1) laboratorul de microbiologie

Upload: doris-adelina-zamfir

Post on 11-Oct-2015

233 views

Category:

Documents


6 download

TRANSCRIPT

  • MICROBIOLOGIE, LP1, SEMESTRUL I 2012(Dr. Maria Nica, Dr. Ioana Berciu)* LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE:- ORGANIZARE, FUNCTII

    * MASURI DE PROTECTIE A MUNCII IN LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE

  • LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE:- ORGANIZARE, - FUNCTIIActivitatea din laboratoarele de microbiologie este reglementata prin acte normative (ordine, norme) care aplica recomandarile bazate pe observatii, studii, experimente ale grupurilor de experti (ghiduri, manuale). In prezent, in Romania, activitatea laboratoarelor de analize medicale este reglementata prin Ordinul 119 al Ministrului sanatatii, publicat in Monitorul oficial nr.142/17 februarie 2004, completat cu Norma din 20 august 2007 privind functionarea laboratoarelor de analize medicale, publicata in Monitorul oficial 617 din 6 septembrie 2007 (M.Of. 617/2007).

  • OBIECTIVELE Laboratorului de Microbiologie:

    Laboratorul de microbiologie medicala este locul unde se desfasoara toate activitatile necesare pentru diagnosticul microbiologic.Organizarea este astfel conceputa incat sa indeplieasca urmatoarele functii:1. Sa asigure un spatiu corespunzator desfasurarii algoritmului de diagnostic microbiologic in vederea izolarii, identificarii si testarii sensibilitatii la antibiotice a microorganismelor implicate in etiologic bolilor infectioase,2. Sa previna contaminarea prelevatelor biologice,3. Sa previna raspandirea microorganismelor patogene in afara laboratorului,4. Sa previna imbolnavirile profesionale ale personalului, a infectiilor de laborator

  • OBIECTIVELE Laboratorului de Microbiologie:Diagnosticul microbiologic vizeaza urmatoarele obiective:1. Stabilirea prezentei sau absentei unor microorganisme in prelevatul clinic.2. Identificarea microorganismului: apartenenta la gen, specie, subspecie, tip etc, pe baza unor proprietati ale acestuia.3. Evaluarea implicarii microorganismului intr-un proces infectios.4. Testarea sensibilitatii la antibiotice si chimioterapice.5. Monitorizarea eficientei tratamentului antibacterian.6. Depistarea purtatorilor sanatosi de germeni patogeni, in activitatea de preventie, profilaxie.

  • AGENTI ETIOLOGICI -MICROORGANISME CU POTENTIAL INFECTIOSExistenta grupurilor distincte de agenti infectiosi:

    - bacterii,- virusuri,- prioni,- fungi,- protozoare.

  • LABORATOARE DE MICROBIOLOGIE IN DOMENII CONEXE

    * Microbiologie pentru sanatate publica:- epidemiologie,- igiena, Microbiologie veterinara- Microbiologie farmaceutica, industria medicamentelor, - Microbiologie alimentara,* Laboratoare profilate pe:- Microbiologie clinica,- Microbiologie epidemiologica,- sanitara,- sanitar- veterinara,- farmaceutica,- alimentara,- biologie moleculara, genetica etc.

  • LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE- ORGANIZAREPentru a-si indeplini functiile, laboratorul de microbiologie este organizat dupa reguli care vizeaza:- amplasarea cladirii- conditii corespunzatore privind absenta curentilor de aer, iluminarea corespunzatoare etc.- respectarea circuitelor obligatorii, pentru prevenirea contaminarii probelor, a personalului, a pacientilor: compartimente cu circulatie controlata, respectarea circuitului probelor.

  • LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE- ORGANIZARE In functie de complexitatea testelor si de tipul patogenilor investigati, spatiul destinat laboratorului este organizat pe urmatoarele consideratii - organizare si personal - teste si procedee procesate - echipamentul folosit - necesitati speciale electrice, pentru aer conditionat si instalatii - echipamente de securitate si sistem de alarma - eliminarea deseurilor infectioaseDesi arhitectii, inginerii, constructorii sunt angajati pentru a desena si a construi spatiul, microbiologul trebuie sa aiba un rol activ pentru a se asigura ca designul si planul general optimizeaza work-flow-ul si eficienta

  • LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE- ORGANIZARECompartimente distincte, cu destinatie bine stabilita, corespunzatoare fiecarei activitati:

    1. Incapere pentru Recoltare probe,2. Incapere pentru Receptionarea, inregistrarea prelevatelor,3. Incapere destinata Procesarii, insamantarii prelevatelor; 4. Compartimente in functie de tipul de prelevat/ calea de transmitere a infectiei (infectii aerogene, digestive), gradul de infectiozitate al prelevatelor patologice, tipul tehnicilor utilizate in diagnosticul microbiologic etc:* Compartiment de Diagnostic microbiologic al prelevatelor normal sterile: lichide de punctie, hemoculturi,* Compartiment de Diagnostic Infectii digestive- Coproculturi, * Compartiment Diagnostic Infectii respiratorii non TBC (exudate nazale si faringiene, spute flora, aspirat bronsic etc),* Compartiment Diagnostic Infectii TBC (tuberculoza), * Compartiment Diverse (uroculturi, secretii otice, oculare, vaginale, uretrale, secretii plagi superficiale, colectii profunde etc),* Compartiment Preparare medii de cultura, * Compartiment Sterilizare (caldura uscata, vapori sub presiune), * Vestiar, Grup sanitar cu dus,* Incaperi destinate depozitarii Reactivilor, stocarii tulpinilor izolate etc.

  • LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE- ORGANIZARE* Impartirea modulara a laboratorului de microbiologie (recomandata pentru maxim de flexibilitate):- activitatile inrudite trebuie amplasate alaturat (de ex. inactivarea deseurilor si spalarea sticlariei),- birourile administrative trebuie situate langa intrarea principala, departe de potentiale activitati contaminante, - suprafetele de lucru (manipularea agentilor infectiosi) trebuie amplasate in spatii izolate,- holurile trebuie sa fie sufiecient de spatioase pentru a putea trece un om pe langa celalalt (ambele sensuri),

  • Repartizarea spatiului in laborator

    - spatii pentru Colorare si microscopie optica, - Microscopie cu camp intunecat si fluorescenta (unde sunt aplicabile)- spatii compartimentate si izolate (sistem complet separat), exclusiv pentru diagnosticul microbiologic al infectiilor cu Mycobacterium spp (Tuberculoza),- Compartiment Serologie (linie ELISA, WesternBlott)- spatii separate, compartimentate, pentru teste moleculare specializate (Biologie moleculara),- Rafturi etichetate pentru aranjarea materialelor consumabile uzuale,- Spatii separate pentru birouri, biblioteca si sala de conferinte

  • Sistemul de aer conditionatin Laboratorul de Microbiologie

    - temperatura constanta in jur de 20-22C si o umiditate relativa de 40-60%,- furnizarea aerului conditionat proaspat in diferite locatii se face prin instalarea difuzoarelor cu ventilatie in tavane,- conductele de aer conditionat sunt construite din metal galvanizat, ceea ce permite curatarea lor in interior in cazul unei contaminari accidentale,- filtre de absobtie pe baza de carbune activ si filtre HEPA,- In laboratoarele cu nivel de biosiguranta ridicat (3-4) trebuie intretinuta o presiune negativa cu respectarea zonelor administrative.

  • Sistemul mecanic

    - Acesta include sistemul electric, instalatiile, comunicatiile si iluminatul:- circuite speciale planificte pentru computere sau alte sisteme consumtoare de energie,- circuite care furnizeaza 110 si 220 volti in functie de necesitati,- telefonul si terminalele calculatoarelor trebuie situate in locuri de unde pot fi folosite cu usurinta,- instalatiile furnizeaza apa calda, apa rece, apa deionizata si apa distilata etc

  • Peretii, podelele, tavanele si mobilierul

    Exista reglementari privind tipul de materiale si finisarea incaperilor si mobilierului de laborator, pentru reducerea la minimum a contaminarii mediului: materiale pentru paviment, vopsele, suprafetele mobilierului, realizarea imbinarilor si unghiurilor intre paviment si peretii laboratorului, care trebuie sa fie usor de curatat (colturi curbe), inaltarea mobilierului de la podea pentru facilitarea manevrelor de curatire etc

  • Peretii, podelele, tavanele si mobilierul

    - peretii trebuie vopsiti cu vopsea lavabila pentru a putea fi curatati, - podelele trebuie acoperite cu linoleum,- tavanul si sursele de lumina artificiala sa nu permita retinerea prafului (fara denivelari) si sa fie accesibile la curatenie si dezinfectie,- mobilierul trebuie sa fie flexibil astfel incat sa poata fi dezasamblat si mutat cand apar schimbari sau cand un nou echipament trebuie instalat,- Suprafetele de lucru (si mobilierul) trebuie sa fie impermeabile la apa si rezistente la dezinfectante si la caldura moderata.

  • PRINCIPALELE ECHIPAMENTE SI DISPOZITIVE UTILIZATE IN LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE

    - echipamente de protectie a prelevatelor si personalului: hote sau cabinete de biosiguranta biologica (de clasa I-IV, in functie de caracterele prelevatelor si/ sau microorganismelor posibil implicate),- echipamente pentru observarea microscopica: microscoape, lupe,- echipamente pentru prelucrarea si incubarea probelor: centrifugi (2500- 5000- 10 000- 20 000 rot/min, cu si fara racire), termostate, incubatoare: 28 C, 35 C, 37 C, 42 C, 56C, balante,- echipamente pentru prepararea mediilor de cultura: aparat pentru demineralizare, distilare apa, aparat automat de preparare si distribuire medii de cultura, pH- metru, higrometru,

  • PRINCIPALELE ECHIPAMENTE SI DISPOZITIVE UTILIZATE IN LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE- echipamente pentru pastrarea reactivilor, mediilor de cultura, tulpinilor bacteriene izolate: frigidere, congelatoare (- 20, - 80C)- echipamente pentru diagnosticul prin metode automate: sisteme automate de izolare si identificare bacteriana si/sau pentru testarea sensibilitatii la antibiotice: BacT/ALERT, BACTEC, MB/ BACT, mini API, VITEK 2 Compact, MICROSCAN,- echipamente pentru sterilizare: etuve/ pupinele, autoclave, lampi UV, - pompa de vid pentru sterilizare prin filtrare etc,- dotari pentru stocarea materialelor contaminate: galeti de inox cu capac, saci autoclavabili, cilindri, cristalizoare cu solutii dezinfectante (preparate zilnic),- instrumentar divers: foarfeci, bisturie, pense, seringi, anse bacteriologice, - Materiale sterile, unica utilizare, consumabile diverse,

  • PRINCIPALELE ECHIPAMENTE SI DISPOZITIVE UTILIZATE IN LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE- truse de coloranti (automate de colorare Gram, Ziehl- Neelsen),- diverse dispozitive: becuri Bunsen, trepiede, stative metalice, cosuri sarma, cutii cu capac pentru transportul probelor, casolete cu capac si orificii, termometre camera, - inventar sticlarie si/sau plastice de laborator: eprubete, tuburi de centrifuga, pipete gradate, pipete Pasteur, baghete de sticla, baloane, pahare, exicatoare, cristalizoare, cilindrii gradati, lame si lamele pentru ex. microscopic, camere de numarat, placi Petri,- recoltoare sterile pentru diverse prelevate patologice: tampoane de exudat, urocultoare, coprorecoltoare, seringi etc.

  • Masuri de biosiguranta si biosecuritate in laboratorul de microbiologie1. Este strict interzis accesul persoanelor straine in laborator,2. Toate prelevatele biologice trebuie considerate a fi cu potential infectios,3. Este obligatorie purtarea echipamentului de protectie (echipamentul de laborator sa fie pastrat separat de cel utilizat in exteriorul laboratorului),4. Este necesara purtarea manusilor de latex, pentru anumite manevre, dar in nici un caz aproape de flacara becului Bunsen,5. Este Interzis a se manca, consuma bauturi sau a se fuma in incinta laboratorului (in orice incapere din institutia medicala),6. Nu se recomanda purtarea unghiilor false, lentilelor de contact de catre personalul care manipuleaza tulpini bacteriene,7. Interzisa pipetarea cu gura,8. Nu se depun pe masa de lucru obiecte de uz personal (genti, serviete, caiete, haine etc), se depoziteaza in vestiar,9. Manipularea produsului patologic se face la flacara becului Bunsen: orice manevra implica flambarea gatului recipientelor din sticla, atat la deschidere, cat si la inchidere, a pipetelor etc, si sterilizarea prin incalzire la incandescenta (la rosu) a ansei bacteriologice (bucla si firul; portansa se flambeaza pe 1/3 din lungimea sa),

  • Masuri de biosiguranta si biosecuritate in laboratorul de microbiologie10. Bucla ansei incarcata cu produs patologic sau cultura bacteriana, se introduce la baza flacariipentru a fi arsa, unde temperatura este mai scazuta (la varful flacarii exista riscul improscarii cu bacterii inca nedistruse termic si contaminarea executantului si mediului),11. In momentul manipularii ansei bacteriologice incarcate cu produs biologic sau cultura bacteriana nu se fac gesture ample, necontrolate, nu se lasa ansa din mana atata timp cat este incarcata cu produs contaminant,12. Inainte de efectuarea unor tehnici de diagnostic bacteriologic, se pregateste protocolul de lucru, se insusesc etapele, se pregateste tot materialul necesar, se controleaza mental evolutia pasilor, pentru a nu exista niciun pericol de raspandire a germenilor sau a contaminarilor incrucisate,13. Nu se alearga, nu se fac miscari bruste in laborator, pentru a nu creea curenti de aer ce ar putea antrena bacterii cu transmitere aerogena, cu potential infectios,14. Pipetele gradate, pipetele Pasteur, lamele, lamelele contaminate, dupa folosirea lor, se imerseaza in solutii dezinfectante proaspete, in cilindrii sau cristalizoare, care sa le acopere in proportie de peste din lungimea lor sau in intregime,15. Toate obiectele contaminate, se introduc in saci autoclavabili, apoi in galeti cu capac (etichetate: Sticlarie sau Plastice) si transportate in Compartimentul Sterilizare, pentru a fi autoclavate,

  • Masuri de biosiguranta si biosecuritate in laboratorul de microbiologie16. Obiectele ascutite, taietoare, intepatoare (ace de seringa, lame de bisturiu- unica folosinta) se elimina fara a fi atinse, in recipiente de plastic galbene (etichetate corect, cu sigla de biosiguranta) inchise etans si eliminate la Deseuri infectioase, pentru a fi incinerate,17. Se respecta codul culorilor in laborator: culoarea galbena inseamna material infectios (saci plietilena de diverse capacitati, cutii carton de transport deseuri infectioase, cutii plastic cu capac pentru obiecte taietoare, intepatoare etc) si culoarea neagra care inseamna deseuri menajere, neinfectioase,18. In cazul unei contaminari accidentale a unei suprafete de lucru cu produs infectios, se anunta imediat persoana care raspunde de activitatea din laborator, se acopera suprafata cu tifon, panza, peste care se toarna solutie dezinfectanta, proaspata, se mentine cel putin 30 min, dupa care se trece a curatarea suprafetei respective,

  • Masuri de biosiguranta si biosecuritate in laboratorul de microbiologie

    19. Se recomanda manipularea cu maxima atentie a substantelor chimice caustice, toxice (acizi, baze, aldehide, cetone, alcooli) folosind echipament adecvat: manusi, masti, ochelari de protectie etc.20. Manevrarea gazelor, a diferitelor aparate elctrice (autoclav, centrifuga, pompa de vid etc), a sticlariei de laborator, pentru evitarea oricarui tip de accident de laborator: explozii, incendii, traumatisme.21. Spalarea cu apa calda si sapun lichid dezinfectant a mainilor, ori de cate ori se incheie o etapa de lucru; se recomanda solutii protectoare ale pielii dupa spalare si stergere cu prosop de hartie de unica folosinta.

  • BIBLIOGRAFIE

    1. Ghid National de Biosiguranta pentru laboratoarele medicale. Ministerul Sanatatii, Romania, 2005 (Traducere Laboratory Biosafety Manual- Ed.a III-a, Organizatia Mondiala a Sanatatii, Geneva, 2oo4.)2. ORDIN nr. 1.301 din 20 iulie 2007, pentru aprobarea Normelor privind funcionarea laboratoarelor de analize medicale. EMITENT: MINISTERUL SANATATII PUBLICE. PUBLICAT N: MONITORUL OFICIAL nr. 617 din 6 septembrie 2007 .3. Agnes Perrin, Anton van Loon. Quality Management in Microbiology, pg.59-68. European Manual of Clinical Microbiology, 1st Edition, April 2012, France. Editors: Giuseppe Cornaglia, Rene Courcol, Jean- Louis Herrmann, Gunnar Kahlmeter, Helene Peigue- Lafeuille, Jordi Vila- SFM, ESCMID.4. Daniel J. Diekema and Michael A. Pfaller. Infection Control Epidemiology and Clinical Microbiology , cap. 6, pag. 73- 84. Manual of Clinical Microbiology 10th Edition, vol.1, 2011. Editors: James Versalovic, Karen C. Carroll, Guido Funke, James H. Jorgensen, Marie Louise Landry, David W. Warnock, ASM Press, Washington, Dc.5. Betty Ann Forbes. Laboratory Physical Design, Management, and Organization.Bailey & Scott`s Diagnostic Microbiology, Cap. 62. 2007. Ed. 12.

    **