control intern sinaia 17.01

Dr. Eugenia Aurora NegutDr. Eugenia Aurora Negut Dr. Adrian BancescuDr. Adrian Bancescu

TESTE DE DIAGNOSTICTESTE DE DIAGNOSTIC

Linie ascendenta in perfectionareLinie ascendenta in perfectionare

Alegerea Ag Alegerea Ag – Acopera toate tipurile si subtipurile Acopera toate tipurile si subtipurile (HIV1 M,O; HIV2)(HIV1 M,O; HIV2)– Amestec Amestec

Ag recombinanteAg recombinanteAg sinteticeAg sintetice

Principii noi de constructie Principii noi de constructie (detectare IgM, IgG)(detectare IgM, IgG)– SandwichSandwich– Captura de AcCaptura de Ac

Detectare concomitentaDetectare concomitenta– Ag viral circulant (Ag p24)- 25 pg/mlAg viral circulant (Ag p24)- 25 pg/ml– Ac antiviraliAc antivirali


Rezulta:Rezulta:

Sensibilitate crescuta 99,7%Sensibilitate crescuta 99,7%

Specificitate crescuta 99,9%Specificitate crescuta 99,9%

Micsorarea “ferestrei” imunologiceMicsorarea “ferestrei” imunologice– Detectare Ag p24 in a 16-a ziDetectare Ag p24 in a 16-a zi– Detectare Ac in a 22-a ziDetectare Ac in a 22-a zi

Facilitare in efectuarea testelorFacilitare in efectuarea testelor– Modificarea culorilor in functie de Modificarea culorilor in functie de etapa reactieietapa reactiei


In practica apare o discrepanta In practica apare o discrepanta intre intre – Gradul de acuratete(exactitate) Gradul de acuratete(exactitate)

Pe care il poate atinge tehnic testulPe care il poate atinge tehnic testul

Pe care il poate realiza de rutina Pe care il poate realiza de rutina laboratorul laboratorul

Se impune necesitatea unui Se impune necesitatea unui

Program de Asigurare a CalitatiiProgram de Asigurare a Calitatii– Care ofera rezultate Care ofera rezultate

CorecteCorecte

FideleFidele

AcurateAcurate

– Care este Care este Verificat ca eficacitate de Programul de Evaluare Verificat ca eficacitate de Programul de Evaluare EXTERNA a Calitatii (Proficiency testing, EQA)EXTERNA a Calitatii (Proficiency testing, EQA)

Dependent de un bun Program de Control INTERN al Dependent de un bun Program de Control INTERN al Calitatii (PCIC)Calitatii (PCIC)

PROGRAM DE CONTROL INTERN PROGRAM DE CONTROL INTERN AL CALITATIIAL CALITATII

Se refera la totalitatea masurilorSe refera la totalitatea masurilor– care se iau in cursul fiecarei care se iau in cursul fiecarei testaritestari

– pentru asigurarea pentru asigurarea validitatii si validitatii si increderii in testarea efectuataincrederii in testarea efectuata

Nu asigura ca rezultatele Nu asigura ca rezultatele – sunt acurate (apanajul testului ales)sunt acurate (apanajul testului ales)– sunt transcrise corect sunt transcrise corect – apartin persoanei respeciveapartin persoanei respecive

PROGRAM DE CONTROL INTERNPROGRAM DE CONTROL INTERNAL CALITATIIAL CALITATII

Etapele PCIC in examenul de screening Etapele PCIC in examenul de screening al infectiei HIV (teste ELISA) pentrual infectiei HIV (teste ELISA) pentru– serodiagnostic si serodiagnostic si – serosupraveghereserosupraveghere

– A. Conditia probei de testatA. Conditia probei de testat– B. Calitatea echipamentuluiB. Calitatea echipamentului– C. Calitatea testuluiC. Calitatea testului

KitKitlotlot

– D. Modalitatea de executie D. Modalitatea de executie – E. Rezultatele testuluiE. Rezultatele testului– F. Evidentele fiecarei testariF. Evidentele fiecarei testari


A. A. Conditia probei de testatConditia probei de testat

Inspectia probei Inspectia probei La primireLa primire

Inainte de testareInainte de testare

– Aprecierea conditiei biologiceAprecierea conditiei biologiceSe evita serurile Se evita serurile – Lipemice - CheaguriLipemice - Cheaguri– Hemolizate - ParticuleHemolizate - Particule– ContaminateContaminate

– Etichetare corectaEtichetare corecta

Omogenizarea probeiOmogenizarea probei


B. B. Calitatea echipamentuluiCalitatea echipamentului

C. C. Calitatea kit-uluiCalitatea kit-ului

Alegerea tipului de kitAlegerea tipului de kit

Verificare calitatii lotului de Verificare calitatii lotului de lucrulucru


C. C. CalitateaCalitatea kit-uluikit-uluiAlegerea tipului de kitAlegerea tipului de kit– Conditii Conditii

Sensibilitate > 99,7% Sensibilitate > 99,7% δδ + mare + mare– Probabilitate mare de identificare corecta a Probabilitate mare de identificare corecta a serurilor pozitiveserurilor pozitive

Specificitate > 99,8% Specificitate > 99,8% δδ – mare – mare – Probabilitate mare de identificare corecta a Probabilitate mare de identificare corecta a serurilor negativeserurilor negative

Verificare calitatii lotului Verificare calitatii lotului – Data expirariiData expirarii– Se compara controalele Se compara controalele

interne / externe ale interne / externe ale lotului respectiv / loturilor anterioare lotului respectiv / loturilor anterioare

– Rezultate asemanatoare -> se accepta in Rezultate asemanatoare -> se accepta in lucrulucru


D. D. Modalitatea de executieModalitatea de executie

1.Respectarea instructiunilor 1.Respectarea instructiunilor aferenteaferenteMod de preparare a reactivilorMod de preparare a reactivilorStocarea reactivilor preparatiStocarea reactivilor preparatiValabilitatea reactivilor Valabilitatea reactivilor preparati (termen)preparati (termen)Timpi de incubareTimpi de incubareModalitati de spalareModalitati de spalareTermen de citireTermen de citire


2.Probe de control utilizate2.Probe de control utilizateReguli generaleReguli generale– Se va folosi un set de probe de control Se va folosi un set de probe de control externeexterne si unul de probe de control si unul de probe de control interneinterne la fiecare testarela fiecare testare

– Utilizarea probelor de control Utilizarea probelor de control Simultan cu probele necunoscuteSimultan cu probele necunoscuteIn aceleasi conditii supuse testariiIn aceleasi conditii supuse testarii

– Criterii comune de apreciere a rezultatelor Criterii comune de apreciere a rezultatelor pentru:pentru:

Probele de control Probele de control Probe de testatProbe de testat

– Rezultate acceptabile pentru probele de Rezultate acceptabile pentru probele de controlcontrol

Testare validaTestare validaRezultate corecteRezultate corecte


2.Probe de control utilizate2.Probe de control utilizateTipuri:Tipuri: Probe de control Probe de control interneinterne

Martorii inclusi de manufacturieri in kitMartorii inclusi de manufacturieri in kit– se folosesc de cate ori se utilizeaza kit-ulse folosesc de cate ori se utilizeaza kit-ul– sunt valabili numai pentru kit-ul / lotul respectiv sunt valabili numai pentru kit-ul / lotul respectiv deoarece ei sunt supusi:deoarece ei sunt supusi:

Unei ajustari Unei ajustari • • se obtine o scara de valori in se obtine o scara de valori in

care secare se regasesc probele (+) si (-)regasesc probele (+) si (-)

Unei stabilizari artificialeUnei stabilizari artificiale• • invelirea variabila cu Ag a invelirea variabila cu Ag a

godeurilorgodeurilor conduce la fluctuatii ale ODconduce la fluctuatii ale OD• • stabilizarea -> valori ale OD stabilizarea -> valori ale OD

asemanatoareasemanatoare de la lot la lotde la lot la lot

– Rolul lor: validarea testelorRolul lor: validarea testelor


2.Probe de control utilizate2.Probe de control utilizate

Tipuri:Tipuri:Probe de control Probe de control externeexterne Probe de control preparateProbe de control preparate– in laboratorin laborator– din pool-uri de serdin pool-uri de ser

Trei tipuriTrei tipuri– Clar negativeClar negative– Intens pozitiveIntens pozitive– Borderline (slab +) Borderline (slab +)

cel mai important cel mai important

sesizeaza posibilitatea etichetarii fals (+) sesizeaza posibilitatea etichetarii fals (+) sau (–) pentru o proba cu OD in apropierea COsau (–) pentru o proba cu OD in apropierea CO


2.Probe de control utilizate2.Probe de control utilizate

Tipuri:Probe de control Tipuri:Probe de control externeexterneRolul lorRolul lor– Monitorizeaza performanta placiiMonitorizeaza performanta placii– Monitorizeaza variatia de la lot la lot Monitorizeaza variatia de la lot la lot

((≠ controalele interne “ajustate”)≠ controalele interne “ajustate”)– Permite alcatuirea graficelor de controlPermite alcatuirea graficelor de control

⇩⇩

Sesizarea disfunctionalitatilor Sesizarea disfunctionalitatilor survenite in efectuarea testelorsurvenite in efectuarea testelor


Obtinerea probelor de control Obtinerea probelor de control externeexterne

Martor pozitiv: pool de seruri(+)Martor pozitiv: pool de seruri(+)

Martor negativ: pool de seruri(–)Martor negativ: pool de seruri(–)

Martor “borderline” (slab +)Martor “borderline” (slab +)– pool seruri (+)pool seruri (+)– se executa 6 dilutii 10se executa 6 dilutii 10-1-1 - 10 - 10-6-6 in ser in ser negativnegativ

– fiecare dilutie se testeaza de 6 orifiecare dilutie se testeaza de 6 ori– se stabileste se stabileste OD pentru fiecare dilutieOD pentru fiecare dilutie– se alege dilutia cea mai mare la care OD se alege dilutia cea mai mare la care OD e inca peste COe inca peste CO



Martor “borderline”Martor “borderline”

cel mai important martor externcel mai important martor extern

o valoare OD foarte joasao valoare OD foarte joasa– ofera valori fluctuante < CO >ofera valori fluctuante < CO >– variatii de lucru absolut normalevariatii de lucru absolut normale

o valoare OD foarte mareo valoare OD foarte mare– ofera totdeauna valori > COofera totdeauna valori > CO– nu se poate aprecia calitatea testului nu se poate aprecia calitatea testului in cazul unei probe cu titru mic de Ac in cazul unei probe cu titru mic de Ac



Serurile trebuie sa fieSerurile trebuie sa fie– omogeneomogene– sterile (filtre milipore 200nm)sterile (filtre milipore 200nm)– fara prezervant fara prezervant



TESTAREA REPRODUCTIBILITATIITESTAREA REPRODUCTIBILITATII

Reproductibilitate intra-testReproductibilitate intra-testmartorul se testeaza in triplu pe aceeasi martorul se testeaza in triplu pe aceeasi placaplaca

Reproductibilitate inter-test Reproductibilitate inter-test exercitiul de mai sus se repeta la 3 exercitiul de mai sus se repeta la 3 testari consecutivetestari consecutive

Respectivele variatii nu trebuie Respectivele variatii nu trebuie sa depaseasca 10-20%sa depaseasca 10-20%



TESTAREA IN PARALEL CU VECHIUL LOT DE TESTAREA IN PARALEL CU VECHIUL LOT DE CONTROL (recomandari)CONTROL (recomandari)

Noul lot de control Noul lot de control – sa inregistreze OD apropiate de cel anteriorsa inregistreze OD apropiate de cel anterior– prin mici ajustari ale titruluiprin mici ajustari ale titrului

Pana la schimbarea lotului Pana la schimbarea lotului – sa se testeze concomitent si vechiul si noul sa se testeze concomitent si vechiul si noul lot de controale lot de controale

– cateva saptamanicateva saptamani

La sfarsitul perioadei se vor reface La sfarsitul perioadei se vor reface calculele calculele – se va stabili o medie a OD si s cumulativa se va stabili o medie a OD si s cumulativa (lot vechi si nou)(lot vechi si nou)



STOCAREA PROBELOR DE CONTROLSTOCAREA PROBELOR DE CONTROL

Se repatizeaza in cantitati Se repatizeaza in cantitati suficiente unei saptamani de suficiente unei saptamani de testaretestare

Criotuburile se pastreaza la Criotuburile se pastreaza la temperaturi intre -20temperaturi intre -20˚C si ˚C si -40-40˚C˚C

Criotubul pentru testarea Criotubul pentru testarea saptamanala se pastreaza la saptamanala se pastreaza la

2˚C - 8˚C2˚C - 8˚C– ce nu s-a utilizat, se arunca !!!ce nu s-a utilizat, se arunca !!!


2.Probe de control utilizate2.Probe de control utilizateUtilizarea datelor furnizate de:Utilizarea datelor furnizate de:

– Probele de control interneProbele de control interneInstructiunile kit-ului prevadInstructiunile kit-ului prevad– limitele in care se pot incadra valorile limitele in care se pot incadra valorile martorilor martorilor

– excluderea unui martor duce excluderea unui martor duce fie la modificarea calculului cut-off fie la modificarea calculului cut-off fie la invalidarea placiifie la invalidarea placii

– Probele de control externeProbele de control externeConfirma corectitudinea testuluiConfirma corectitudinea testuluiMonitorizeaza efectuarea testarilor in Monitorizeaza efectuarea testarilor in generalgeneral


MONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREMONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREPrincipiuPrincipiu

Valoarea OD e direct proportionala cu Valoarea OD e direct proportionala cu concentratia Acconcentratia Ac

⇩ ⇩ Rezultatul calitativ e caracterizat de o Rezultatul calitativ e caracterizat de o determinare cantitativadeterminare cantitativa (OD in relatie cu valoarea CO)(OD in relatie cu valoarea CO)

⇩⇩ Valorile controalelor pot fi tratate Valorile controalelor pot fi tratate statisticstatistic

⇩ ⇩ Se vor alcatui grafice Se vor alcatui grafice (adaptare Levy-Jennings) (adaptare Levy-Jennings)


MONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREMONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTARE

Tratarea statisticaTratarea statistica– Stabilirea regulilor de acceptabilitate / Stabilirea regulilor de acceptabilitate / rejectierejectie

– Stabilirea regulior de controlStabilirea regulior de control

O singura regula de control O singura regula de control – Nu este suficienta pentru detectarea tuturor Nu este suficienta pentru detectarea tuturor semnalelor de eroaresemnalelor de eroare

– Poate conduce la rejectari gresitePoate conduce la rejectari gresitedatorate unor erori intamplatoare si datorate unor erori intamplatoare si

nu unor probleme reale de calitatenu unor probleme reale de calitate

Se va utiliza o combinatie de reguliSe va utiliza o combinatie de reguli– Maximizeaza detectarea erorilor Maximizeaza detectarea erorilor – Minimalizeaza rejectarile falseMinimalizeaza rejectarile false



Pot fi utilizatePot fi utilizate

– Regula acceptabilitatii prin Regula acceptabilitatii prin utilizarea deviatiei standard (s)utilizarea deviatiei standard (s)

– Calcularea coeficientului de variatie Calcularea coeficientului de variatie (CV)(CV)

– Inregistrarea grficelor de controlInregistrarea grficelor de control



Regula acceptabilitatii prin Regula acceptabilitatii prin utilizarea deviatiei standard (s)utilizarea deviatiei standard (s)– s reprezinta o masurare a dispersiei s reprezinta o masurare a dispersiei fata de mediefata de medie

xn = valoarea OD a controlului sau OD/COx = media OD a controalelor sau a OD/COx – xn = valoarea “absoluta”N = numarul de controale luate in consideratie

• 15-30 determinari pentru “borderline”• > 100 determinari pentru “strong” (+)

Σ(x - xn)2

NS =

MONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREMONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTARESe pot accepta valori ale martorilor Se pot accepta valori ale martorilor (controalelor) care se incadreaza intre(controalelor) care se incadreaza intre

•• ± 1s± 1s

• • ± 2s± 2s

• • ± 3s± 3s

± 1s -> nivel de confidenta 68%± 1s -> nivel de confidenta 68%

⇩ ⇩– 68% sansa 68% sansa

ca valoarea OD care nu se incadreaza in acest ca valoarea OD care nu se incadreaza in acest “range” “range”

sa reprezinte o problema semnificativa de calitatesa reprezinte o problema semnificativa de calitate

nu o eroare intamplatoare nu o eroare intamplatoare


x

x

x

x


± 2s -> nivel de confidenta 95%± 2s -> nivel de confidenta 95% ⇩ ⇩95% sansa 95% sansa

ca valoarea OD ce nu se incadreaza in acest “range” ca valoarea OD ce nu se incadreaza in acest “range” sa reprezinte o problema semnificativa de calitate sa reprezinte o problema semnificativa de calitate nu o eroare intamplatoarenu o eroare intamplatoare

± 3s -> nivel de confidenta 99%± 3s -> nivel de confidenta 99% ⇩ ⇩

Se vor elimina in intregime rejectarile pentru erori Se vor elimina in intregime rejectarile pentru erori intamplatoare intamplatoare

dardarse vor diminua semnificativ sansele de detectare a se vor diminua semnificativ sansele de detectare a unui adevarat semnal de alarma privind controlul de unui adevarat semnal de alarma privind controlul de calitatecalitate


x

x


MONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREMONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTARESe recomanda: Se recomanda: ± 2,5s ± 2,5s

± 2s -> prea strict ± 2s -> prea strict

1 control din 20 va trebui rejectat1 control din 20 va trebui rejectat

Inscrierea datelor in graficInscrierea datelor in graficOD sau rata OD/CO (preferabil) se inscrie pe OD sau rata OD/CO (preferabil) se inscrie pe ordonata (y)ordonata (y)

Numarul de testari se inscrie pe abscisa (x)Numarul de testari se inscrie pe abscisa (x)

xx

+ 2,5

MEDIA

- 2,5

OD

sau

OD/CO

Numar testari

Limitele de acceptabilitate pentru valorile OD sau OD/CO ale controlului



Coeficientul de variatieCoeficientul de variatieindicator al reproductibilitatii indicator al reproductibilitatii controalelorcontroalelor

reflecta dispersia valorilor OD in jurul reflecta dispersia valorilor OD in jurul mediei mediei

CV CV ≥ 20% indica ≥ 20% indica – pipetare diferita (inegala)pipetare diferita (inegala)– necesitatea recalibrarii pipetelornecesitatea recalibrarii pipetelor

Se recomnda Se recomnda – schimbarea varfului la fiecare pipetare schimbarea varfului la fiecare pipetare – chiar daca este vorba de acelasi martor chiar daca este vorba de acelasi martor

x

sCV = x 100

PROGRAM DE CONTROL INTERN AL PROGRAM DE CONTROL INTERN AL CALITATIICALITATII


Utilizarea graficelor de controlUtilizarea graficelor de control

– Se utilizeaza 2 axe de coordonate Se utilizeaza 2 axe de coordonate Y se inregistreaza valoarea raportului Y se inregistreaza valoarea raportului OD/CO al martorului respectiv la fiecare OD/CO al martorului respectiv la fiecare testaretestare

X se inregistreaza numarul testariiX se inregistreaza numarul testarii

– Se calculeaza media valorilor OD/CO Se calculeaza media valorilor OD/CO si se traseaza pe grafic si se traseaza pe grafic

– Se observa daca apar “shifts”-uri sau Se observa daca apar “shifts”-uri sau “trends”-uri“trends”-uri




Shift Shift – Cand valorile OD/CO de la 6 testari Cand valorile OD/CO de la 6 testari consecutive cad de aceeasi parte a liniei consecutive cad de aceeasi parte a liniei medieimediei

– Sugereaza aparitia unei modificari majoreSugereaza aparitia unei modificari majores-a trecut la un alt lot al kit-uluis-a trecut la un alt lot al kit-ului

reactivi noi (inclusiv tamponul de spalare)reactivi noi (inclusiv tamponul de spalare)

modificarea temperaturii de incubaremodificarea temperaturii de incubare

un tehnician nou (alta maniera de pipetare)un tehnician nou (alta maniera de pipetare)

schimbare de echipament (washer, pipete)schimbare de echipament (washer, pipete)




Trend Trend – Cand valorile OD/CO de la 6 testari Cand valorile OD/CO de la 6 testari consecutive se distribuie in aceeasi consecutive se distribuie in aceeasi directie directie ascendentaascendenta / / descendentadescendenta (chiar (chiar daca traverseaza linia mediei)daca traverseaza linia mediei)

– Sugereaza o lenta schimbare de parametriSugereaza o lenta schimbare de parametrideteriorare de reactivideteriorare de reactivi

modificari de echipament (pipete decalibrate)modificari de echipament (pipete decalibrate)

Cea mi frecventa cauza a “shifts” si Cea mi frecventa cauza a “shifts” si “trends”:“trends”:Deteriorarea reactivilor Deteriorarea reactivilor

cel mai frecvent: conjugatulcel mai frecvent: conjugatul




TREND SHIFT

OD sau OD/CO

NUMAR TESTARTI

+ 2,5 S

MEDIA

- 2,5 S

Limitele de acceptabilitate pentru valorile OD sau OD/CO ale controlului


MONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREMONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREObservatii Observatii Nu se schimba simultan Nu se schimba simultan – Lotul din kit si Lotul din kit si – Lotul de controlLotul de control

La schimbarea lotului din kit poate La schimbarea lotului din kit poate apare un shift apare un shift – La martorii interni La martorii interni

este minor este minor pana la 1s nu necesita interventiepana la 1s nu necesita interventie

– La martorii externi La martorii externi < 2s< 2s– recalcularea medieirecalcularea mediei– s cumulativ pe 3 loturis cumulativ pe 3 loturi

> 2s> 2s– se anunta producatorulse anunta producatorul– depreciere a kitu-luidepreciere a kitu-lui



ObservatiiObservatii

Decizia finala de rejectare a Decizia finala de rejectare a placii apartine sefului de placii apartine sefului de laborator laborator – Chiar daca unele controale nu se Chiar daca unele controale nu se integreaza integreaza

– El poate aprecia daca totusi El poate aprecia daca totusi rezultatele pot fi luate in rezultatele pot fi luate in consideratieconsideratie



E.E.Rezultatele testariiRezultatele testarii

Probe reactiveProbe reactive / repetat reactive/ repetat reactive

Probe negativeProbe negative

Probe situate in “zona gri”Probe situate in “zona gri”– Valorile OD se plaseaza intr-o zona:Valorile OD se plaseaza intr-o zona:

intre valoarea cut-off si intre valoarea cut-off si ± 10% din valoarea ± 10% din valoarea cut-off (populatie cu risc scazut)cut-off (populatie cu risc scazut)

intre valoarea cut-off si ± 20% din valoarea intre valoarea cut-off si ± 20% din valoarea cut-off (populatie cu risc crescut)cut-off (populatie cu risc crescut)

– Aceste probe pot fi dovada:Aceste probe pot fi dovada:unei seroconversii timpuriiunei seroconversii timpurii

existentei unui titru redus al Acexistentei unui titru redus al Ac

unei reactivitati fals (+)unei reactivitati fals (+)


MONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREMONITORIZAREA PROCESULUI DE TESTAREAtitudineAtitudine Retestare in dubluRetestare in dublu ⇩⇩– acelasi rezultat (zona gri)acelasi rezultat (zona gri) ⇩ ⇩

Testare pe alt tip de testTestare pe alt tip de test ⇩⇩– zona grizona gri ⇩⇩

Test de confirmare / monitorizare Test de confirmare / monitorizare seroconversieseroconversie



F.F.Evidentele fiecarei testariEvidentele fiecarei testari

Date inregistrate Date inregistrate – Data testariiData testarii– Nume kit, numar lotNume kit, numar lot– Data expirariiData expirarii– Valoarea cut-offValoarea cut-off– Valorile OD pentru probele de Valorile OD pentru probele de control interne si externecontrol interne si externe

– Executant Executant

control intern sinaia 17.01

Documents