscopicFixarea Aspectul unui fragment de esut dup fixare

  • Preparatul microscopicIII. Splareandeprteaz excesul de fixatorSe face cu ap sau alcool (deshidratarea)

    Decalcificarea Preparatele de os sau dinteSe face cu acizi i rini schimbtoare de ioni sau prin electroliz

  • Preparatul microscopicIV. Includerea n parafinPiesa e mbibat i nglobat ntr-o substan solidificabil, denumit mas de includere.Piesa devine rigid i poate fi secionat n felii de ordinul m (5m).

    Aceast secionare este necesar pentru a permite luminii s treac prin preparatul microscopic i apoi s ajung la ochiul obsevatorului, care va examina imaginea microscopic a esutului

  • Preparatul microscopicIncluderea n parafinEtape: Deshidratarea- introducerea n bi de alcool de concentraii crescnde alcoolul va nlocui apa din esut;Clarificarea cu solveni organici (xilen, toluen) miscibili att n alcool ct i n parafin, vor scoate alcoolul din esutmbibarea cu parafin: parafina topit intr n celule esutul va fi complet inclus n parafina care se va ntri i va forma un bloc solid ce conine esutul;Includerea propriu-zis

  • Preparatul microscopicIncluderea n parafin

    esuturi incluse n blocuri de parafin

  • Preparatul microscopicV. Secionarea

  • Preparatul microscopicSecionarea

  • Preparatul microscopicVI. Colorarea Evideniaz elementele structuraleColoranii histologici se fixeaz pe anumite componente structurale Colorani artificiali: derivai din hidrocarburi aromatice i, n funcie de natura cromoforului, pot fi: Bazici: albastrul de metilen, albastrul de toluidin, fuxina bazicAcizi: eozina, fuxina acid, eritrozina, orange GNeutri: eozinatul de azur de metilenIndifereni: Sudan III, Scharlach RothColorani naturali: carminul, hematoxilina, orceina

  • Preparatul microscopicColorarea BazofilieAcidofilieNeutrofilie Termeni care se refer la afinitatea tinctorial (de coloraie) a diferitelor elemente fa de baze, acizi sau substane neutre.

  • Preparatul microscopicColorarea Clasificarea coloraiilorDup electivitate: difuze i electiveDup modul de aciune: directe i indirecteDup procedeul de executare: progresive i regresiveDup numrul de colorani folosii: simple i combinate: succesive sau simultaneColoraia ortocromaticColoraia metacromatic

  • Preparatul microscopicColoraia HEColoraie uzual (95% din lame); e o metod direct, progresiv, combinat, succesiv, ortocromatic.

    Hematoxilina-colorant bazic- coloreaz n ALBASTRU structurile bazofile: acizii nucleici- ADN-nucleu; ARN- ribozomiEozina colorant acid- coloreaz n ROU structurile acidofile sau eozinofile: proteinele n citoplasm i n matricea extracelular

    Structurile cu coninut ridicat de substane lipidice (celule adipoase, mielina) rmn optic vide;

  • Preparatul microscopicColoraia HECelulele: funcia biochimic i distribuia elementelor componente.

    Nucleii Celulele tinere sau/i active metabolic, prezint nucleii eucromi sau hipocromi (eucromatina este palid). Celulele adulte sau mbtrnite, cu activitate metabolic redus, au nuclei hipercromi (heterocromatina inactiv se coloreaz intens bazofil)

  • Preparatul microscopicColoraia HECitoplasmaCelulele care sintetizeaz proteine conin numeroi ribozomi liberi i RER bine dezvoltat i prezint un aspect bazofil al citoplasmei (H coloreaz ARN din ribozomi n albastru)Celulele implicate n transportul de ioni conin numeroase mitocondrii i prezint un aspect eozinofil al citoplasmei (E coloreaz proteinele cationice: citocromii n rou). Fibrele musculare au aspect intens eozinofil datorit fixrii eozinei pe proteinele contractile din miofibrile.

  • Preparatul microscopicColoraia HE

  • Preparatul microscopicColoraia HE

  • Preparatul microscopicColoraii specialeTricrom Masson, tricrom Mallory - pune n eviden es. conjunctivFibrele de colagen se coloreaz n verde, respectiv albastru

  • Preparatul microscopicColoraii specialeRezorcin Fuxin Weigert: fibrele elastice sunt colorate n violet nchisOrcein: fibrele elastice sunt colorate n maro nchisRFWOrceina

  • Preparatul microscopicColoraii specialeImpregnarea argentic: pune n eviden fibrele dereticulin, neurofibrilele din neuroni (maro/negru) i cimentul intercelular n epiteliiFicat-impregnare argenticesut nervos- impregnare argentic

  • Preparatul microscopicColoraii specialeSudan III, Sudan negru, Scharlach Roth- folosite pentru a pune n eviden lipidele n esuturi, pe care le coloreaz n galben, negru i respectiv rou.!!! Fragmentele de esut nu sunt preparate cu solveni organici, pentru a nu dizolva subst. lipidice.

  • Preparatul microscopicColoraii specialeColoraia PAS (Periodic Acid Schiff)Coloreaz carbohidraii n roz intens. Evideniaz membrana bazala epiteliilor.

  • Preparatul microscopicColoraii specialeAcidul osmic- coloreaz n brun/negru substanele lipidiceEvideniaz teaca de mielin

  • Preparatul microscopicColoraii specialeHematoxilina Feric Heidenheim- coloreaz n negru miofibrilele i evideniaz aspectul striat al fibrelor musculare.

  • Preparatul microscopicColoraii specialeesutul osos compact lefuit, montat n balsam de Canada !!! Preparat necolorat

  • Preparatul microscopic VII. Montarea

    VIII. Etichetarea

  • Preparatul microscopicExamenul extemporaneu (la ghea)Permite un diagnostic rapid (15-20 min), care orienteaz decizia terapeutic chirurgicalFrecvent utilizat n chirurgia oncologicNu are precizia examenului histologic clasic

  • Preparatul microscopic-examenul extemporaneu-

  • Imunohistochimia-principiu-Utilizeaz principiul antigen-anticorp (Ag-Ac) pentru a identifica prezena/absena unor proteine specifice la nivelul esuturilor.

    antigen cautatanticorp primar (invizibil)anticorp secundar (brun)

  • ImunohistochimiaImunoperoxidaz Imunofluorescen

  • II. Metode utilizate n cercetareSEM - scanning electron microscopy

    Imunoperoxidaz: Glanda tiroid: evidenierea calcitoninei n celulele parafoliculareImunofluorescen: esut epitelial infecie cu HPV: cu roz e marcat ADN-ul HPV n celulele epiteliale, nucleii celulelor apar albatri, citokeratina din celule e evideniat n verde. *