elisa _ enzyme
Post on 19-Jul-2016
68 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
ELISA – Enzyme Linked ELISA – Enzyme Linked ImmunoSorbent AssayImmunoSorbent Assay
ELISA si EIA Metode imunologiceMetode imunologice Replici a imunodeterminarilor Replici a imunodeterminarilor
realizate cu izotopi radioactivi (IRMA, realizate cu izotopi radioactivi (IRMA, RIA)RIA)
ELISA/EIA Incepand din 1980, a fost dezvoltata
utilizarea enzimelor si fluoroforilor ca substante de marcaj in imunodeterminari, in timp ce cea a izotopilor a scazut la 25%.
In prezent, enzimele se utilizeaza in proportie de 35%, iar substantele de marcaj fluorescente in proportie de 15%.
Dintre enzime, peroxidaza din hrean (HRP) si fosfataza alcalina sunt cele mai utilizate.
ELISA Metoda predominanta in Metoda predominanta in
determinarile din domeniul determinarile din domeniul medicinei, biotehnologiei si stiintelor medicinei, biotehnologiei si stiintelor agricoleagricole
Metoda care masoara cantitatea de Metoda care masoara cantitatea de antigen dintr-o probaantigen dintr-o proba
Cautari ELISA in ScienceDirect database
Utilizarea ELISA in diferite domenii de activitate
Utilizarea ELISA in analiza alimentelor OMGOMG MicotoxineMicotoxine Substante alergeneSubstante alergene AntibioticeAntibiotice Originea carnii/laptelui/pesteluiOriginea carnii/laptelui/pestelui Alimente iradiate Alimente iradiate
ELISAELISA competitiva cu competitiva cu antigene marcateantigene marcate Competitie Competitie
intre intre antigene antigene marcate si marcate si antigene antigene nemarcate nemarcate pentru legare pentru legare la anticorpla anticorp
ELISAELISA competitiva cu competitiva cu anticorpi marcatianticorpi marcati
CompetitCompetitie intre ie intre antigene antigene imobilizaimobilizate si te si antigene antigene libere libere pentru pentru legare la legare la anticorpanticorp
ELISAELISA tip sandwich tip sandwich
ELISA sandwich in care marcarea anticorpului se realizeaza cu biotina-biotina-streptavidina -HRPstreptavidina -HRP
ELISA
ELISA
ELISAELISA necompetitiva necompetitiva cu anti-anticorp marcatcu anti-anticorp marcat
High Sensitivity ELISA
ELISA sandwich conventionala, care utilizeaza pentru detectie marcajul Biotina-Streptavidina-HRP
High Sensitivity ELISA
Reactivul de amplificare I contine biotinil-tiramide. HRP Reactivul de amplificare I contine biotinil-tiramide. HRP converteste moleculele de biotinil-tiramida in derivati inalt converteste moleculele de biotinil-tiramida in derivati inalt reactivi (radicali liberi), care se leaga covalent de orice reactivi (radicali liberi), care se leaga covalent de orice proteina din godeu (ex. Proteine de blocare). proteina din godeu (ex. Proteine de blocare).
High Sensitivity ELISACantitatea de biotinil-tiramida care a reactionat este direct proportionala cu cantitatea de HRP din godeu. Dupa incubare, biotinil-tiramida care nu s-a legat de proteinele din godeu este indepartata prin spalare. Se adauga reactivul II, care contine Streptavidin-HRP, care se leaga biotina. Astfel, se obtine o amplificare a activitatii enzimatice.
ELISAELISA
ELISAELISA – folii de protectie a – folii de protectie a placilorplacilor
Cititoare ELISA
ELISAELISA - carti - carti
http://sciencebookss.blogspot.com/2009/05/elisa-guidebook.html
ELISA – avantaje fata de alte metode utilizate in detectia melaminei in laptele praf
ELISA – avantaje fata de alte metode utilizate in analiza alimentelor
• Simpla• Reproductibila• Permite cuantificarea • Permite determinarea simultana a mai multor probe• Mai ieftina decat alte metode
top related