**UNIVERSITATEA DIN BUCURESTICOAGULAREA SANGELUICICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIEMETABOLISMUL TESUTURILOR SPECIALIZATECurs 25

**Structuri biologice implicate in coagularea sangelui~ Peretele vascular la nivelul caruia apare o bresa vasculara ~ Endoteliul vascular~ Factorul von Willebrand (vWF)~ Plachetele sangvine

**Peretele vascularT.intima un singur strat de celule endoteliale (EC) sudate de o matrice extracelulara polizaharidica, inconjurat de un strat subtire subendotelial, de t. conjunctivT.media fibre elastice aranjate circular, t. conjunctiv, polizaharide, bogate in celule ale musculaturii netede vasculare (VSMC)

T.adventitia constituita din tes conjunctiv, bogat in nervi si vase sangeReglarea fluxului sangvin asigurata de un sistem nervos autonomVasoconstrictia prin contractia musculaturii netede vasculare; factori vasoconstrictori paracrini (prostaglandinele), endocrini (vasopresina si angiotensina) si neurotransmitatori .Vasodilatatia mediata de mediatori antagonisti, cel mai important oxidul nitric (endothelium derived relaxing factor)

**Endoteliul vascular- interfata metabolic activa intre sange si tesuturi extravasculare, barier de permeabilitate selectiv, ce actioneaza ca un filtru selectiv ce regleaza pasajul gazelor, fluidelor si a diferitelor molecule

-celulele endoteliale (EC) in repaus au proprietati anticoagulante si antitrombotice prevenind aderarea celulelor sangelui la suprafata luminala a vasului de sange

In stare de repaus, EC exprima inhibitori ai adeziunii plachetaresi ai coagularii. Proprietatile anti-trombotice ale EC sunt conferite de ncarcarea negativa a suprafetei, aranjamentul fosfolipidelor si glicoproteinelor membranare care nu permit agregari

** EC pot fi activate de diferiti stimuli ca histamina eliberata la situsul leziunii, citokine proinflamatorii (TNF-, IL-1), lipopolizaharide bacteriene (endotoxine), infectii virale sau hipoxie, cand ele prezinta proprietati procoagulante si proinflamatorii. Este cunoscut ca anticorpii antifosfolipide APLA (antiphospholipid antibodies) se leaga la EC activate intr-o maniera similara conduc la EC cu un fenotip procoagulant

**PG proteoglicani; PL phospholipide; TF tissue factorActivarea endoteliala conduce la disparitia proprietatilor anticoagulante caracterizata prin unele modificari

EC in repausEC activateProstacicline si NO (+)NO (-)Inhibitorul caii TF (+)TF (+)PG sulfatati tip heparan (+)PL anionice la suprafata (+)Trombomodulina (+)Trombomodulina (-)Receptorul proteinei C endoteliale (+)Expresia unor receptori ai proteazelor de suprafataProteina S (+)Receptori ai moleculelor de diviziuneActivatorul plasminogenului tip tisular (+)Inhibitorul tip I al activato-rului plasminogenului (+)Anexina V (+)Ecto-ADPaza si adenozina

** Din punctul de vedere al coagularii sangelui, ECs inactive elaboreaza inhibitori ai plachetelor sangvine (PS) ce le mentin in circulatie intr-o forma inactiva: oxidul nitric si prostacicline. Endoteliul intact reprezinta o bariera ce separa plachetele de substrate adezive de tipul colagenului din tesutul conjunctiv subendotelial. Lezarea endoteliului conduce la activarea EC si PS, ce permite contactul si aderarea PS la matricea subendoteliala. Prostaciclinele si oxidul nitric NO (endothelium-derived relaxing factor) sunt sintetizati si eliberati de EC inhiband sinergic agregarea plachetara si actionand ca vasodilatatori. In plus, NO are efecte antiadezive si antioxidative. In activarea EC nivelul NO scade In cazul EC activate se observa cresterea expresiei unor molecule de adeziune de pe suprafata EC: E-selectina, ICAM-1 si -2 (intracellular adhesion molecule), VCAM-1 (vascular cell adhesion molecule), ceea ce creste adeziunea monocitelor, leucocitelor.

** Alte modificari in EC activata: cresterea expresiei unor receptori pt proteaze de pe suprafata EC: ceea ce faciliteaza formarea unor complexe enzimatice implicate in coagulare si fibrinoliza cresterea suprafetei anionice a EC si a nivelului fosfolipidelor (PL) cofactori a sistemului de coagularecresterea expresiei factorului tisular TF (Tissue factor) o proteina transmembranara, pe EC stimulate, ce reprezinta un inductor fiziologic al coagularii normale Endotelul vascular intact, normal, nu iniiaz agregarea PS, deoarece elementele esutului conjunctiv nu sunt expuse, iar activatorii de tipul ADP sunt degradai rapid (ecto ADPaza) sau nu sunt n concentraii suficiente pentru a-i manifesta activitatea. Una dintre modificarile EC cele mai importante pentru coagularea sangelui este eliberarea factorului Von Willebrand factor (vWF) din granulele de stocare (corpi Weibel-Palade) ca raspuns la trombina, care participa la adeziunea plachetelor sangvine

**Factorul lui von Willebrandt glicoproteina multimerica, prezenta n plasma sangvina, produsa constitutiv n endoteliu, granulele ale PS si tesutul conjunctiv subendotelial mediaza adeziunea plachetelor la situsurile leziunii vasculare (colagen) i stabilizeaza factorul de coagulare VIIIFiecare monomer conine un numar de domenii specifice cu functii specifice: - Domeniul D/D3 leaga Factorul VIII - Domeniul A1 leaga Glicoproteina Ib (receptor) de pe plachete, heparina si posibil colagen - Domeniul A3 leaga colagen - Domeniul C1 are secventa RGD prin care se leaga la integrina IIB3 - Domeniul cysteine knot (de la capatul C-terminal al proteinei)Monomerul vWF2050 am acizi

**monomerii vWF sunt:N-glicozilati, aranjati n structura dimera n RE si n multimeri n aparatul Golgi, cros-linkati prin resturi de Cys (legaturi disulfurice) multimerii vWF au >20.000 kDa si constau din peste 80 subunitati de 250 kDa fiecare singurii functionali vWF actioneaza ca o punte ntre suprafata plachetelor si fibrilele de colagen expuse pe endoteliul lezat Exista maladia vWF cea mai comuna cauza de sangerare ereditara

**In stare inflamatorie, leucocitele adera la endoteliu si sufera chiar transmigrarea prin el (diapedesis).Chemoatractia recunoasterea unui agent patogen, macrofagele rezidente in tesutul afectat elibereaza citokine (IL-1, TNF-) si chemokine care induc exprimarea unor molecule de adeziune celulara (selectine) la suprafata celulelor EC Rolling adhesion liganzii selectinelor de pe leucocitele circulante leaga selectinele de pe interiorul vaselor sange cu afinitate mica astfel ca leucocitele se deplaseaza prin rostogolire rezultatul unor interactii si disocieri tranzitorii Tight adhesion chemokinele eliberate de macrofage activeaza leucocitele care exprima integrine ce se vor lega puternic la receptori complementari de pe suprafata celulelor endoteliale. Deplasarea leucocitelor este opritaTransmigrarea are loc reorganizarea citoscheletului leucocitelor ceea ce strapunge stratul EC, sunt implicate proteine PECAM (platelet/endothelial cell adhesion molecule) de pe suprafata celulelor endoteliale si a leucocitelor, proteaze secretate de leucocite care degradeaza membrana bazala, etc.

**Plachetele sangvine (PS)PS sau trombocitele sunt fragmente celulare cu forma discoidala (2-4 m) produse in maduva osoasa din niste celule uriase megakariocite (sufera mitoza de 7 ori fara a suferi diviziune nucleara sau citoplasmatica), fara nucleu, citoplasma contine mitocondrii, RE neted, granule umplute cu citokine si proteine implicate in coagulare

**T1/2 a unei PS de cca 10 zile, dupa care sunt distruse in sistemul RE. Ele circula in fluxul sangvin intr-o stare inactiva datorita in principal suprafetei celulare incarcata negativ ceea ce limiteaza interactiile cu eritrocitele, leucocitele si endoteliul vascular

PS contin 2 tipuri de granule: granule si corpusculi densiGranulele contin: PDGF (platelet derived growth factor), factorul plachetar 4, fibronectina, fibrinogen, vWF, factorii de coagulare V si XIIICorpusculii densi contin serotonina, ADP si CaPS mai contin lizozomi bogati in enzime hidrolitice cu rol in digestia debriurilor celulare rezultate in urma ranirii/vindecarii ranilor

**a) PS circulante sunt mentinute in stare inactiva de prostaciclinele si oxidul nitric (NO) eliberate de celulele endoteliale ce captusesc peretii vaselor de sange. Celulele endoteliale exprima CD39 pe suprafata lor, care inhiba activarea PS prin transformarea ADP un puternic inductor al activarii plachetare in AMPb, c) In cazul unor brese vasculare, PS adera (prin receptorii lor integrine 2 1, glicoproteina Ib-IX (GP Ib-IX) si integrina 51) la colagenul, factorul von Willebrand si fibronectina din subendoteliul expus. Trombina si ADP produc modificari in forma PS cu formarea unei conformatii active

**d) PS activate secreta ADP, PDGF si fibrinogen stocate in granulele , precum si tromboxan A2 sintetizat rapid ca urmare a activariiADP si TXA2 induc modificarea formei PS circulantee) Glicoproteina IIb/IIIa receptori de pe suprafata PS activate leaga fibrinogenul conducand la formarea unor punti de fibrinogen intre diferite PS conducand la agregarea plachetaraProcesul de agregare plachetara are loc concomitent cu formarea unei retele de fibrina (nu este aratat) ce conduce la formarea trombusului plachetarf) Retractarea cheagului conduce la formarea unui trombus stabil

**In activarea PS sunt implicate si integrinele: ex. Integrina 11 mediaza adeziunea PS la colagenul subendotelial via vWF; integrina 51 este implicata in recunoasterea/legarea fibronectinei, etcIn agregarea plachetara este implicat si factorul lui von Willebrand in adeziunea plachetelor la peretele lezat al vasului de sange

**Activarea PS implicaModificarea formei, creste suprafata PSSecretia de mediatori proinflamatorii, protrombotici, adezivi si chemotactici ce isi propaga si amplifica semnalulActivarea receptorului GP IIb/IIIaTXA2, ADP, trombina, serotonina, epinefrina si colagenul activeaza PSAspirina inhiba productia TXA2 prin efectul ei asupra ciclooxigenazei 1 (COX). Clopidogrel si Ticlopidina previn legarea ADP la receptorEfectele aspirinei si clopidogrelului sunt sinergice si previn agregarea plachetara

**Ca urmare a aparitiei unor brese vasculare, pe suprafata PS activate sunt expusi un numar mare de receptori ce induc semnale intracelulare ce conduc la agregarea plachetara

**

**PS iau parte la mecanismele coagularii sangelui oferind o suprafata activa pe care au loc multe reactii enzimatice, printre care activarea factorului II (protrombina) si a factorului X (Stuart) de coagulare

**Pe suprafata PS exista receptori cuplati cu proteine G: PAR (protease activated receptors) cuplati cu proteine Gq, G12 si Gi. Trombina (Ser-proteinaza similara tripsinei) scindeaza PAR intre Arg41-Ser42 ceea ce expune la suprafata PS noi structuri- tethered ligand conducand la activarea PS. Implicarea PS in formarea trombusuluiImplicarea factorilor de coagulare in activarea PSIn PS are loc sinteza TXA2 si PGI2

**PLC fosfolipaza C; PLA2 fosfolipaza 2; PIP2 fosfatidil inozitol 4,5-bis fosfat; IP3 inozitol trifosfat; DG diacilgliceroli; Tx -tromboxanSemnalizarea in activarea PSinitiata prin legarea trombinei la receptori specifici de pe suprafata PS ce induce o cascada de semnalizare Proteina G PLC PIP2 IP3 si DAGDAG activeaza PKC, care fosforileaza pleckstrina, ce promoveaza eliberarea ADP din granulele secretoriiIP3 induce eliberarea Ca2+ din rezervele celulare, care activeaza PLA2 ce elibereaza acidul arahidonic din fosfolipide, din care se formeaza TxA2Aderarea colagenului la PS induce aceleasi efecte: eliberarea Ca2+ intracelular, activarea PLA2, formarea acidului arachidonic si apoi a TxA2Eliberarea Ca2+ intracelular activeaza enzima MLCK (myosin light chain kinase); ce fosforileaza catena L a miozinei, ce interactioneaza cu actina - alterarea morfologiei si motilitatii PS

**HemostazaMentinerea unui echilibru intre starea fluida a sangelui si coagularea lui este o conditie esentiala pentru supravietuireHemostaza incetarea pierderii sangelui printr-un vas de sange lezat prin formarea unui dop fibrino-plachetar care astupa bresa vascularaHemostaza se realizeaza prin 4 mecanisme: (1) vasoconstrictia; (2) formarea dopului plachetar (adeziunea PS la situsul leziunii, degranularea, cresterea gradului de agregare plachetara), (3) coagularea sangelui si (4) indepartarea cheagului de sangeFiziologic, hemostaza are trei etapeA. Hemostaza primara (timpul vasculo-plachetar) in care intervin factori vasculari si pachetari;B. Hemostaza secundara (timpul plasmatic\coagularea);C. Faza de retractie a cheagului (timpul trombodinamic)

**A. Hemostaza primaraIn desfasurarea hemostazei primare se deosebesc 4 faze: A1) faza modificarilor hemodinamice locale (reologice) ale fluxului sanguin: A2) aderarea plachetara la locul leziunii vasculare; A3) agregarea plachetara; A4) metamorfoza vascoasa a plachetelor agregate.A1) Faza modificarilor hemodinamice ale fluxului sangvinVasoconstrictia vasului lezat, mentinuta prin eliberarea din PS aderate a TXA2, serotoninei si epinefrinei diminueaza fluxul sangvin local si productia factorului vasoactiv endotelina la nivelul endoteliuluiDezvoltarea unor vase colatertale in vecinatatea vasului lezat ce preiau sangele ce iriga acea zona evitand leziunea

**A2) Aderarea plachetara la locul leziunii vasculare Suprafata vasculara lezata prezinta colagen expus si alte proteine adezive Aderarea PS se realizeaza prin interactii electrostatice intre plachetele incarcate negativ si sarcinile pozitive ale colagenuluiAderarea unui numar relativ mic de PS la situsul leziunii proces pasiv ce nu necesita consum de energie se realizeaza prin intermediul vWF care se fixeaza pe receptori specifici aflati in structura colagenului vascular, ceea ce produce modificari conformationale in structura sa care determina ca celalalt capat sa se ataseze la receptori specifici prezenti pe membrana celulei endoteliale colagenvWFPS

** Se stabilesc contacte multiple si punctiforme intre PS aderate, in special prin pseudopodele emise. In acest proces este implicat segmentul intracitoplasmatic al GP1b, care activeaza diferite sisteme enzimatice, ca a) PLA2 care conduce la sinteza de tromboxani (nu eliberare de TxA2 din granulele dense) si b) PLC care declanseaza cascade de semnalizare dependene de IP3 (mobilizare Ca2+ din granulele dense) si DAG (activare PKC). Cresterea nivelului citoplasmatic al Ca2+ conduce la activarea trombosteninei (proteina contractila - componenta a citoscheletului PS, implicata in emiterea de pseudopode). Activarea PLC induce fosforilarea/ activarea receptorilor membranari implicati in agregare (glicoproteinele GP IIb /GP IIIa), dintre care unul este un receptor pentru fibrinogen. Rezultatul formarea unui dop plachetar ce nu este inca perfect hemostatic, intre pseudopodele PSs agregate exista spatii prin care sangele nu poate circulaA3) Agregarea plachetara

**De fapt mersul evenimentelor este: 1. Adeziunea PS; 2. Activarea PS (secretia, modificari citoschelet, flux Ca2+) si 3. Agregarea PS

** In paralel cu hemostaza primara incepe activarea cascadei coagularii (hemostaza secundara) in cadrul careia: protrombina trombina fibrinogenul fibrina Trombina actioneaza si asupra suprafetei PS unde se fixeaza la receptorii trombocitari (GP V) ce are ca rezultat cresterea permeabilitatii membranei bazale pentru ionii de Na+.

Pe baza gradientului de concentratie, Na+ intra din spatiul extracel in PS, ceea ce atrage osmotic cantitati suplimentare de apa, conduce la o stare de hiperhidratare, creste volumul PS si se inchid ochiurile dintre pseudopode Dopul plachetar devine hemostatic In plus, puntile de fibrinogen se transforma in fibrina, care se leaga la colagenul vascular prin receptori pentru fibrina, iar dopul devine mai puternic aderatA4) Metamorfoza vascoasa a plachetelor sangvine

**A2A1BB. Hemostaza secundara

** Modelul clasic al coagularii sangelui (CS) implica o cascada proteolitica de reactii de activare a unor zimogene prin reactii de proteoliza limitata. In fiecare etapa pot fi implicate: (a) o proteaza (din stadiul precedent) (b) un zimogen (c) un cofactor proteic neenzimatic (d) ioni de calciu (e) o suprafata de organizare (furnizata de o emulsie de fosfolipide in vitro sau de plachetele sangvine in vivo)In finalul acestei cai se produce trombina care transforma fibrinogenul-solubil in fibrina-insolubila, ce stabilizeaza dopul plachetar

Generarea trombinei se poate realiza pe 3 cai: intrinsica si extrinsica ce reprezinta cai alternative pentru generarea factorului X si o cale finala comuna ce are ca rezultat formarea fibrinei

1. calea intrinseca - lenta [minute]/activarea componentelor are loc cand sangele ntilneste o suprafata anormala, nefiziologica;2. calea extrinseca - rapida [sec.]/ activarea comp. are loc la lezarea tesutului, datorita unor substante eliberate la locul leziunii.

**Caile alternative de coagulare a sangelui

**Formarea cheagului de fibrina la situsul leziuniiTrombinaFibrinogenFibrina monomerFibrina polimerTrombinaFactor XIIIXIIIaFibrinogenul (FC I, zimogen) este transformat in fibrina monomera, sub actiunea trombinei ce indeparteaza 2 peptide. Monomerii de fibrina polimerizeaza cap-coada formand o structura polimera cheag instabil de fibrina.(solubil). Ce sufera ulterior o inretelare covalenta sub actiunea FC XIIIa, cu formarea cheagului stabil de fibrina (insolubil)Ca2+

**Fibrinogen (factor I) Fibrina monomer Fibrina polimer Fibrina polimer cross-linkedFibrinogenul (Factorul I de coagulare)

~ proteina plasmatica 2-3 % din totalul proteinelor plasmatice~ formata din 6 catene: 2 catene A (610 aa), 2 catene B (461 aa) si 2 catene (411 aa) si din 2 perechi de oligozaharide N-legate~ are o structura hexamera (A)2(B)22 stabilizata prin punti S-S, n reg N-terminala~ pliata in 3 domenii globulare, doua la capete (incarcate negativ) si unul in centru (stabilizat prin punti S-S-) separate prin regiuni cu configuratii like-rodA si B fibrinopeptide N-terminale de 16- si 14-resturi aminoacizi scindate de trombina cu formarea fibrinei monomer 222

**

** Trombina scindeaza fibrinopeptidele A si B, N-terminale (niste excrescente ncarcate negativ), domeniul central devenind ncarcat pozitiv: n (A)2(B)22 n 222 (222)n monomer fibrina cheag fibrina2 nA + 2 nBMonomerii de fibrina sufera un proces de agregare cu formarea retelei de fibrina soft. Prin inretelarea covalenta (leg izopeptidice) dependenta de factorul XIII de coagulare (transglutaminaza) rezulta fibrina hard

**zimogen o singura catena de 72 kDa - 582 resturi de aminoacizi, cu 10 resturi Gla n regiunea N-terminala, la care se leaga Ca2+ si cu un continut de 12 % glican (deci este o glicoproteina)Protrombina factorul de coagulare IIResturile Gla (-carboxi-glutamil) rezulta din carboxilarea Glu, vit K dependenta, catalizata de o carboxilaza microzomala - necesare pentru interactia cu fosfolipidele incarcate negativ de la suprafataDomeniile Kringle din proteine se formeaza prin stabilizarea unor motive loop mari prin 3 punti disulfurice importante in interactiile proteina-proteina; gasite in factori de coagulare si proteine fibrinolitice

**circula prin plasma (~5-10 mg/dL) ca un zimogen este formata din protrombina in urma scindarii a doua legaturi peptidice Arg271-Thr272 si Arg320-Ile321 sub actiunea factorului de coagulare Xa (Stuart) inglobat intr-un complex protrombinazic constituit prin asamblarea reversibila a Factorului Xa (Stuart) activat Cofactorului proteic Va (proaccelerina) - se leaga la receptori specifici de pe suprafata PS activate si formeaza un complex cu protrombina si factorul Xa Fosfolipidelor plachetare (fosfatidil inozitol si fosfatidil serina) Ca2+ faciliteaza legarea protrombinei la complexul protrombinaza de pe suprafata membr. lezateTrombina (factorul II a)

**-trombina este o Ser-endopeptidaza like tripsina, ce contine o catena A (ligth) de 6 kDa si o catena B (heavy) de 31kDa, unite printr-o punte S-S-. Catena B poarta partea glican fiind N-glicozilata la 3 situsuri Asn. Trombina contine, de asem, resturi Gla In anumite conditii are loc digestia autolitica a -trombinei cu formarea izoformelor - si dar lipsite de activitate fibrinolitica.

**Resturile Gla se gasesc in structura factorilor de coagulare II, VII, IX si X care sunt niste endopeptidaze sintetizate sub forma unor zimogene.In timpul -carboxilarii vitamina K se oxideaza. Reducerea ei se realizeaza ulterior printr-o reactie NADH dependenta care este inhibata de warfarina- anticoagulat care previne sinteza acestor factori

**Etapele comune ale coagularii sangelui

**

**Un cheag de sange se formeaza in urma unei cascade de proteolize limitate la care participa circa 20 compusi 7 factori de coagulare II, VII, IX, X, XI, XII si prekalikreina3 cofactori: IV (Ca2+), V si VIIIUn receptor: III (factorul tisular) receptor pt VIIaUn substrat: I fibrinogenul

*Prof. Dr. Dana Iordachescu*Component RolFactori plasmaticiI Fibrinogen precursor al fibrineiII Protrombina precursor al trombinei ce transforma fibrinogenul in fibrina; trombina activeaza factorii V, VIII, XI si XIII; trombina se leaga la trombomodulina ce activeaza proteina CV Proccelerina precursor al factorului Va ce este cofactor al enzimei Xa si participa la formarea complexului Xa/Va/fosfolipide ce activeaza protrombina; este prezenta in granulele ale plachetelor sangvine; factorul Va este inactivat de proteina C activa in complex cu proteina SVII Proconvertina se leaga la factorul tisular (TF), este activata si participa la formarea complexului VIIa.TF ce activeaza factorii IX si XVIII Factor A factorul activ VIIIa participa la formarea complexului antihemolitic IXa/VIIIa/fosfolipide ce activeaza factorul X; este inactivat de proteina C activata in complex cu proteina S (factorul Va); circula in plasma legat de factorul vW

Prof. Dr. Dana Iordachescu

**Component RolIX Factor Christmas in forma activata este enzima IXa, participa la com- plexul IXa/VIIIa/fosfolipide ce activeaza factorul XX Factor Stuart-Prower in forma activata este enzima Xa, participa la com- plexul Xa/Va/fosfolipide ce activeaza protrombinaXI Plasma thromboplastin in forma activata XIa, activeaza factorul IX intr-o antecedent reactie ce nu necesita decat ioni de Ca2+Prekalikreina, factor Fletcher participa la activarea kalikreinei de factorul XIIa; kalikreina catalizeaza activarea factorului XII la XIIaHigh mol wt kininogen, circula ca un complex bimolecular cu prekalikreinafactor FitzgeraldXII Factor Hageman, este activat la XIIa de catre kalikreina sau alti factori;factor de contact XIIa activeaza prekalikreina si factorul XI inducand calea intrinseca in vitro

**Component Rol

XIII Factorul de stabilizare activat de trombina, XIIIa catalizeaza formarea de legaturia fibrinei peptidice dintre moleculele de fibrina, stabilizand cheagulProteina C activata de trombina, leagata la trombomodulina, inhiba prin proteliza activitatea factorilor VIIIa si Va intr-o reactie care necesita proteina S si fosfolipideProteina S in plasma exista in stare libera (functioneaza ca un cofactor al proteinei C activate) si in stare legata la C4b binding protein din sistemul complement; Factori de pe suprafata celuleiFactorul tisular (III) sau este o lipoproteina prezenta constitutiv in membrana unorTromboplastina tisulara celule (fibroblaste perivasculare, celule epiteliale si gliale) se leaga la factorul VIIa care initiaza calea extrinseca

** Component Rol

Factori de pe suprafata celulei - continuareFosfolipide procoagulante Fosfolipide acide (in principal fosfatidil serina) prezente pe suprafata plachetelor sangvine activate si alte celule tisulare; functioneaza ca un component al unor complexe de activare a factorului X si protrombinei; functioneaza ca parte lipidica a TFTrombomodulina situs de legare al trombinei de pe suprafata celulelor endoteliale; in complex cu trombina activeaza proteina C

** Fiecare factor de coagulare este sintetizat in ficat si prezinta o secventa semnal N-terminala tipica proteinelor care urmeaza a fi exportate. In timpul tranzitului in RE secventa semnal este indepartata hidrolitic si zimogenul este secretat in fluxul sangvin.Un fragment de circa 200 resturi de aminoacizi de la capatul C-terminal al fiecarui zimogen prezinta omologii cu tripsina si contine in situsul activ triada Ser, Asp, His. In ansamblu, zimogenele contin o serie de domenii ce sunt omoloage cu parti dintr-alte proteine precum EGF (epidermal growth factor) si fibronectina domenii implicate in interactii specifice intre proteaze, substratele lor fiziologice, cofactori si/sau inhibitorii lor fiziologici.

**II, VII, IX si X omologie la capatul N-terminal: proprepeptida-10-12 resturi Gla, 2 domenii Kringle si un domeniu catalitic

** Factorul tisular (III) -proteina transmembranara - 263 aa (37 KD)-nu circula prin plasma - receptor pentru initierea coagularii ca urmare a lezarii unui vas de sange -indusa de: endotoxina, TNF, interleukina 1 - eliberate la nivelul endoteliului -pentru activare necesita legarea la fosfolipide membranare -domeniul extracelular - resturile 1-219 - receptorul pentru initierea caii extrinseci - are 3 situsuri de glicozilare si 4 Cys care probabil formeaza 2 punti disulfurice; -domeniul trans-membranar - resturile 220-242; -domeniul intracelular - resturile 243-263

**Factorul tisular (TF) este o lipoproteina fara activ enzimatica, exprimata constitutiv pe suprafata unor celule ce nu intra normal in contact cu plasma. Lezarea unor astfel de celule si expunerea lor la plasma initiaza coagularea in exteriorul unui vas lezat. Celulele endoteliale exprima TF cand sunt stimulate de endotoxina, TNF sau IL-1 care sunt implicate in formarea trombusului in conditii patologice. Calea extrinseca a coagulariiTF eliberat leaga factorul VII (proconvertina) cu formarea complexului TF.VIIa ce activeaza factorii IX si X. Complexul TF.VIIa accelereaza activarea factorului X de cca 30 000 ori. Este posibila si legarea TF.VIIa la factorul IXa (nearatat!), care in prezenta fosfolipidelor si Ca2+ formeaza complexul tenase (TF.VIIa. IXa. FL. Ca2+) ce activeaza factorul X.

**Calea intrinseca a coagulariiIndusa de elemente intrinseci din sange eliberate de lezarea peretelui vasului de sange, care activeaza factorul XIn vitro, coagularea pe calea intrinseca poate fi initiata cand factorul XII, pre-kalikreina si HMWK (high-molecular weight kininogen) se leaga la o suprafata artificiala. Factorul XIIa activat induce activarea secventiala a factorilor XII XI IXVIII X V II I.Factorii XII si XI - factori de contact deoarece intra in contact cu situsul leziunii incarcat negativ si declanseaza si activarea altor factori de coagulareHMWK proteina a sistemului de coagulare a sangelui, dar si a sistemului kinin-kalikreina; se absoarbe pe suprafata biomaterialelor cu care sangele vine in contact in vivo; cofactor in activarea kalikreinei si a factorului XII, fara activitate enzimatica

**Kalikreine Ser proteinaze din sange si tesuturi care activeaza kininogenele la kinine.Kinine sistem enzimatic din plasma care este indus de factorul XII activat. Activarea prekalikreinei la kalikreina de catre XIIa are loc pe suprafata biomaterialelor si in faza fluida Functia majora a kallikreinei este de a amplifica activarea sistemelor de coagulare si fibrinoliza. De asemenea, kalikreina scindeaza HMWK cu formarea bradikininei, un puternic mediator inflamator ce produce vasodilatie in timpul recrutarii leucocitelorFactor XIIFactor XIIaprekalikreinakalikreinaHMWKbradikininaSuprafata HMWKSistemul kininelor

**HMWKHMWKprekalikreinakalikreinaXIIa XIISuprafata negativaXIIaXIXIaVIIplasminogencomplementTransformarea factorului XII in -XIIa: adsorbtia f. XII pe o suprafata electronegativa, ce induce o modificare conformat., o scindare a unei legaturi peptidice, soldate cu aparitia activitatii enzimatice fara reducerea MM. Factorul -XIIa activeaza prekalikreina in prezenta HMWK (high molecular weight kininogen). Kalikreina activeaza -XIIa fixat pe suprafata electronegativa realizand activarea totala cu formarea -XIIa (cu MM mai mica). Kalikreina si factorul -XIIa sunt eliberati in mediu si amplifica activarea sistemului de contact. Multiple functii ale f. XII: activarea factorilor XI si VII, a plasminogenului si a sistemului complement.

*Prof. Dr. Dana Iordachescu*

Prof. Dr. Dana Iordachescu